Emb

E colorazione lungerangolare. Coli sull'agar EMB. Fonte: Eunice Laurent, CC BY-SA 4.0, Wikimedia Commons

Cos'è l'Agar Emb?

Lui Emb È un terreno di coltura solida selettiva e differenziale utilizzata per l'isolamento dei bacilli negativi gram, principalmente della famiglia Enterobacteriacee e altri bacilli non demandanti. È anche noto con l'acronimo EAM, che significa Eosina-Azul di metilene.

Questo mezzo è stato creato da Holt-Harris e Teague nel 1916. Contiene peptone, lattosio, saccarosio, fosfato di dipotassio, agar, eosina, blu e acqua di metilene. È molto simile all'agar MacConkey, soprattutto se viene utilizzato l'agar EMB di Levine, che non contiene saccarosio.

In effetti, ogni laboratorio decide se funziona con l'uno o l'altro, poiché svolgono la stessa funzione, sebbene biochimicamente sono diversi.

Presenta anche lo stesso inconveniente del classico Agar MacConkey nella produzione di Swarming per il genere Proteus. Pertanto, per evitare questo fenomeno, la concentrazione dell'agar può essere aumentata fino al 5%.

Base

Selettivo

L'agar EMP è leggermente selettivo perché contiene una colorazione anilinica (eosina e blu metilene), che fungono da inibitori, impedendo la crescita dei batteri positivi alla maggior parte dei grammi e alcuni esigenti bacilli esigenti.

Tuttavia, questo agar ha l'incontro Enterococcus faecalis e alcuni Staphylococcus.

Alcuni lieviti possono anche crescere, come Candida albicans Complex, che darà colonie rosa molto piccole. Le clamidospore possono persino svilupparsi da questo lievito se il campione viene seminato in profondità.

Differenziale

D'altra parte, l'agar EMB è anche un mezzo differenziale, poiché questi coloranti insieme (eosina e blu metilene) hanno la proprietà di formare un precipitato in pH acido, quindi servono da indicatori della produzione della stessa.

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Pertanto, i batteri debolmente di fermentazione o saccarosio producono colori viola in 24-48 ore. Ad esempio, generi Klebsiella, enterobacter E Serrazia.

Quei batteri che fermentano fortemente lattosio, come Escherichia coli, o saccarosio, come Enterocolitico Yersinia O Proteus penneri, Formano un precipitato nero verdastro, dando un'apparizione di luminosità metallica, caratteristica in queste specie.

Va notato che se viene utilizzato il mezzo di emb levine (senza saccarosio), Enterocolitico Yersinia E Proteus penneri Produceranno colonie trasparenti.

I batteri che non fermentano lattosio o saccarosio sono nutriti dalla presenza di peptonas, che forniscono aminoacidi e azoto necessari per lo sviluppo batterico e producono colonie trasparenti. Ad esempio, generi Salmonella E Shigella, tra gli altri.

È anche importante sottolineare quel genere Acinetobacter Può presentare colonie di lavanda blu, anche se non è fermetro di lattosio o saccarosio, ma hanno la proprietà di fissare il blu di metilene sulla sua parete cellulare. Questo può accadere anche con altri batteri ossidativi.

Preparazione

Il mezzo disidratato originale è il beige leggero. Per preparare questo terreno di coltura, 36 grammi del mezzo disidratato devono essere ponderati e sospesi in una soluzione che contiene un litro di acqua distillata.

Dopo aver lasciato la miscela a 5 minuti a riposo, porta il fissola su una fonte di calore, mescolando in modo vigoroso e costante fino a quando bolle e si dissolve completamente.

Successivamente, il terreno di coltura già disciolto deve essere sterilizzato usando l'autoclave a 121 ° C per 15 minuti.

Tempo finito, viene rimosso dall'autoclave e lasciati stare brevemente. Quindi è ancora caldo (45-50 ° C) tra 15 e 20 ml di agar su ciascuna piastra sterile di Petri. Il mezzo deve essere la tornasole blu.

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Dopo aver servito, le piastre vengono lasciate leggermente scoperte fino a quando l'agar si raffredda un po '. Quindi sono coperti e lasciati consolidare completamente. Successivamente, vengono ordinati in piastrine invertite e sono conservati in frigorifero (8 ° C) fino a utilizzare.

Questa procedura viene preferibilmente eseguita in una campana di flusso laminare o davanti all'accendino di Bunsen per evitare la contaminazione.

È importante tenere presente che ogni casa commerciale indicherà la quantità che deve essere pesata per preparare il mezzo di coltura.

Il pH finale del mezzo deve essere 7.2 ± 0.2

Applicazioni

• Questo mezzo viene utilizzato per seminare urina e feci o qualsiasi tipo di campioni clinici, specialmente se si sospetta la presenza di bacilli gram non demandanti.
• I batteri enteropatogeni dei generi Shigella E Salmonella Si distinguono per le loro colonie incolore o leggermente ambra.
• Altri bacilli non fermentanti crescono, come Aeromonas, Pseudomonas, Acinetobacter, tra gli altri.
• Inoltre, questo mezzo è molto utile nell'analisi microbiologica di cibo e acqua, poiché è ideale per la fase di conferma completa della determinazione dei coliformi, cioè confermare la presenza di E. coli Dai brodi EC oscuri, dalla tecnica numerica più probabile (NMP).

QA

Per verificare che il mezzo di coltura di nuova preparazione funzioni bene, i controlli possono essere seminati per osservare le caratteristiche delle colonie e verificare che danno come previsto.

Per fare ciò, puoi usare ceppi ATCC o ceppi ben identificati di E. coli, Enterobacter Aerogenes, Klebsiella sp, Salmonella typhimurium, Shigella flexneri, Pseudomonas aeruginosa e alcuni batteri positivi al grammo, come S. aureola.

Ci si aspetta E. coli Genera colonie nere bluastre ben sviluppate con lucentezza metallica verde. Mentre Enterobacter Aerogenes E Klebsiella sp Devono dare colonie mucose ben sviluppate nere bluastra.

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Per la sua parte, Salmonella Typhimurium E Shigella flexneri Devono sviluppare colonie grandi e incolore o con un colore ambra chiaro.

Finalmente, il genere Pseudomonas aeruginosa Cresce come colonie incolori di dimensioni irregolari, mentre i batteri gram -positivi dovrebbero essere totalmente inibiti o crescere con colonie molto piccole.

Considerazioni finali

A volte, la sterilizzazione fa sì che il blu di metilene si riduca, osserva un mezzo arancione. Affinché il blu di metilene per ossido e recupera il colore viola, deve essere miscelato delicatamente fino a quando il colore si riprende.

Inoltre, dopo aver sterilizzato il colorante può precipitare, quindi deve essere miscelato ben prima di servire le piastre di Petri.

Riferimenti

1. Agar blu eosina e metilene. Recuperato dal calab.com.
2. Levine e.M.B. (Con eosina e blu metilene). Recuperato da Britanialab.com.