Thayer Martin Agar What Is, Foundation, Preparation, use

Lui Thayer Martin Agar È un mezzo solido altamente nutriente e selettivo per l'isolamento di Neisseria Meningitidis e Neisseria gonorrhoeae; entrambi noti come importanza patogena o clinica.

Una delle caratteristiche speciali più importanti presentate dall'Agar Thayer Martin è il suo alto contenuto negli integratori nutrienti. Questa proprietà è indispensabile, perché i neisserie sono microrganismi molto impegnativi dal punto di vista nutrizionale e quindi non crescono nei media comuni.

D'altra parte, poiché questi microrganismi si trovano normalmente nelle aree non sterrili, è necessaria l'aggiunta di inibitori che impediscono la crescita della flora di accompagnamento, senza influire sullo sviluppo del genere Neisseria.

Questo agar è composto da agar di base GC, emoglobina, supplementi nutrizionali aggiuntivi e un complesso di sostanze inibitorie (antibiotici e antifungini). Le case commerciali vendono ciascuno degli integratori separatamente.

Il campione da seminare in questo mezzo dipenderà dal microrganismo che viene richiesto. Per Neisseria Gonorrhoeae I campioni ideali sono secrezioni vaginali e uretrali. Mentre per Neisseria Meningitidis I campioni più utilizzati sono il CSF, trasuda faringeo e rinofaringeo.

Base

I neisserie sono microrganismi catalogati come fastidiosi e quindi il loro isolamento è difficile.  Pertanto, Thayer Martín è un mezzo complesso e ciascuno dei suoi componenti svolge una funzione spiegata di seguito:

GC Base Agar

L'agar GC contiene proteina peptone, amido di mais, cloruro di sodio, dipotassio fosfat. I suoi componenti forniscono nutrienti di base per lo sviluppo microbico, neutralizzano gli acidi grassi tossici, contribuiscono a mantenere l'equilibrio osmotico, definire il pH e fornire solida coerenza all'ambiente.

Emoglobina

L'emoglobina fornisce fattori V e X (nicotinamide adenina dinucleotide NAD e hemina rispettivamente). Pertanto in questo mezzo coltiva anche le specie dall'emofilo. L'emoglobina può essere ottenuta commercialmente disidratata o può aggiungere bovini appena defibrinati all'ambiente.

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Supplemento di arricchimento

D'altra parte, il mezzo Thayer-Martin dovrebbe anche essere aggiunto un integratore di arricchimento, poiché i nutrienti che l'agar di base contiene non sono sufficienti per i requisiti del genere Neisseria.

Il supplemento di arricchimento più comunemente usato si chiama isavalex. Questo contiene glutammina, adenina, NAD, cocabossilasi, guanina, nitrato ferrico, p-aminoacido benzoico, vitamina B12, tiamina e glucosio. Tutti questi composti sono necessari per il buon sviluppo di neisserie patogene.

Inibitori

Perché è un mezzo altamente nutriente inibitori che impediscono la crescita dei microrganismi dalla solita flora dell'area e favoriscono quindi l'isolamento del genere Neisseria.

Il complesso inibitore è composto da vancomicina, colistina e nistatina. La vancomicina inibisce la crescita di batteri Gram positivi, la colistina previene lo sviluppo di batteri gram negativi come le pseudomonas e alcuni neisserie saprofiti e la nistatina agisce sui lieviti come lieviti come Candida albicans.

Tuttavia, allora il Thayer Martin Agar fu modificato; Le variazioni consistevano nell'aggiunta di trimetoprim, l'aumento della quantità di agar e l'aggregato di glucosio extra. Questi cambiamenti hanno migliorato significativamente il recupero della specie di Neisseria gonorrhoeae.

Va notato che il trimetoprim inibisce la crescita del genere proteico e la sua conseguente formazione di sciame. In questo senso, gli antibiotici sono quelli che forniscono il carattere selettivo al Thayer Martin medio.

Preparazione

Thayer Martin Original Agar

-Agar GC

Pesare 8,2 gr del mezzo GC disidratato e sospendere a 100 ml. Mescolare e far bollire per 1 minuto con frequente agitazione per dissolversi nella sua interezza. Sterilizzare la miscela in autoclave a 121 ° C per 15 minuti.

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-Emoglobina al 2%

Sospendere 2 gr di emoglobina disidratata in 2 o 3 ml di acqua distillata calda per formare una miscela uniforme. Aggiungi gradualmente acqua per completare un volume di 100 ml. La sospensione deve essere omogenea prima di sterilizzare.

Sterilizzare in autoclave per 15 minuti.

-Supplemento di arricchimento

Ricostituire la fiala commerciale con il diluente fornito dalla stessa casa commerciale. Mescolare bene. La quantità di diligenza da utilizzare sarà specificata nell'istruzione del kit.

-Supplemento di inibizione v.C.N (vancomicina, colistina, nistatin)

Ricostituire la fiala con il diluente fornito dalla casa commerciale. Mescolare bene. La quantità di diligenza da utilizzare sarà specificata nell'istruzione del kit.

-Preparato

Per ogni 100 ml di agar GC procede come segue:

Quando l'agar GC che lascia l'autoclave, lascia raffreddare fino a una temperatura approssimativa di 50 ° C e aggiungi 2 ml di soluzione di emoglobina preparata, 2 ml del supplemento di arricchimento (isoodalex o Braralex) e 2 ml del supplemento di inibizione. Mescolare e servire in piastre sterili di Petri.

Lasciare solidificare e risparmiare in frigorifero fino all'uso.

Il colore del mezzo preparato è rosso ciliegia. Il pH finale del mezzo è 7,2 ± 0,2

Thayer Martin Agar modificato

Pesare 8,2 gr del mezzo GC disidratato e sospendere a 100 ml. Aggiungi 1 gr di acqua di agar e aggiungi 0,3 gr di glucosio. Mescolare e far bollire per 1 minuto con frequente agitazione per dissolversi nella sua interezza. Sterilizzare la miscela in autoclave a 121 ° C per 15 minuti.

Preparare il supplemento di emoglobina e arricchimento come descritto sopra.

Il supplemento di inibizione utilizzato è V.C.N.T (vancomicina, colistina, nistatina, trimetoprim).

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-Preparato

Procedere nel modo descritto per l'agar originale di Thayer Martin.

Utilizzo

Thayer Martin Agar dovrebbe essere temperamento prima di seminare i campioni. I campioni comunemente usati sono essudati faringei, essudati nasali, vaginali, uretrali e/o rettali e CSF.

Usa campioni appena prelevati e fai forti inoculum sull'agar. I campioni vengono seminati direttamente a causa dello scarico del materiale e quindi si sono distinti a causa dell'esaurimento sulla superficie.

Le piastre sono incubate a 35-37 ° C per 24-48 ore in brocca di microaerofilia (5% CO₂). Dopo il tempo di incubazione le piastre vengono esaminate alla ricerca di piccole colonie, aspetto grigio e talvolta mucoide.

Eseguire test biochimici di grammo e di conferma in colonie sospette.

QA

Per eseguire il controllo di qualità Thayer Martin può utilizzare i seguenti ceppi microbici.

Neisseria gonorrhoeae ATCC 49226 e Neisseria Meningitidis ATCC 13090; In entrambi i ceppi è previsto uno sviluppo soddisfacente.

Devono essere inclusi anche i seguenti ceppi: Staphylococcus epidermidis ATCC 14990, Escherichia coli ATCC 25922, Proteus mirabilis ATCC 43071 e Candida albicans ATCC 10231. In tutti loro è prevista un'inibizione totale o parziale in questo mezzo.

Limitazioni

-Tieni presente che nei batteri medi che sono resistenti agli inibitori utilizzati possono crescere.

-Ci sono ceppi di Neisseria Gonorrhoeae che può essere sensibile alla concentrazione di vancomicina utilizzata. Per questo motivo si consiglia di utilizzare agar al cioccolato parallelo integrato con isovalex, ma senza inibitori.

-Esistono ceppi di lievito resistenti alla nistatina che possono crescere in questo mezzo e interferiscono con l'isolamento di neisserie patogene, in particolare i gonocchi.

Riferimenti

1. Britania Laboratories. Thayer Martin Media modificato. Disponibile su: Britaniab.com