Fondazione Hektoen, preparazione e usi

Lui Haktoen agar o Agar Hektoen Enteric è un mezzo di coltura solido, selettivo e differenziale. È stato creato presso l'Istituto Hektoen da King e Metzger per l'isolamento dei batteri enteropatogeni dei generi di Shigella e Salmonella.

Il mezzo è composto da proteina peptone, estratto di lievito, sali biliare, lattosio, saccarosio, salicina, tiosolfato di sodio, cloruro di sodio, citrato di ferro, citrato di ammonio, blu bromool, fuchsina acida e agar e agar. Questa formulazione consente di differenziare i generi di Shigella e Salmonella dal resto dei batteri in grado di crescere in questo mezzo.

A. Hektoen Virgen B Ague B. Haktoen agar seminato. Fonte: Flickr.com/Il caricatore originale era Philippinjl alla Wikipedia francese. [CC BY-SA 2.0 fr (https: // creativeCommons.Org/licenze/by-sa/2.0/fr/azione.In)]

Sebbene ci siano altri media con la stessa funzione di Hektoen Agar, questo ha un vantaggio maggiore rispetto ad altri media, specialmente quando vogliono recuperare specie di Shigella.

Le specie di entrambi i generi producono gravi problemi gastrointestinali nell'essere umano a causa del consumo di alimenti contaminati; Pertanto la trasmissione è fecale. Ecco perché l'uso dell'agar Hektoen è principalmente indicato nell'analisi microbiologica di feci e campioni di cibo.

[TOC]

Base

L'agar Hektoen contiene peptones ed estratto di lievito come fonte di nutrienti, fornendo gli elementi essenziali per lo sviluppo microbico.

Tuttavia, ha anche sali di bile che agiscono che inibiscono la crescita di alcuni batteri, in particolare Gram Positive e alcuni Gram negativi. È per questo motivo che è considerato un mezzo selettivo.

D'altra parte, l'agar Hektoen è un mezzo differenziale. Questa proprietà è conferita dalla presenza di carboidrati fermentabili come lattosio, disegno e salicina, accanto al sistema di indicatori di pH, rappresentato da blu bromotimol e acido Fuchsin.

Può servirti: sismonetia

Tutti i batteri in grado di crescere in questo mezzo che non appartengono al genere Salmonella e Shigella svilupperanno colonie di salmone o arancioni tranne il genere Proteus. Ciò è dovuto alla fermentazione di uno o più dei carboidrati presenti, che acidifica il mezzo, il che fa girare l'indicatore di pH.

D'altra parte, il genere Shigella e Salmonella non sono in grado di fermentare nessuno dei carboidrati presenti, usando solo peptones come fonte di energia, che alcalizza il mezzo e quindi le loro colonie sono blu verde.

Anche in questo mezzo, i batteri in grado di formare idrogeno solforato (gas incolore) possono essere distinti in questo mezzo. Il tiosolfato di sodio funge da fonte di solfuro mentre il citrato di ferro è l'agente rivelatrice. Entrambi i composti rendono possibile la formazione di un precipitato nero di solfuro di ferro che mostra la reazione.

Il precipitato nero al centro della colonia con un alone trasparente in giro dà un aspetto di pesce occhio. Questa caratteristica suggerisce la presenza del genere Salmonella.

Infine, il cloruro di sodio mantiene l'equilibrio osmotico e l'agar fornisce una solida coerenza all'ambiente.

Preparazione

Pesare 76 gr di mezzo disidratato e dissolversi in un litro di acqua distillata. Guarda la miscela e poi lascia riposare per 10-15 minuti. Può essere riscaldato e bollente, dando movimenti rotanti fino alla sua dissoluzione totale. Questo mezzo non è sterilizzato in autoclave.

Quando il mezzo raggiunge una temperatura approssimativa di 45 ° C, viene versato direttamente un volume di 20 ml in piastre sterili di Petri.

Può servirti: dinamica della popolazione

L'agar viene solidificato. A quel tempo sono già pronti per l'uso. È consigliabile usarli immediatamente. Se non possibile, sono tenuti in frigo fino al loro utilizzo.

Le piastre devono essere rimosse in anticipo dal frigorifero prima di seminarle per prendere la temperatura ambiente.

Il pH medio deve essere 7,5 ± 0,2. Il colore del mezzo disidratato è viola e il colore preparato è verde marrone.

Utilizzo

L'uso dell'agar Hektoen è raccomandato per la ricerca di batteri del genere Shigella e Salmonella nei campioni di cibo e cibo.

La possibilità di isolare questi batteri è considerevolmente aumentata se il campione in brodi speciali è precedentemente arricchito.

L'inoculo deve essere forte e la semina viene eseguita dalla strressione. Le piastre sono incubate a 37 ° C per 24-48 ore in aerobiosi.

Si raccomanda l'incubazione per 48 ore perché le caratteristiche delle colonie sono più chiare per l'interpretazione e la differenziazione in questo momento.

QA

Per eseguire il controllo di qualità su questo mezzo, vengono utilizzati ceppi batterici certificati, come: ad esempio: Salmonella typhimurium ATCC 14028, Salmonella entetidis ATCC 13076, Shigella flexneri ATCC 12022 e Shigella Sonnei ATCC 25931.

I risultati previsti sono i seguenti: Salmonella typhimurium e  Salmonella entetidis Devono sviluppare colonie verdi - bluastre con o senza centro nero. Mentre le specie di Shigella crescerà come verde - colonie bluastre.

Puoi anche includere ceppi di Escherichia coli ATCC 29212, Proteus mirabilis, Klebsiella pneumoniae ATCC 700603, Enterococcus faecalis ATCC 29212 e Staphylococcus aureus ATCC 25923.

Può servirti: brodo Lactosado

In questi casi le caratteristiche osservate sono le seguenti: E. coli E K. pneumoniae Si svilupperanno in questo medio colonie colorano il salmone all'arancione, con un precipitato dello stesso colore in circolazione. Mentre Proteus svilupperà colonie blu-verdi con o senza centro nero.

Mentre S. aureola E  E. Feecalis Devono essere inibiti, a volte E. Feecalis riesce a crescere come colonie gialle e molto piccole.

D'altra parte, poiché questo mezzo non è sterilizzato nell'autoclave, è importante valutare la sterilità del mezzo. Pertanto, da ogni lotto preparato devono essere incubati da una a due piastre senza inoculare 37 ° C per 24 ore in aerobiosi.

Ovviamente non ci si prevede alcuna crescita sul piatto.

Limitazioni

-Le specie di Proteus possono svilupparsi in questo mezzo e le caratteristiche delle loro colonie possono essere confuse con le specie di Salmonella o Shigella. Per questo motivo ogni colonia sospetta deve essere confermata con test biochimici.

-È necessario accompagnare l'uso di questo mezzo con altre età meno selettive, perché se il microrganismo richiesto è a basse concentrazioni non potrebbe svilupparsi in questo mezzo.

-Non surriscaldarsi durante la sua preparazione, poiché l'eccessivo calore altera la composizione dell'ambiente.

-Possono apparire insolitamente colonie di salmonella che fermentano il lattosio.

Riferimenti

1. Collaboratori di Wikipedia. HEKTOEN ENTERICO AGAR. Wikipedia, l'enciclopedia libera. 13 marzo 2019, 23:38 UTC. DISPONIBILE A: .Wikipedia.Org/ accessibile il 16 marzo 2019.
2. Laboratori BD. Bd Hektoen Enterric Gang (He Gank). 2013. Disponibile su: BD.com
3. Britania Laboratories. Hektoen Entérico Agar. 2015. Disponibile su: Britaniab.com
4. Diffco Laboratories Francisco Soria Melguizo. Haktoen agar. Disponibile su: F-Soria.È
5. Manuale di Difco & BBL, agar entertrico Hektoen. 2a edizione. Disponibile in: BD.com/Europa