TINCION OF CAPSULA Fondazione e tecniche

IL colorazione della capsula È una tecnica di colorazione differenziale che possiede la proprietà di evidenziare la struttura polisaccaridica che circonda alcuni batteri e lieviti chiamati capsule. È usato nei laboratori clinici per aiutare la diagnosi di alcune patologie causate da microrganismi capsulati.

È anche usato negli insegnanti laboratori per la dimostrazione di questa struttura morfologica agli studenti delle carriere di scienze della salute, come: medicina, bioanalisi, infermieristica o citotecnologia, tra gli altri.

Klebsiella pneumoniae striscia tinta di capsula. Metodo di inchiostro indiano con safranina. Fonte: а.А.В [dominio pubblico]

Esistono diverse tecniche semplici per dimostrare la presenza della capsula nei microrganismi che la possiedono, queste sono: la colorazione negativa, la colorazione di Anthony e una variante che combina i due precedenti.

La colorazione negativa viene utilizzata principalmente nei campioni di CSF quando si sospetta la presenza di lievito Cryptococcus neoformans. Questo lievito è una causa frequente di meningite.

Questa tecnica utilizza l'inchiostro di nigrosina o cinese e si basa sulla creazione di un contrasto tra il fondo di preparazione e la capsula impenetrabile del microrganismo. Lo sfondo è tinto scuro e la capsula è incolore. In questo modo questa struttura è evidenziata.

Per quanto riguarda la tecnica Anthony, si può dire che è principalmente utilizzato nei laboratori di insegnamento per dimostrare la struttura del polisaccaride nei batteri come Klebsiella pneumoniae, Streptococcus pneumoniae E Neisseria Meningitidis.

L'uso di questa tecnica per scopi diagnostici è molto raro, poiché ci sono altri test di routine che consentono di identificare questi microrganismi.

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Base

La capsula è una struttura forte di natura polisaccaridica. Ciò protegge i microrganismi di fagocitosi e quindi è una struttura difficile da penetrare.

Ecco perché le colorazioni delle capsule si basano sul contrasto. I coloranti colorano il fondo della preparazione mentre la capsula è incolore.

Pertanto, con queste tecniche la capsula è facilmente riconoscibile. Se il microrganismo non ha una capsula, non sarà distinguibile con questo tipo di colorazione, perché tutto sarà tinto dallo stesso colore.

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Tutte le tecniche utilizzate per colorare la capsula hanno la stessa base anche se usano colori e procedure diversi.

Tecniche paralla colorazione della capsula

-Anthony Staining

La colorazione di Anthony usa il vetro viola come colorante. Questo tingerà il corpo batterico e lo sfondo del colore viola.

D'altra parte, viene utilizzato il 20% di solfato di rame. Questo funge da soluzione di lavaggio, cioè rimuove l'eccesso di vetro viola della preparazione, causando chiarire le capsule ma senza il corpo batterico o lo sfondo perde il colore.

Materiali

- Latte corto.

- Lamina portatile.

- 1% di vetro viola.

- 20% di solfato di rame.

- Microscopio ottico.

- Olio di immersione.

Procedura

Questa tecnica è composta da:

1. Coltivare il microrganismo nel latte linelato per 36 ore.
2. Posizionare una goccia del raccolto all'estremità di un foglio del supporto per oggetti e accanto a posizionare una goccia di vetro viola, mescolare ed estendere con la fine di un'altra diapositiva.
3. All'aperto e non fissare il calore.
4. Lavare con una soluzione di solfato di rame al 20%, lasciato uscire all'aperto.
5. Osservare il microscopio con obiettivo di immersione. Cerca verso gli estremi degli estesi.

È importante non usare calore o correggere o asciugare, poiché questo danneggia la capsula. Né lavare con acqua.

Interpretazione

Il latte in cortocircuito è un terreno di coltura eccellente poiché fornisce i nutrienti necessari per il microrganismo per sviluppare una capsula di spicco.

D'altra parte, il latte collocatore formerà uno sfondo spesso e compatto che verrà tinto viola insieme al corpo batterico, ma la capsula che circonda il microrganismo è incolore. Pertanto, si osserva un alone chiaro attorno al corpo batterico.

Può servirti: fattori che influenzano l'attività enzimatica Rappresentazione grafica sull'osservazione microscopica di uno striscio di Klebsiella pneumoniae tinto con la colorazione di Anthony. Fonte: realizzato dall'autore MSC. Marielsa Gil.

Vantaggi

È una tecnica semplice da eseguire. Non richiede fissazione.

Allo stesso modo, va notato che altri mezzi di coltura possono essere usati, ma il mezzo con latte è preferito perché ha il vantaggio che fornisce capsule più importanti.

Svantaggi

È una tecnica un po 'più laboriosa della colorazione negativa e per la visualizzazione richiede la preparazione per asciugare.

-Colorazione negativa

Materiali

- Fogli di diapositiva.

- Terreno di coltura con microrganismo.

- Inchiostro cinese o nigrosina.

- Microscopio ottico.

- Salino fisiologico.

Procedura

Posizionare una goccia di soluzione salina fisiologica sulle copertine e sciogliere una piccola porzione della coltura microbica. È importante che la preparazione non sia molto spessa. Quindi posizionare una goccia di inchiostro cinese o nigrosina.

Quindi un foglio di copertura viene posizionato sulla preparazione senza superare il liquido. Si osserva al microscopio incentrato prima sul target 10x e quindi passa a 40x.

Questa tecnica può essere utilizzata anche su campioni di CSF direttamente. Cioè, invece di posizionare una goccia di coltura microbica, viene posizionata una caduta.

Vantaggi

È un semplice metodo di esibizione e allo stesso tempo economico. Non richiede fissazione o asciugatura della preparazione.

Svantaggi

Ha uno svantaggio che dovrebbe essere osservato al microscopio prima che la preparazione si asciuga.

D'altra parte, possono verificarsi falsi positivi se l'analista è inesperto, poiché i leucociti di solito confondono i lieviti.

L'osservazione dei lieviti con capsula con la tecnica cinese o nigrosina dovrebbe essere considerata una diagnosi presuntiva di Cryptococcus neoformans Fino a quando non viene dimostrato con la coltivazione.

Questo perché ci sono altri lieviti che potrebbero essere la causa della meningite e non solo il Cryptococcus neoformans, come quelli del genere Candida e Rhodotorula, così come altre specie di Cryptococcus.

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Interpretazione

Se ci sono microrganismi capsulati, verrà osservato uno sfondo scuro, con corpi trasparenti che galleggiano nel liquido, evidenziando la presenza della capsula.

Cryptococcus Capsule Neoformans tinto con inchiostro cinese. Fonte: credito fotografico: fornitori di contenuti: CDC/DR. Leanor Haley [dominio pubblico]

-Tecnica di inchiostro indiano

Questa tecnica può essere fatta anche con nigrosina. È una combinazione delle tecniche precedentemente spiegate. Questa tecnica utilizza viola cristallo e inchiostro di nigrosina.

Il corpo batterico prende il colore viola del vetro viola perché è caricato negativamente, mentre la nigrosina colora il fondo dello striscio. Se il batterio ha una capsula, sarà visto come un alone trasparente attorno al microrganismo.

Il cristallo viola può essere sostituito da una di queste colorazioni: safranina, fucsin di base o blu metilene.

Materiali

- Vetro viola.

- Nigrosina o inchiostro indiano.

- Fogli di diapositiva.

- Microscopio.

Procedura

- Coltivare il microrganismo in un mezzo di cultura.

- Metti una goccia del raccolto alla fine di un foglio di diapositive e accanto a posizionare una goccia di inchiostro indiano o nigrosina, mescolare ed estendere con la fine di un'altra diapositiva.

- Aria asciutta e non fissare il calore.

- Coprire con una soluzione di vetro viola per 1 minuto, lavare con acqua distillata ma molto delicatamente (getto morbido), far uscire all'aperto.

- Osservare il microscopio con obiettivo di immersione. Cerca verso gli estremi degli estesi.

Interpretazione

Verranno osservati un corpo batterico viola e uno sfondo scuro. La capsula, se presente, sarà incolore intorno ai batteri.

Riferimenti

1. Covadonga A, Silóniz M, Serrano S. Tecniche di microbiologia di base. Osservazione dei batteri. Ridurre (biologia). Serie di microbiologia. 2010; 3 (5): 15-38. D
2. López-jácome L, Hernández-Durán M, Colín-Castro C, Ortega-Peña S, Cerón-González G, Franco-Cendejas R. Colorazione di base in laboratorio di microbiologia. Mediagraphic.org. 2014; 3 (1): 10-18. Disponibile su: Medicigraphic.com
3. Gil m. Colorazione negativa: fondazione, tecnica, vantaggi e svantaggi. Lifeder.com.
4. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. 2009. Diagnosi microbiologica di Bailey e Scott. 12 ed. Argentina. Pan -American Editoriale S.A
5. Tankeshwar a. Colorazione della capsula: principio, procedura e risultati. 2019. Guida di microbiologia medica. Disponibile in: microbeonline.com