Brodo tetrazionale ciò che è, fondazione, preparazione, usi

Lui Brodo tetrazionale Il brodo o il brodo è un terreno di coltura liquida selettiva per l'arricchimento e il recupero dei ceppi del genere Salmonella. È stato creato da Müeller e successivamente modificato da Kauffmann, quindi ci sono quelli che lo chiamano Müeller-Kauffmann brodo.

Il mezzo originale conteneva proteina Peptonas, carbonato di calcio e tiosolfato di sodio. Kauffmann ha aggiunto sali di bile e ha creato un'altra modalità con verde brillante. Queste sostanze inibiscono la crescita dei coliformi, lasciando il mezzo libero per lo sviluppo di batteri patogeni, in questo caso Salmonella.

Aggregato della soluzione di iodure di iodure al brodo tetrazionale. Fonte: Manuel Almagro Rivas [CC BY-SA 4.0 (https: // creativeCommons.Org/licenze/by-sa/4.0)]

La modifica ha avuto molto successo perché la sensibilità del mezzo è aumentata significativamente. Pertanto, è attualmente utile per la ricerca di Salmonellas in qualsiasi tipo di campione, ma soprattutto per feci e alimenti solidi o liquidi.

La sua preparazione consiste in due fasi; Il mezzo commerciale è una base per preparare il brodo tetrazionale e successivamente in modo che il tetrazionato possa essere formato una soluzione di iodure che completa il mezzo.

L'American Public Health Association (APHA) raccomanda l'uso del brodo tetrazionale integrato con verde brillante per l'arricchimento dei campioni alla ricerca di Salmonella, poiché è più selettivo del brodo tetrazionale e del brodo di Selenito.

In generale, il brodo Tetrationato è l'ideale quando la presenza di batteri del genere Salmonella è sospettata in piccole quantità o che sono maltrattati dall'esposizione a sostanze inibitorie o da processi industriali che minimizzano la loro vitalità.

Base

I peptone presenti corrispondono alla caseina digreatica e al tessuto digreale digreale peptico. Questi forniscono la fonte di carbonio, azoto e nutrienti in generale per la crescita batterica.

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Da parte sua, il tiosolfato di sodio reagisce con la soluzione di ioduro per formare tetrationato. Ciò inibisce la crescita di coliformi e favorisce lo sviluppo di batteri che contengono l'enzima tetrazionato reduttasi, tra cui è la salmonella di genere, ma anche Proteus.

I sali biliari fungono anche da sostanza inibitoria dei batteri grammi più positivi e alcuni grammi negativi (coliformi).

Il carbonato di calcio assorbe le sostanze tossiche generate dalla decomposizione di tetrationato, che forma acido solforico. In questo senso, il carbonato di calcio neutralizza l'acidità mantenendo il pH del mezzo stabile.

Nel caso della modalità con verde brillante, questa sostanza aumenta la potenza selettiva del brodo tetrazionale inibendo altri microrganismi diversi dalla salmonella di genere.

Preparazione

-Brodo tetrazionale

Soluzione di iodio iodurada

Pesare:

• 6 gr di iodio.
• 5 gr di ioduro di potassio.

Lo ioduro di potassio si dissolve in circa 5 ml di acqua distillata sterile, quindi lo iodio viene aggiunto a poco a poco mentre la miscela è riscaldata. Dopo che è completamente sciolto, è a filo con acqua distillata sterile fino a raggiungere un volume finale di 20 ml.

Mezza base per brodo tetrazionale

Pesare 46 grammi del mezzo disidratato e sospendere in 1 litro di acqua distillata sterile. Mescola e riscalda fino alla sua totale dissoluzione, può condurre solo per pochi minuti. Non sterilizzare in autoclave. La base del mezzo può raffreddare fino a 45 ° C approssimativamente e in quel momento vengono aggiunti 20 ml della soluzione di iodure.

Dopo aver aggiunto la soluzione iodulata al mezzo, deve essere utilizzata immediatamente. Se non si desidera utilizzare l'intera miscela, procedi come segue:

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10 ml del mezzo di base sono distribuiti in tubi e solo per coloro che saranno inoculati con campioni vengono aggiunti 0,2 ml di soluzione iodurata.

Coloro che non verranno utilizzati possono ancora essere salvati in frigo.

Il colore del mezzo prima di aggiungere la soluzione di ioduro di ioduro è bianco latte con precipitato bianco e dopo l'aggregato è marrone con un precipitato denso. Il precipitato osservato è normale e corrisponde al carbonato di calcio che non viene sciolto. Il pH finale del mezzo è 8,4 ± 0,2.

-Variante di brodo tetrazionale con verde brillante

Per preparare il brodo tetrazionale con verde brillante, vengono eseguiti tutti i passaggi sopra descritti, ma verrà aggiunto alla miscela della soluzione verde brillante 0,1% preparata.

Splendente verde

Questa soluzione è preparata come segue:

Pesare 0,1 gr di verde brillante e sospendere in 100 ml di acqua distillata. Riscalda fino a bollire per ottenere la sua dissoluzione totale. Salva in bottiglia ambra.

Utilizzo

Per i campioni di feci (coproulture) il protocollo è il seguente:

Inoculare 1 gr di feci solide o 1 ml di feci liquide in un tubo con 10 ml di brodo tetrazionale pronto all'uso. Allungare fortemente e incubare l'aerobiosi a 43 ° C per 6-24 ore.

Successivamente, prendi un'aliquota da 10 a 20 µl di brodo e aumenta in un mezzo selettivo per la salmonella, come l'agar SS, l'agar XLD, l'agar verde brillante, l'agar enterico Hektoen, tra gli altri.

In parallelo, i mezzi selettivi per la salmonella devono essere inoculati con il campione diretto (feci) senza arricchimento. Per campioni di tampone rettale, scaricare il materiale raccolto nel tubo e procedere nel modo sopra descritto.

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Per i campioni di alimenti pesano 10 gr di cibi solidi o 10 ml di cibo liquido e inoculare una bottiglia con 100 ml di brodo tetrazionale pronto per l'uso. Procedere allo stesso modo descritto sopra ma incubare 37 ° C.

Come si può vedere la relazione tra il campione e il brodo sarà sempre 1:10.

QA

Per testare il terreno di coltura è possibile utilizzare i controlli noti di ceppi. I più utilizzati sono i ceppi certificati ATCC.

I ceppi da usare sono Salmonella typhimurium ATCC 14028, Salmonella Abony DSM 4224, Salmonella entetidis ATCC 13076, Escherichia coli ATCC 25922, Enterococcus faecalis ATCC 19433 e Staphylococcus aureus ATCC 25923.

Per i ceppi di Salmonella, è previsto un eccellente sviluppo, mentre Escherichia coli Può avere uno sviluppo debole o regolare e i ceppi positivi del gram (enterococcus e stafilococco) sono parzialmente o totalmente inibiti.

Raccomandazioni

-Poiché questo mezzo non inibisce la crescita di Proteus, alcuni laboratori di solito collocano 40 mg/L di novobiocina per evitare lo sviluppo di questo deformazione microbica. L'antibiotico deve essere aggiunto prima della soluzione iodure iodo.

-Dopo aver preparato il mezzo, inclusa la soluzione di iodio, non dovrebbe passare più di 2 ore per essere inoculato.

-Al momento della distribuzione del mezzo nei tubi, la miscela deve essere omogeneizzata continuamente per risospendere il precipitato formato.

-In campioni meno contaminati, i campioni di 35-37 ° C sono incubati e in campioni molto inquinati si consiglia l'incubazione a 43 ° C.

Riferimenti

1. BBL Media. 2005. Preparato in tubo per la coltivazione della specie di Salmonella.
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnosi microbiologica di Bailey e Scott. 12 ed. Pan -American Editoriale S.A. Argentina.