Agar nutriente

Sfregamento batterico con E. Agar nutriente coli. Fonte: Martin Priestley, CC BY-SA 4.0, Wikimedia Commons

Cos'è l'agar nutriente?

Lui agar nutriente È un mezzo di coltura solida non selettiva e non differenziale. In questo ambiente tutti i tipi di batteri non comandanti crescono dal punto di vista nutrizionale.

È un mezzo semplice e, nonostante il suo nome, contiene una nutrizione inferiore.

La sua utilità in laboratorio è molto varia. Principalmente, serve per il subculto delle specie, il mantenimento di ceppi, le colonie contano, come base per preparare il sangue, tra gli altri.

Inoltre, a causa del suo chiaro colore beige, la produzione di pigmenti generati da alcuni ceppi batterici, come il pigmento verdastro di Pseudomonas aeruginosa, Il pigmento rosso in mattoni prodotto da Serratia marcescens A temperatura ambiente, il pigmento giallo dorato di Staphylococcus aureus, tra gli altri.

Inoltre, è uno dei media di cultura più economici trovati sul mercato.

Base

Come accennato in precedenza, è un mezzo molto semplice che si basa sulla fornitura di sostanze nutrizionali per la crescita batterica senza restrizione e senza reazioni complesse da interpretare.

Poiché il mezzo è traslucido, è l'ideale per contare le colonie con il metodo piantato in profondità.

Composizione

È composto principalmente da out di carne o di lievito, peptonas o gelatina pancreatica, agar-gaugar, cloruro di sodio e acqua distillata.

L'estratto di carne o lieviti e peptone rappresenta le fonti di carbonio e minerali essenziali (azoto, fosforo e zolfo), che saranno utilizzati dai batteri come fonte di energia e fattori di crescita.

Allo stesso modo, l'agar -agar è la base di tutti i terreni di coltura solida, in sostituzione della gelatina, che è stato il primo composto di base utilizzato da Robert Koch per dare solida coerenza ai suoi media.

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L'agar è un polisaccaride composto da galattosio, galattamano, agarosio e agarpetin. Cumage a 40 ° C e si scioglie vicino a 100 ° C.

Da parte sua, il cloruro di sodio fornisce l'ambiente necessario per lo sviluppo batterico.

Infine, l'acqua serve a idratare e dissolvere i composti liofilizzati. Dovrebbe essere utilizzata l'acqua distillata regolata a pH neutro. L'acqua corrente non deve essere utilizzata perché contiene calcio e magnesio, che può reagire con i fosfati dell'ambiente e formare sali insolubili.

Preparazione

Per un litro di agar nutriente devi pesare 31 gr del mezzo disidratato. È posto in una fissala e si dissolve in un litro di acqua distillata. Dopo 5 minuti di riposo, riscaldate su una fonte di calore e mescola costantemente fino a bollire per 1 o 2 minuti.

Quindi il fissola viene posto in autoclave e sterilizzato a 121 ° C per 20 minuti. Tempo culminato, viene rimosso dall'autoclave e viene servito in Petri sterile.

Se le piastre di Petri sono usa e getta (plastica) il mezzo deve essere distribuito quando l'agar ha una temperatura approssimativa di 50 ° C, per impedire loro di deformare il calore eccessivo.

Lasciare solidificare e risparmiare su un supporto invertito e conservare in frigorifero a 2-8 ° C fino all'uso.

Le piastre devono essere temperate prima di essere piantate. Le piastre di agar nutrienti non devono essere utilizzate se sono contaminate o disidratate.

Il pH medio preparato deve essere regolato a 7,3 ± 0,2.

Applicazioni

È il terreno di coltura più semplice utilizzato nel laboratorio di microbiologia. La sua formulazione è eccellente per la crescita di batteri non comportamentali.

I suoi usi principali sono i seguenti:

• Come base per la preparazione dell'agar del sangue: A volte viene usato come base per preparare il sangue, tuttavia non è la base più comunemente usata.
• Stimolare la sporulazione di batteri che formano le spore: È particolarmente utile stimolare la sporulazione di batteri che formano le spore, come Bacillus sp. Per questo, viene seminato un ceppo del genere Bacillo e incuba per 24 ore a 37 ° C in aerobiosi. Una volta coltivate le colonie, la piastra è sottoposta a uno stress da temperatura, ovvero la temperatura della stufa a 44 ° C viene aumentata e lasciata per 24 ore in più o viene introdotta in frigorifero per 24 ore. Alla fine dei tempi sono estesi dal raccolto e colorazione con colorazione grammo o colorazione shoeffer-fulton. Osserzzeranno i bacilli con endospore (spore all'interno del bacillo) ed exosporo (spore fuori dal bacillo).
• Manutenzione delle varietà: Alcuni laboratori di ricerca o di supporto alla facoltà richiedono batteri vitali di importanza clinica il più a lungo possibile, allo scopo di utilizzare la Banca dei batteri (Bacterooteca) per il lavoro di ricerca o per la preparazione delle pratiche di insegnamento, in cui gli studenti impareranno a manipolare e identificarli Microrganismi. L'agar nutriente, così come l'infusione di cuore di Cerebro, può essere usato per questo scopo. L'agar viene preparato, versato in tubi con coperchio di baquelite e appoggiato a una base, in modo che l'agar si solidifichi formando un taco sul fondo e una cornice sulla superficie (picco di flauto). Ogni tubo è etichettato posizionando il nome dei batteri che verranno seminati e la data. Ciascuno dei batteri verrà seminato sulla cornice e verrà incubato per 24 ore, una volta che le colonie sono in crescita. I tubi sono immagazzinati a temperatura ambiente. Il batteriooteca deve essere rinnovato da 1 a 3 mesi, per evitare la contaminazione e la disidratazione dell'ambiente, nonché la morte dei batteri. In questo modo solo i batteri non comandanti.
• Colonie: Sebbene ci siano mezzi specializzati per il conteggio delle colonie, come il conteggio standard, l'agar nutriente può essere usato a questo scopo, sia da superficie seminata con drigalski spatola o in profondità. Pertanto è molto utile nell'analisi microbiologica di cibo e acqua.
• Esecuzione di test diagnostici: Perché è un mezzo che non contiene sangue, né nessun altro additivo, è l'ideale per prendere le colonie coltivate in questo mezzo per eseguire il test della catalasi. Inoltre, a causa del suo colore chiaro è indicato per eseguire test di ossidasi direttamente su un'area della gamma seminata, senza interferenze.
• Recupero aerobico mesofile dell'acqua ricreativa (spiagge): Agar nutriente preparato con l'acqua di mare al 10% è utile per la valutazione degli aerobi mesofili nelle acque delle spiagge. In questo modo, puoi vedere il livello di reale inquinamento che le acque hanno con questi microrganismi, poiché in questo tipo di campioni i risultati si sovrappongono quando vengono utilizzati i media preparati in modo convenzionale. Ciò è spiegabile a causa del brusco cambiamento subiti dai batteri quando si sposta da un ambiente ipersalizzato a un ambiente a basso sale, quindi i microrganismi entrano in uno stato di letargia in cui sono praticabili, ma non coltivabili.

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Riferimenti

1. Forbes, b., Sahm, d., Weissfeld, a. Diagnosi microbiologica di Bailey e Scott. Pan -American Editoriale S.A.
2. Koneman, e., Allen, s., Janda, w., Schreckenberger, p., Winn, w. Diagnosi microbiologica. Pan -American Editoriale S.A.