Fondazione, preparazione e usi Peptonada

Lui Peptonada Water È un mezzo di arricchimento liquido, non selettivo, utilizzato principalmente come diluente di campioni di cibo o altri materiali. Ciò significa che dal punto di vista chimico è molto semplice, contiene peptone di carne, cloruro di sodio e acqua.

Ha un certo valore nutrizionale, permettendo ad arricchire il campione. Se ci sono batteri maltrattati questo mezzo ha la potenza di riparare la redditività. È particolarmente utile nel recupero di batteri appartenenti alla famiglia Enterobacteriaceae.

Peptonada Acqua in barattoli. Fonte: MSC. Marielsa Gil

Nel caso del recupero di Salmonellas, si raccomanda l'uso della variante dell'acqua di Peptonada tamponata; Questo funge da mezzo di pre-arricchimento del campione, in questo caso contiene altri elementi come il fosfato disótico e il fosfato di dipotassio.

Normalmente l'acqua di Peptonada prepara il pH neutro, tuttavia ci sono altre varianti in cui il pH è necessario per essere 8,5 ± 0,2 (alcalino), perché i batteri destinati a isolare sono alcalophil Vibrio cholerae.

D'altra parte, questo mezzo può essere usato come mezzo di base per i test di fermentazione dei carboidrati.

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Base

I peptonas forniscono i nutrienti richiesti per lo sviluppo batterico, in particolare gli aminoacidi azoto e a catena corta, mentre il cloruro di sodio mantiene l'equilibrio osmotico.

Inoltre, il mezzo consente di disperdere, omogeneizzare e riparare le cellule batteriche danneggiate dalla presentazione ai processi industriali.

Poiché il diluente è l'ideale, sostituendo efficacemente la soluzione fisiologica (SSF) o la soluzione di smorzamento del fosfato (PBS).

La crescita batterica diventa evidente dall'osservazione della torbidità della stessa.

Preparazione

Preparazione fatta in casa (non commerciale)

Pesare 1 gr di peptone e 8,5 gr di cloruro di sodio, dissolversi in 1 litro di acqua distillata. Il pH deve essere regolato a 7.0. Per questo puoi usare il cloruro di sodio 1 n.

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Preparazione usando un mezzo commerciale

Pesare 15 gr di mezzo disidratato e dissolversi in un litro di acqua distillata. Omogeneizzare la miscela. Se necessario, la miscela viene bollita per 1 minuto per aiutare la soluzione totale. Servire in barattoli da 100 ml o da 10 ml di tubi necessari. Autoclavar a 121 ° C per 15 minuti.

Raffreddare e usare in frigorifero. Il pH finale del mezzo è 7,2 ± 0,2.

Il colore del mezzo disidratato è leggero e il beige preparato è chiaro ambra.

Preparazione per test di fermentazione

Alla preparazione precedente - dopo la sterilizzazione - i carboidrati devono essere aggiunti a una concentrazione finale dell'1%, più l'indicatore Andrade (Fuchsina acida) o il fenolo rosso (0 (0.018 g/l). I tubi dovrebbero essere collocati una campana Durham per l'osservazione della formazione di gas.

Altre varianti di acqua di Peptonada

-Acqua di Peptonada tamponata

Questo contiene caseina enzimatica idrolizzata, cloruro di sodio, fosfato diidrogenico di potassio e idrogeno sodio dodecaidrato di sodio fosfato. Il pH finale è 7,0 ± 0,2.

Per prepararsi, pesare 20 gr del mezzo disidratato e dissolversi in 1 litro di acqua distillata. Lasciare per circa 5 minuti. Riscaldare di 1 minuto fino a quando non si dissolve completamente.

Versare su barattoli adeguati in base alla necessità. Sterilizzare usando l'autoclave a 121 ° C per 15 minuti.

-Acqua alcalina peptonada

Pesare 25 gr del mezzo disidratato e dissolversi in 1 litro di acqua. Procedere come descritto sopra. Il pH varia da 8,3 a 8,7.

Utilizzo

L'inoculo viene eseguito posizionando direttamente il campione.

Viene utilizzato per diluire i campioni, specialmente quando si sospetta che potrebbero esserci batteri danneggiati. In generale, le diluizioni sono 1:10 e 1: 100.

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È incubato per 24 ore in aerobiosi a 35-37 ° C.

Campioni di feci

Per i campioni di feci alla ricerca di Salmonella, l'uso di acqua tamponata o tamponata è raccomandato come mezzo di pre-enrique.

Per fare ciò, procedere come segue:

Se le feci sono formate per prendere 1 gr di campione. Se sono liquidi, prendi 1 ml di feci e sospendi in un tubo con 10 ml di acqua peptonada tamponata. Nel caso di tamponi rettali, scaricare il materiale contenuto nel tampone nel tubo con acqua tamponata di Peptonada.

In tutti i casi, mescolare e omogeneizzare il campione molto bene.

Incubare a 37 ° C per 18-24 ore. Successivamente sub-culturale in un brodo di arricchimento come cistina di brodo di selenito o brodo tetrazionale a 37 ° C per 18-24 ore in più. Finalmente crescere in media selettivi per Salmonella, come Agar SS, Agar XLD, Hektoen Agar, tra gli altri.

Campioni di cibo

L'acqua di Peptonada viene utilizzata come mezzo di arricchimento o come un semplice diluente, ma se si cercano specie di salmonella, viene utilizzata come mezzo di pre-enrique, come già descritto.

Nel cibo, procedi come segue:

Per gli alimenti solidi rimpianti di 25 gr del campione e per alimenti liquidi, misura 25 ml dello stesso. Posiziona questa porzione in barattoli contenenti 225 ml di acqua di Peptonada. Mescolare e omogeneizzare il campione.

Se si sospetta che il carico microbico sia elevato, le diluizioni seriali o decimali possono essere eseguite per facilitare il conteggio delle colonie che formano unità (UFC).

Il numero di diluizioni dipenderà dal tipo di campione e dall'esperienza analitica.

Se al contrario si sospetta che il carico microbico sia molto basso, non è necessario eseguire diluizioni. Successivamente, soggettivo nei media selettivi.

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Nel caso del cibo dal mare, come frutti di mare, pesce, tra gli altri, alla ricerca di Vibrio cholerae o altre specie di Vibrio, l'acqua di Peptonada regolata a pH 8,5 (acqua alcalina peptonada) dovrebbe essere usata (alcalina peptonada).

QA

Da ogni lotto preparato è necessario incubare due tubi senza inocularsi per 24 ore in aerobiosi a 37 ° C. Il tempo è finito, la torbidità o il cambiamento di colore non dovrebbero essere osservati.

I controlli noti possono anche essere usati per valutarne l'efficacia:

Per questo puoi usare i seguenti ceppi batterici: Escherichia coli ATCC 25922, Escherichia coli ATCC 8927, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Salmonella typhimurium ATCC 1428, Salmonella entetidis ATCC 13076.

In tutti i casi, si prevede uno sviluppo microbico soddisfacente, che si osserva dalla torbidità dell'ambiente.

Limitazioni

-Il mezzo disidratato è molto igroscopico, quindi deve essere tenuto lontano dall'umidità.

-Il mezzo non deve essere usato se si osserva un tipo di deterioramento.

-Il terreno di coltura disidratato deve essere mantenuto tra 10 - 35 ° C

-Il mezzo preparato deve essere mantenuto in frigorifero (2-8 ° C).

Riferimenti

1. Camacho A, Giles M, Ortegon A, Palao M, Serrano B e Velázquez o. Tecniche per l'analisi microbiologica alimentare. 2009, 2nd ed. Facoltà di chimica, Unam. Messico. Versione per l'amministratore manuale e dei documenti (AMYD) della Facoltà di Chimica, UNAM 1. Disponibile su: http: // depa.Fquim.UNAM.MX
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