Agar m.R.Cos'è, fondazione, preparazione, usi

Lui Agar m.R.S. È un terreno di coltura solida selettiva, utilizzato per l'isolamento e il conteggio dei batteri dell'acido lattico, in particolare del genere Lactobacillus. Questo agar è stato creato nel 1960 da Man, Rogosa e Sharpe, trasportando il mezzo lo stesso nome, ma per la sua complessità viene spesso utilizzata l'abbreviazione M.R.S.

È composto da proteina peptone, estratto di carne, estratto di lievito, glucosio, monoleato di sorbitano, fosfato di dipbotassio, acetato di sodio, ammonio citrato, solfato di magnesio, solfato di manganese e agar.

Han e Sharpe Man Agar (M.R.S.) seminato con lactobacillus sp. Fonte: foto donata per questo articolo degli autori: Báez E, González G, Hernández G, López E, Mega M. Foto scattata durante l'indagine intitolata: Valutazione di batteri dell'acido lattico e bifidobatteri con potenziale probiotico nel latte materno e feci per neonati.

Questa composizione consente il buon sviluppo di batteri dell'acido lattico da campioni clinici, come feci, secrezione vaginale, campioni orali e latte materno, nonché latticini e cibi di carne.

Non viene utilizzato abitualmente nei laboratori clinici, poiché i batteri dell'acido lattico sono raramente coinvolti nei processi patologici. Tuttavia, nell'area di microbiologia alimentare, l'uso di agar m è più frequente.R.S.

D'altra parte, questo mezzo è usato da alcuni centri di ricerca il cui obiettivo è lo studio dei batteri dell'acido lattico.

Base

The Man, Rogosa e Sharpe hanno una composizione abbastanza complessa. Strappando la funzione che ciascuno dei suoi componenti svolge, puoi spiegare la sua fondazione.

Proteina peptone, estratto di carne, estratto di lievito e glucosio, sono nutrienti che forniscono la fonte di carbonio, azoto, vitamine e minerali necessari per la crescita batterica. Inoltre il glucosio è la fonte di energia universale utilizzata nella maggior parte dei media di coltivazione.

D'altra parte, per favorire la crescita dei batteri dell'acido lattico, la presenza di cofattori indispensabili (cationi) è necessaria nel metabolismo del lattobacillus e dei batteri correlati; Questi composti sono sali di sodio, magnesio e manganese.

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Allo stesso modo, il monoleoato di sorbitano o polisorbato 80 sono un'importante fonte di acidi grassi quando assorbiti come nutrienti.

Inoltre, il monoleoato sorbitano e il citrato di ammonio che inibiscono lo sviluppo della flora di accompagnamento, in particolare i batteri Gram negativi, fornendo il carattere selettivo di questa agar.

Infine, l'agar -agar è quello che fornisce la solida coerenza all'ambiente.

Ci sono altre varianti dell'agar Rogosa Sharpe; Uno di questi è il integrato con cisteina (M.R.S.c), molto utile per l'isolamento dei bifidobatteri, tra gli altri microrganismi. D'altra parte, c'è la MRS integrata con neomicina, paromomicina, acido settico e cloruro di litio, speciale per il conteggio selettivo dei bifidobatteri nei prodotti lattiero -caseari.

Preparazione

Pesare 68,25 grammi del mezzo disidratato e dissolversi in un litro di acqua distillata. Lasciare riposare per 5 minuti. Dissolversi nella sua interezza porta a una fonte di calore che si agita frequentemente e fa bollire per 1-2 minuti. Sterilizzare in autoclave a 121 ° C per 15 minuti.

Quando si lascia l'autoclave, lasciati riposare per qualche minuto e distribuire ancora caldo su piastre sterili di Petri.

Lascia che solidificare e investire le piastre, ordinare in piastrine e risparmiare in frigorifero fino all'uso. Lascia che le piastre prendano la temperatura ambiente prima di usarle.

Il pH medio deve essere 6,4 ± 0,2. Alcune case commerciali raccomandano pH tra 5,5 e 5,9.

Il mezzo disidratato è beige e preparato è l'ambra scura.

Sia il mezzo disidratato che le piastre preparate devono essere conservate da 2 a 8 ° C.

Applicazioni

Le piastre di agar m.R.S. Possono essere seminati in superficie (esaurimento o con drigalski spatola). Può anche essere seminato in profondità. Le piastre devono essere incubate a 37 ° C in microaerofilia (4% di OR₂ e 5-10% CO₂) Per 24-72 ore.

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Il metodo seminato viene scelto in base allo scopo perseguito (isolamento o conteggio).

Caratteristiche delle colonie

Le presunte colonie di Lactobacillus crescono di colore biancastro e hanno un aspetto da mucoide o cremoso in questo agar. Successivamente devono identificarsi.

Isolamento dei batteri dell'acido lattico

Per questo, viene utilizzata la superficie seminata. I campioni da fare in giudizio richiedono una procedura precedente. 

Nel caso dei campioni di latte materno si consiglia di centrifugare 1 ml del campione a 14.000 RMP per 10 minuti, per rimuovere lo strato di grasso. 900 µl vengono scartati e nei restanti 100 µl il sedimento viene sospeso e la superficie dell'agar m.R.S. Quindi devi distribuire uniformemente con una spatola Drigalski.

Nel caso dei campioni di feci, viene pesato un (1) grammo di feci e 9 ml di acqua peptonica sterile 0,1%è omogeneizzato, corrispondente a una diluizione 1/10. Quindi vengono eseguite diluizioni seriali, fino a una diluizione finale di 10^-4.

Infine, vengono presi 100 μl di diluizioni 10^-2, 10^-3 e 10^-4 E ogni diluizione viene seminata su MRS Agar, distribuendo uniformemente con una spatola Drigalski.

Conta dei batteri dell'acido lattico

In questo caso il seminato viene fatto in profondità.

Per i campioni di latte materno, 1 ml viene prelevato e posizionato in un tubo di plastica conico sterile. Agar MRS viene aggiunto a una temperatura approssimativa di 40 ° C a un volume finale di 25 ml, ottenendo una miscela omogenea. Successivamente viene versato in Petri sterile.

Per i campioni di feci, vengono eseguite diluizioni, come descritto sopra. Viene preso 1 ml di ogni diluizione e tubi di plastica sterile. La mRS di Agar Masted viene aggiunta a un volume di 25 ml.

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La miscela di ciascuna diluizione viene versata uniformemente in piastre sterili di Petri. Finalmente lascia stare fino alla tua polimerizzazione.

Le colonie contano su uomo e agar Sharpe (M.R.S.). Fonte: foto donata per questo articolo. Autori: Báez E, González G, Hernández G, López E, Mega M. Foto scattata durante l'indagine intitolata: Valutazione di batteri dell'acido lattico e bifidobatteri con potenziale probiotico nel latte materno e feci per neonati.

A livello di ricerca

Ogni giorno lo studio dei batteri dell'acido lattico diventa più interesse; Soprattutto i ricercatori cercano di conoscere nuovi ceppi e il loro potenziale come iniziativa per la standardizzazione nella produzione di prodotti lattiero -caseari, tra gli altri usi.

In questo senso, Alvarado et al. (2007) hanno usato l'agar m.R.S. Per condurre uno studio in cui hanno isolato, identificato e caratterizzato i batteri dell'acido lattico presenti in un formaggio artigianale andino Ahumado.

Nel formaggio hanno trovato la presenza di batteri dei generi lattococcus e lattobacillus, e hanno concluso che le miscele di ceppi isolati sono adeguati come avviamenti di ceppi nella produzione di formaggi pastorizzati.

D'altra parte, Sánchez Y Cols. (2017) ha usato l'agar m.R.S. Per studiare la presenza di batteri dell'acido lattico nel tratto digestivo di maialini, al fine di usarli come probiotici nativi che aumentano la produttività dei maiali sani.

Con questo mezzo sono riusciti a isolare quattro specie: Lactobacillus Johnsonii, Lactobacillus Brevis, Enterococcus hirae E Pediococcus pentosaceus.

Allo stesso modo, Báez et al. (2019) ha usato l'invecchiamento M.R.S. Per valutare i batteri dell'acido lattico (BAL) e i bifidobatteri con potenziale probiotico nel latte materno e nelle feci del bambino.

Sono riusciti a isolare 11 BAL e 3 Bifidobacteria sp Nel latte materno e 8 bal e 2 Bifidobacteria sp. Nelle feci. Tutti soddisfatti alcuni parametri che li accreditavano come batteri con attività probiotica.

Gli autori hanno concluso che sia il latte materno che le feci dei neonati che allattano sono esclusivamente come fonti naturali di batteri probiotici.

QA

Per valutare la qualità dell'agar m.R.S. Controlli come:

Lactobacillus fermentum ATCC 9338, Lactobacillus casei ATCC 393, Bifidobacterium bifidum ATCC 11863, Lactobacillus plantarum MKTA 8014, Lactobacillus lactis MKTA 19435, Pediococcus damnosus MKTA 29358, Escherichia coli e Bacillus cereus.

I risultati previsti sono una crescita soddisfacente per i primi 6 batteri, mentre E. coli E Bacillus cereus deve essere inibito nella sua interezza.

Riferimenti

1. Britania Laboratory. M.R.S agar. Disponibile su: Britaniab.com