Tenere ciò che è, fondazione, preparazione, usi

Lui Endo Agar o Medium Endo è una cultura solida e differenziale e con un certo grado di selettività. La formula originale è stata creata da Endo nel 1904 per differenziare i batteri fermentari del lattosio non fermentato. Iniziale Salmonella typhi, Ma più tardi l'obiettivo del mezzo si è rivolto alla ricerca di coliformi.

L'inizio dell'agar endo è rimasto, ma la sua formulazione ha subito innumerevoli cambiamenti nel corso degli anni. Attualmente, il mezzo è composto da tessuto animale peptico, lattosio, gonfiore dell'idrogeno, solfito di sodio, fucsina di base e agar e agar.

L'uso principale del mezzo è stato collegato all'isolamento e alla differenziazione dei bacilli Gram negativi appartenenti alla famiglia Enterobacteriaceae e ad altre famiglie vicine.

Per molto tempo è stato usato nel rilevamento di coliformi in campioni di acqua, latticini e cibo, ma oggi l'uso di questo mezzo è stato spostato da altri di funzioni simili. Tuttavia, alcuni laboratori di microbiologia usano questo agar per l'isolamento da campioni clinici.

Base

Endo Agar contiene peptones che fungono da fonte di aminoacidi, azoto, carbonio ed energia, necessari per la crescita di piccoli microrganismi esigenti.

D'altra parte, il carattere leggermente selettivo dell'agar è fornito dall'aggregato di solfito di sodio e fucsina di base; Entrambi i componenti inibiscono parzialmente o totalmente lo sviluppo dei batteri Gram più positivi.

Il carattere differenziale è dato dalla presenza di carboidrati fermentabili, che in questo caso è il lattosio e la fucsina di base, che funge anche da indicatore di pH.

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I batteri gram negativi che crescono in questo agar e sono in grado di fermentare il lattosio formeranno forti colonie rosa; essere patognomonico di Escherichia coli La formazione di colonie rosso scuro con una lucentezza metallica verdastra. Ciò è dovuto all'elevata produzione di acido dalla fermentazione dei carboidrati.

Va notato che il mezzo trovato intorno alle colonie diventa anche un forte colore rosa. Mentre il lattosio gram negativo sui bacilli non fermentante forma colonie rosa pallide simili al mezzo o incolore.

Il fosfato di dopotassio idrogeno bilancia il pH del mezzo e l'agar è il componente che fornisce la consistenza solida.

Preparazione

Endo Agar

Pesare 41,5 gr del mezzo disidratato e dissolversi in 1 litro di acqua distillata. Riscalda la miscela mescolando frequentemente fino a quando non c'è una dissoluzione media media. Sterilizzare in autoclave a 121 ° C, 15 libbre di pressione, per 15 minuti.

Quando rimuovi dall'autoclave, lascia raffreddare fino a una temperatura approssimativa di 45-50 ° C, scuotere la miscela per omogeneizzare prima di servire. Versare 20 ml in piastre sterili di Petri.

Lascia che solidificare le piastre, investire e salvare in targa o avvolgere con carta scuro prima di salvare in frigorifero. È molto importante proteggere l'ambiente preparato dalla luce diretta. Una pratica raccomandata è quella di preparare l'importo esatto da essere necessario.

Se immagazzinati in frigo, le piastre dovrebbero essere autorizzate prima dell'uso.

Il pH medio deve essere compreso tra 7,2 e 7,6 e il colore del mezzo preparato è di colore rosa pallido.

Agente M-endo

Esiste un'altra versione di Endo Agar (M-Endo) che segue la formula McCarthy, Delaney e Grasso, che contiene più composti e varia sotto forma di preparazione.

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Questa variante contiene: lattosio, triptosio, enzimatico digerito caseina, enzima di tessuto animale, cloruro di sodio, fosfato di potassio dibásico, solfito di sodio, estratto di lievito, fosfato di potassio monobasico, fucsina di base, layout di sodio, sodio di lauril solforato e agar.

In questo caso, 51 gr del mezzo disidratato sono pesate e sospesi in 1 litro di acqua distillata contenente 20 ml di etanolo.

Scalda leggermente mescolando per sciogliere completamente il mezzo. Non dovrebbe surriscaldarsi e sterilizzare in autoclave. Una volta che la miscela è omogenea, servire in piastre sterili di Petri e lasciare solidificare.

Utilizzo

In alcuni paesi è ancora usato per contare i coliformi totali e fecali in campioni di acqua e alimenti, in particolare la presenza di Escherichia coli come indicatore principale della contaminazione fecale.

L'agar M-endo è raccomandato dall'American Public Health Association (APHA) per il monitoraggio e il controllo dei programmi di disinfezione e trattamento delle acque reflue, nonché nella valutazione della qualità dell'acqua potabile.

Il metodo più utilizzato è la filtrazione della membrana, previo arricchimento del campione con brodo di lauril solfato per 2-4 ore.

Può anche essere usato come sostituto dell'agar EMB nell'analisi microbiologica di cibo e acqua mediante la tecnica di numero più probabile (NMP), in particolare nella fase di conferma completa per confermare la presenza di E. coli Dai brodi ecici.

QA

Per valutare la qualità del lotto finale della preparazione, vengono seminati controlli noti o certificati.

Tra i ceppi che possono essere utilizzati a questo scopo ci sono: Escherichia coli ATCC 25922, Escherichia coli ATCC 11775, Fognatura enterobacter ATCC 13047, Klebsiella pneumoniae ATCC 13883, Salmonella typhimurium ATCC 14028, Shigella flexneri ATCC 12022, Proteus mirabilis ATCC 14153 e Enterococcus faecalis ATCC 11700.

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I ceppi vengono seminati per esaurimento e incubati a 37 ° C per 24 ore in aerobiosi.

I risultati previsti sono:

• Per Escherichia coli: Forti colonie rosse, con lucentezza metallica.
• Per E. Cloacae E K. pneumoniae Le colonie devono essere mucoidi rosa.
• Nel caso di s. Typhimurium, s. Flexni e p. Mirabilis Le colonie sono generalmente rosa pallido o incolore.
• Finalmente, E. Feecalis Si prevede che sia parzialmente inibito, quindi la sua crescita deve essere scarsa con colonie rosa molto piccole.

Limitazioni

-Il mezzo endo ha sotto il potere selettivo, quindi può far crescere alcuni microrganismi gram positivi come lo stafilococco, enterococcus e persino lieviti.

-Altri bacilli che non appartengono alla famiglia Enterobacteriaceae possono svilupparsi in questo mezzo, come ad esempio Pseudomonas sp E Aeromonas sp. Le caratteristiche di questi ceppi sono colonie irregolari incolori.

-Questo mezzo preparato è molto sensibile alla luce, quindi un'esposizione prolungata a questo deterioramento del sistema indicatore, danneggiando irreversibilmente l'ambiente.

-I componenti medi sono considerati cancerogeni, quindi è necessario evitare il contatto diretto.

-Il mezzo disidratato è molto igroscopico e deve essere mantenuto nel suo contenitore originale a temperatura ambiente, ben chiuso e in un ambiente secco.

Riferimenti

1. Laboratori BD. Endo Agar. Disponibile su: BD.com
2. Neogen Laboratories. Sono agar. Disponibile su: sicurezza alimentare.Neogen.com