Farina di mais. Fondazione, preparazione e uso

Lui Agar di farina di mais È un terreno di coltura solido, basso potere nutrizionale, utile per il sub-culturale Candida albicans. In inglese è noto come agar per pasto di mais.

La farina di mais medio convenzionale ha una composizione molto semplice, contiene farina di mais, agar e acqua. A causa del suo basso livello nutrizionale è l'ideale per usarlo nel mantenimento di ceppi fungini per periodi di tempo moderati, in particolare i funghi neri.

A. Rappresentazione grafica del complesso Candida albicans nell'agar di farina di mais. B. Clamidosporas della visione complessa di Candida albicans al microscopio, formata nella farina di mais. Fonte: a. Grahamcolm [CC BY-SA 3.0 (https: // creativeCommons.Org/licenze/by-sa/3.0)]/ b. Di: cdc/dr. William Kaplan, per gentile concessione: biblioteca di immagini di sanità pubblica.

Sporolazione complessa Candida albicans È favorito in questo mezzo, se viene aggiunto l'1% di Tween 80 durante la preparazione dell'agar. La formazione di clamidospore è caratteristica di questa specie e praticamente l'unica che colpisce l'essere umano.

Ci sono altre specie che formano clamidospore, ma è improbabile che colpiscano l'umano, come Candida australis, presente negli escrementi di pinguini, o C. Clausenii, che è un saprofita raramente trovato. Inoltre, eccezionalmente la specie C. Stellareide E C. tropicalis Potrebbero formarli.

D'altra parte, l'aggiunta di glucosio alla farina di mais media favorisce la formazione di pigmenti in ceppi di Trichophytom rubrum.

È importante sottolineare che ci sono funghi che non formano ifaifs, né pseudohifas nella farina di mais con convulsioni, come Cryptococcus neoformans, differenziando da altri generi.

L'agar di farina di mais può anche prepararsi in laboratorio o media commerciali.

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Base

La farina di mais è substrato, l'agar è l'agente consolidante e l'acqua è il solvente.

L'agar di farina di mais può essere integrato con Tween 80 (poliestere 80 Sorbita monoolate o polisorbato). Questo composto riduce la tensione superficiale dell'ambiente dal suo potere emulsionante.

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Crea anche un'atmosfera ostile che inibisce la moltiplicazione delle cellule esagerate e stimola la crescita delle ife, favorendo anche la produzione di clamidospore; Quest'ultimo ha considerato strutture di resistenza. Questa struttura aiuta nell'identificazione della specie di Candida albicans.

Da parte sua, il glucosio in questo mezzo aumenta la capacità di formazione del pigmento di alcuni funghi.

Va notato che la farina di mais media con glucosio non serve la dimostrazione di clamidospore in COmplejo candida albicans.

Preparazione

APAR farina di mais fatta in casa

Pesare 47 gr di farina di mais gialla e dissolversi in 500 ml di acqua distillata. Riscaldare a 60 ºC, mentre la preparazione è agitata in un periodo approssimativo di 1 ora. Quindi filtrare attraverso un pezzo di garza e cotone, facoltativamente può essere filtrato di nuovo attraverso una carta da filtro Whatman n. 2.

Completa il volume a 1000 ml con acqua distillata. Aggiungi 17 gr di acqua di agar, calore per dissolversi. Autoclavar per 15 minuti a 121 ° C.

Servire in piastre sterili di Petri. Salva in un frigorifero.

Il colore del mezzo preparato è biancastro con un aspetto grumoso.

Se si desidera preparare la farina di mais con glucosio alla preparazione sopra descritta per aggiungere 10 gr di glucosio.

Agar di farina di mais commerciale

Pesare 17 gr del mezzo disidratato e dissolversi in 1 litro di acqua distillata. La miscela può essere riscaldata, mescolando delicatamente per dissolversi completamente. Sterilizzare in autoclave a 121 ºC, 15 libbre, per 15 minuti.

Versare piatti sterili di Petri. Lascia che solidificare. Investire e risparmiare in frigorifero fino all'uso. Temperamento prima dell'uso.

Il pH deve essere da 6,0 ± 0,2 a 25 ºC.

Agar di farina di mais con tween 80

Per rispettare lo standard ISO 18416, l'agar di farina di mais deve essere preparato come segue:

Può servirti: acetil coenzima a

Pesare 65 gr per litro e aggiungere 10 ml di Tween 80. Scaldare e far bollire per alcuni minuti fino a quando non si dissolvi, facendo attenzione a non surriscaldarsi troppo. Sterilizzare a 121 ºC per 15 minuti.

Agar di farina di mais con glucosio

Per migliorare il potere cromogenico delle colonie di Trichophyton rubrum e differenziali da T. Mentagrofite, È possibile aggiungere 0,2% di glucosio nella formula originale. Non ha bisogno di avere Tween 80, poiché il glucosio inibisce la formazione di clamidospore.

Utilizzo

Principalmente l'uso dell'agar di farina di mais è destinato allo studio dei ceppi di candida, aiutando la sua identificazione attraverso l'osservazione caratteristica dei chloidospore nelle specie di albicans. Cioè, l'uso di questo agar funge da metodo ausiliario per identificare questi lieviti.

In questo agar può sviluppare specie sia saprofitiche che patogene, ma ogni forma caratteristica delle strutture miceliali. Ad esempio, le specie del genere Torulopsis non producono micelio e si riproducono solo da blastoconidi.

Allo stesso modo, le specie Trichhosporon e Geotrichum producono artroconidi nella farina di mais e talvolta è difficile distinguere tra l'uno e l'altro.

Gli artroconidi di Genotrichum producono un'estensione delle ife che ricordano un bastone da hockey.

Anche la produzione di pigmenti con l'agar di farina di mais completato al glucosio è utile nell'identificazione di Trichophytom rubrum.

Seminato

Nella farina di agar farina le colonie sospette di candida. Il mezzo viene seminato e incubato a 22 ºC per 24-48 ore. Il tempo di incubazione può essere esteso se necessario.

Dimostrazione di clamidospore

A tale scopo, l'agar di farina di mais con Tween 80 deve essere inoculato usando la tecnica Dalmau. Questo metodo consiste nel prendere con la maniglia del platino una parte della colonia sospetto e effettuare tre tagli paralleli nel mezzo mantenendo la maniglia a 45º. I tagli devono essere separati a una distanza di 1 cm tra l'uno e l'altro.

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Successivamente, vengono posizionati un oggetto precedentemente fiammeggiato sulle smagliature seminate, in modo che la metà coperta e l'altra scopervano.

Incubare le piastre piantate a 30 ° C per 48-72 ore e quindi esaminare il microscopio attraverso le coperture.

Manutenzione di ceppi fungini

Per il mantenimento dei ceppi le placche piantate e le inondazioni sono immagazzinate in frigo (da 4 a 8 ºC). In questo modo possono durare diverse settimane ed essere utilizzati per scopi di insegnamento o ricerca.

QA

Per il controllo della sterilità, una piastra senza inocularsi a temperatura ambiente è incubata, si prevede che non vi sia crescita o cambiamento di colore.

Per il controllo di qualità è possibile seminare ceppi noti come: Staphylococcus aureus, ATCC 6538, Escherichia coli ATCC 25922, Aspergillus Niger ATCC 16404, Candida albicans ATCC 1023, Saccharomyces cerevisiae ATCC 9763.

I risultati previsti sono inibizioni parziali per S. aureola E E. coli. Mentre è prevista una crescita soddisfacente nel resto delle varietà.

Aspergillus Niger Cresce con colonie nere e spo fartta in un tempo approssimativo di 5 giorni di incubazione.

Candida albicans Colonie leveaduriformi con produzione di clamidospore.

Saccharomyces cerevisiae produrre cellule di lievito di grandi dimensioni.

Limitazioni

Un precipitato giallo si forma nella parte inferiore del piatto che non dovrebbe essere confuso con le colonie.

Riferimenti

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