Fondazione Agar XLD, preparazione e usi

Lui XLD Agar o Acho xilosa lisina dexicate è una coltura solida selettiva e differenziale per l'isolamento enteropatogeno. Taylor ha progettato la formula di agar XL (xilosio, lisina) per migliorare l'isolamento del genere Shigella.

Ha osservato che questo genere era inibito nella maggior parte dei media destinati all'isolamento degli enteropatogeni. Successivamente, è stato aggiunto dexicolato di sodio, tiosolfato di sodio e citrato amonico ferrico per aumentare la sua selettività. Questa formula si è rivelata utile sia per Shigella, sia per l'isolamento della Salmonella.

Differenze dalle colonie di Shigella, Salmonella e coliformi in Agar XLD. A. Shigella SP, B. Salmonella SP, C. Coliformi. Fonti: a. Di: CDC/ Amanda Moore, MT; Todd Parker, PhD; Audra Marsh, Per gentile concessione: Biblioteca di immagini di sanità pubblica B. https: // caricamento.Wikimedia.Org/Wikipedia/Commons/1/1f/Salmonella_Species_Growing_on_XLD_AGAR _-_ Showing_h2s_production _-_.Jpg c. Di: cdc/dr. J. J. Agricoltore, per gentile concessione: biblioteca di immagini di sanità pubblica

L'agar XLD è composto da estratto di lievito, sodio, xilosio, lisina, lattosio, saccarosio, tiosolfato di sodio, citrato di ammonio ferrico, cloruro di sodio, fenolo rosso e agar e agar. Nella maggior parte dei laboratori di batteriologia, il duo Agar XLD e SS Agar viene utilizzato per lo studio dei campioni fecali alla ricerca di Shigella e Salmonella.

Altri laboratori preferiscono la combinazione di Chromagar Salmonella e Agar XLD, tra le altre opzioni disponibili. Questi duetto possono essere preparati in tavole doppie di Petrie. Da un lato posizionano agar xld e dal lato opposto l'altro mezzo scelto.

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Base

-Potere nutrizionale

L'agar XLD ha l'estratto di lievito, che funge da fonte di nutrienti ai microrganismi che si sviluppano in questo agar. Inoltre, la presenza di carboidrati (xilosio, saccarosio e lattosio) fornisce energia ai batteri che possono fermentarli.

-Selettività media

Come sostanza inibitoria presenta un layout di sodio; Ciò impedisce la crescita di batteri Gram positivi, dando il carattere medio selettivo.

-Potere differenziale

Colonie tipiche di Shigella

Come già accennato, l'agar XLD contiene xilosio; Questo carboidrato è fermentato da tutti i batteri che crescono in questo mezzo ad eccezione del genere Shigella.

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Questa è una delle caratteristiche che il suo personaggio differenziale offre, poiché le colonie di Shigella distinguono il resto sviluppando colonie rosse, mentre gli altri batteri producono colonie gialle.

Colonie tipiche di Salmonella

La salmonella di genere fermenta anche lo xilosio, generando inizialmente colonie gialle. Tuttavia, dopo aver esaurito il carboidrato di xilosio, attacca la lisina da parte della sua lisina decarbossilasi enzimatica. La decarbossilazione della lisina genera alcali che rendono il colore della colonia e il rosso originale al rosso originale.

Questo comportamento è condotto solo da Salmonella, poiché i coliformi che decarboxyle. Questo perché i coliformi fermentano anche lattosio e saccarosio presenti; Pertanto, la produzione di acidi è molto alta, lasciando la colonia gialla in questi batteri.

Va notato che la salmonella di genere non fermenta il saccarosio, né il lattosio.

H₂S

L'agar XLD consente anche di rilevare le specie dei produttori di salmonella di H₂S; Per fare questo, ha la fonte di solfuro rappresentato dal tiosolfato di sodio e da uno sviluppatore di reazioni che è il citrato di ammonio ferrico.

Quest'ultimo reagisce con H₂S (gas incolore) e forma un solfato di ferro insolubile di precipitato nero visibile. In questo senso, le caratteristiche delle colonie di Salmonella saranno rosse con un centro nero.

Va notato che per la reazione di H₂S, è necessario un pH alcalino. Ecco perché altri enterobatteri che formano H₂Non possono farlo o farlo male in questo ambiente, poiché l'elevata acidità che producono durante la fermentazione dei carboidrati presenti inibiscono o ostacolano la reazione.

-Cloruro di sodio, agar e fenolo rosso

Infine, il cloruro di sodio mantiene l'equilibrio osmotico; L'agar è l'agente solidificante e il rosso del fenolo rileva i cambiamenti del pH, trasformando il colore delle colonie e del mezzo.

Preparazione

Pesare 55 gr di XLD disidratato e dissolversi in 1 litro di acqua. Scaldare e scuotere la miscela fino a raggiungere il punto di ebollizione. Non surriscaldarsi, poiché il calore danneggia il mezzo e crea un precipitato che altera la morfologia delle colonie tipiche.

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Questo mezzo non deve essere autoclavato. Durante la dissoluzione è necessario passare in un bagno da 50 ° C. Quando il raffreddamento deve essere servito direttamente su piastre sterili di Petri. Possono essere dush in piastre semplici o doppie piastre. Sono autorizzati a solidificarsi e mantenere in frigorifero fino all'uso.

Temperamento prima dell'uso. Come è un mezzo non stonilizzato, si consiglia di prepararlo vicino alla data di utilizzo.

Il pH finale del mezzo deve essere a 7,4 ± 0,2. Il colore del preparato è rosso arancione, traslucido, senza precipitato.

Se c'è un agar di lisina xilosio (XL), sodio, tiosolfato di sodio e citrato di ferro amonico. In questo modo si ottiene la formula di agar XLD.

Applicazioni

L'agar XLD viene utilizzato per il recupero di enteropatogeni, principalmente del genere Shigella e secondariamente della Salmonella di genere. È utile per valutare campioni di feci, acqua e cibo.

Tipi di campioni

Sgabello

I campioni di feci possono essere seminati direttamente nell'agar XLD, facendo una buona distribuzione del materiale per ottenere colonie isolate.

Per migliorare il recupero di Salmonella, l'XLD concordato dall'arricchimento dei mezzi di Salmonella può essere seminato.

Cibo

Nel caso del cibo, i brodi di arricchimento possono essere usati per Salmonella e Shigella. Per Salmonella puoi usare il brodo di selenito, tra gli altri.

Nel caso di Shigella, può essere arricchito con il brodo Shigella con 0,5 µ/ml di novobiocina, incubati a 42 ° ± 1 ° C per 16-20 ore.

Acqua

Nell'analisi dell'acqua, sono raccomandate la tecnica di filtrazione della membrana e l'uso dell'agar XLD.

Condizioni seminate e di identificazione

Il mezzo seminato è incubato in aerobiosi a 35 ° C per 24-48 ore.

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Si osservano le colonie tipiche di ciascun genere, le colonie sospette dovrebbero essere eseguite test biochimici per l'identificazione.

QA

Per valutare il controllo di qualità media, è possibile utilizzare i seguenti ceppi batterici: Salmonella typhimurium ATCC 14028, Salmonella entetidis ATCC 13076, Salmonella Abony DSM 4224, Shigella flexneri ATCC 12022, Shigella Sonnei ATCC 25931, Escherichia coli ATCC 25922, Proteus mirabilis ATCC 43071, Klebsiella pneumoniae ATCC 33495.

Il genere Salmonella è caratterizzato dalla presentazione in questo medio colonie rosse con centro nero o colonie completamente nere. Mentre, nel genere Shigella, le colonie devono essere rosse, vale a dire il colore del mezzo.

In caso di Escherichia coli Si prevede che sia totalmente o parzialmente inibito; Se le colonie crescono sono gialle. Per Proteus mirabilis Si prevede una crescita scarsa con colonie rosa con o senza centro nero. Infine, il genere Klebsiella crescerà come colonie gialle.

Considerazioni finali

L'agar XLD è molto usato nei laboratori di batteriologia per la sua alta efficienza per il recupero di Shigella e ha anche un buon recupero del genere Salmonella.

Rall e collaboratori (2005) nel loro lavoro intitolato "Valutazione di tre brodi di arricchimento e cinque media solidi per il rilevamento di Salmonella nel pollame" ha mostrato che dei 3 media classici comprovati (Agar verde brillante, SS Agar e Agar XLD), Agar XLD ha ottenuto il miglior tasso di recupero.

Le percentuali di recupero erano le seguenti: 13.8% per agar verde brillante, 27.6% per SS e 34.5% per XLD. È stato superato solo da Agar Media Chromogenic Rambach con recupero del 48% e Chromagar con 79.3%.

Riferimenti

1. Malattie trasmesse alimentari. Shigellosi. Disponibile su: Anmat.Gov.ar
2. “Agar xld." Wikipedia, Enciclopedia gratuita. 9 febbraio 2019, 11:46 UTC. 10 aprile 2019, 19:25 Wikipedia.org
3. BBL Laboratories. Chromagar Salmonella / BD XLD Agar (Bipacca).2013 disponibile su: BD.com
4. Laboratorio. Neogen. XLD Agar. Disponibile su: sicurezza alimentare.Neogen
5. Francisco Soria Melguizo Laboratory. XLD Agar. Disponibile su: http: // f-soria.È/informare
6. Rall L, Rall R, Aragon C, Silva M. Valutazione di tre Bruth di arricchimento e cinque media di placcatura per il rilevamento di salmonella nel pollame. Braz. J. Microbiol.  2005; 36 (2): 147-150. Disponibile da: scielo.Br
7. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnosi microbiologica di Bailey e Scott. 12 ed. Pan -American Editoriale S.A. Argentina.