Voges-Proskauer Test di ciò che è, fondazione, preparazione, usi

Lui Test di Voges-Proskauer È un test biochimico che viene utilizzato per aiutare l'identificazione di batteri appartenenti alla famiglia Enterobacteriaceae. In particolare è utile per differenziare i ceppi da Escherichia coli Di Klebsiella ed Enterobacter, tra l'altro.

Il test viene eseguito nel terreno di coltura liquida chiamato Red Metil-Voges Proskauer, meglio noto con l'acronimo RM/VP. Questo mezzo è costituito da polipeptone tamponato, glucosio, fosfato di dipotassio e acqua distillata.

Metil rosso di Metilo-Voges Proskauer (RM/ VP)/ Test VP positivo e negativo rispettivamente. Fonte: foto scattata dall'autore MSC. Marielsa Gil/ Sudipta.Nov15 [CC BY-SA 3.0 (https: // creativeCommons.Org/licenze/by-sa/3.0)], da Wikimedia Commons

L'attuale mezzo RM/VP è una modifica del mezzo Clark e Lubs, che originariamente conteneva una minore concentrazione di peptone e glucosio. Pertanto, vi era meno quantità di ione idrogeno, richiesto per la reazione positiva di Voges-Proskauer.

Il test si basa sulla capacità del microrganismo dell'uso del glucosio da parte della via butilén-glicolica e forma un prodotto finale neutro chiamato acetoina, in presenza di ossigeno e un pH alcalino.

Nel mezzo RM/VP, oltre a essere in grado di rivelare il test Voges-Proskauer, puoi anche rivelare il test rosso metiliano.

Base

Fondazione del test Voges-Proskauer

I pluripeptoni presenti nel mezzo forniscono i requisiti nutrizionali indispensabili per la crescita batterica. Da parte sua, il glucosio è il composto principale. Molti batteri hanno la capacità di metabolizzare il glucosio e formare acido piruvico.

L'acido piruvico è un punto medio nel metabolismo del glucosio e da lì ogni microrganismo può prendere percorsi diversi. Alcuni formeranno acidi misti, come acido lattico, acido acetico, acido formico e acido succinico, e altri formeranno prodotti neutri come 2.3-butneol.

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Il test di Voges-Proskauer rivela la capacità del microrganismo di formare acetil metil carbinolo (acetoina), un prodotto intermedio di 2,3-butneol in condizioni di aerobiosi.

L'acetoina è ridotta e forma 2,3-butneol, ma questa reazione è reversibile, quindi se 2,3-butneol viene ossidato. Pertanto, l'ossigeno è indispensabile.

Il fosfato di dipotassio è il tampone che cuscisce la miscela a un pH 6,9 ± 0,2.

Fondazione per lo sviluppo delle prove e dell'interpretazione

Per mostrare la reazione, una rivelazione deve essere eseguita usando due reagenti (reagenti di barrit), noti come Voges A e Voges B.

Voges A è una soluzione α-naftulo al 5% e Voges B è una preparazione di idrossido di potassio al 40%. Se l'idrossido di potassio non è disponibile, può essere sostituito con idrossido di sodio al 40%.

Α-naftul è un catalizzatore che aumenterà l'intensità del colore della reazione, il che rende il test più sensibile. L'α-naftulo deve essere sempre aggiunto per primo, mescolando il tubo in modo che il mezzo entri in contatto con l'ossigeno. In questo modo l'attuale acetoina viene ossidata in diacetile e il 2.3-butneol viene ossidato per formare acetoina, passandolo alla diacetil.

Questo è il modo in cui α-naftul si unirà al diacetile, che a sua volta si è unito al nucleo della guanidina presente nell'amminoacido arginina, quest'ultimo dai multipartoni.

Da parte sua, il potassio o l'idrossido di sodio sono responsabili dell'assorbimento di CO₂ E reagire con i peptones. Questa reazione ha origine la formazione di un colore del salmon rosa, chiaramente visibile dopo aver mescolato molto bene il tubo.

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Affinché la colorazione si verifichi istantaneamente, le quantità corrette di diacetile, peptone e α-naftulo devono essere miscelate. Se ciò non accade, il tubo può riposare per 15 minuti prima di interpretare.

Il test è generalmente positivo dopo 2-5 minuti, quando puoi vedere un colore rosa debole. Se lasciato a riposo per 30 minuti a 1 ora, l'intensità del colore sarà massima (rosso intenso).

Un test negativo sarà evidenziato quando il brodo è giallo. Dopo 1 ora, se il test è negativo, è possibile formare un prodotto di colore rapioso della reazione di idrossido di potassio su α-naftulo.

Preparazione

Middle RM/VP

Pesare 17 gr di coltura disidratata e dissolversi in un litro di acqua distillata. Lasciare riposare per 5 minuti. Riscaldati fino a bollire per dissolversi completamente. Servire da 3 a 4 ml in tubi e sterilizzare in autoclave a 121 ° C per 15 minuti.

Il terreno di coltura disidratato è beige e il mezzo preparato è ambra chiaro.

Il pH finale del mezzo è 6,9 ± 0,2.

Reagente voges a

Pesare 5 gr di α-naftulo e dissolversi in 50 ml di alcool etilico (assoluto). Successivamente, l'aggiunta di alcol etil.

Reagente Voges b

Pesare 40 gr di idrossido di potassio e dissolversi in 50 ml di acqua distillata in un becher. Il vetro deve essere posizionato in un bagno d'acqua freddo per controllare la temperatura, perché al momento della dissoluzione della preparazione, aumenta bruscamente.

Dopo che la soluzione è fredda, viene trasferita in una palla tritata e sciacquare a 100 ml con acqua distillata.

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Procedura di prova Voges-Proskauer

Per eseguire il test di Voges-Proskauer, un brodo RM/VP è inoculato con il microrganismo in studio, da una coltura pura da 18 a 24 ore.

L'inoculo non dovrebbe essere molto denso. 35-37 ° C sono incuba per 24-48 ore, sebbene sia a volte necessaria l'incubazione per diversi giorni. Cowan e Steel credono che 5 giorni siano il tempo minimo di incubazione necessario per rilevare tutte le specie positive di Voges-Proskauer (VP) della famiglia Enterobacteriae.

Test rivelato

Separare un'aliquota di 1 ml in un tubo e fare lo sviluppo come segue: Posizionare 12 gocce (0,6 ml) dei Voges A e 4 gocce (0,2 ml) di Voges B. Mescola in onda e lascia stare 5-10 minuti prima dell'interpretazione. Tuttavia, se il test è ancora negativo, lascia stare e osservare il tubo dopo 30 minuti a 1 ora.

L'aspetto di un colore rosso rosa indica che la reazione di Voges-Proskauer è positiva. Se il mezzo rimane giallo, la reazione è negativa.

L'aggiunta della rivelazione nell'ordine e nella quantità indicata è essenziale per evitare falsi negativi.

Utilizzo

Il test di Voges-Proskauer è utile per differenziarsi tra i ceppi E. coli che sono vp negativi, dei generi di Klebsiella, Enterobacter, Serratia, tra gli altri, che sono vp positivi.

Fonte: Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnosi microbiologica. 5 ° ed. Pan -American Editoriale S.A. Argentina.

QA

Per testare la qualità del mezzo preparato è possibile utilizzare i controlli dei controlli, anche Escherichia coli ATCC 25922, Klebsiella pneumoniae ATCC 700603, Proteus mirabilis ATCC 43071, Salmonella typhimurium e Fognatura enterobacter ATCC 13047.

I risultati previsti sono reazioni Voges-Proskauer positive solo per K. pneumoniae E E. Cloacae. Il resto dà reazioni negative.

Riferimenti

1. Britania Laboratories. Media MR-VP. Disponibile su: www.Britaniab.com