Agenzia di solfito bismuto, preparazione e usi

Lui Bismuth -solfite Agar È una cultura solida, selettiva e differenziale, appositamente formulati per l'isolamento di Salmonella enterica subgrupo enterica typhi seretipo, Tra le altre specie di Salmonella. L'ambiente è noto come BSA concorda nell'agar inglese di Bismuthufite.

La formula originale di agar solfito di bismuto di bismuto fu creata nel 1927 da Wilson e Blair (mezzo di ferro solfito di glucosio); Ciò conteneva solfito di sodio, glucosio, soluzione di bismuto, citrato di ammonio, solfato ferroso e aggiunta di agar.

48 -1 crescita della salmonella SP incubazione nell'agar di solfito bismuto. Fonte: Pixnio.com autore: dr. W. R. ERVING, USCDCP

Oggi c'è una modifica del mezzo originale, composta da estratto di carne, peptone di carne e caseina, indicatore di solfito bismuto, glucosio, fosfato disodio, solfato ferroso, verde brillante e agar-agar.

Ci sono molti mezzi per l'isolamento delle specie di Salmonella, ma quando si tratta di recuperare il sierotipo tifi, l'agar di solfito bismuto presenta un notevole vantaggio su di esse, poiché nella maggior parte si ottiene un recupero molto basso o zero di questo microrganismo.

Tuttavia, è necessario utilizzare più di un tipo di mezzo quando si tratta di isolare enteropatogenico, poiché l'agar di solfito bismuto è meno efficace per altre specie di Salmonella e per il genere Shigella, che sono inibiti o si sviluppano molto male in questo agar.

Va notato che di tutte le specie di Salmonella, il sierotipo di Typhi è uno dei più importanti enteropatogeni nell'umano, questo è il suo unico serbatoio. Questa serovarsarietà produce febbre tifoide, gastroenterite, batteramia e setticemia.

Per questo motivo è rilevante includere questo agar quando vengono analizzati campioni di acqua, feci o alimenti in cui si sospetta la presenza.

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Base

Come la maggior parte dei media di coltivazione, l'agar solfito bismuto contiene sostanze nutrizionali per promuovere lo sviluppo batterico, come peptone ed estratto di carne. Allo stesso modo, il glucosio funziona come una fonte di energia e carbonio.

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Ora, non tutti i batteri cresceranno in questo mezzo, poiché l'agar di solfito bismuto è un mezzo selettivo. Questo contiene composti che inibiscono la crescita di microrganismi gram positivi e alcuni batteri Gram negativi. Questi composti sono: l'indicatore del solfito bismuto e il verde brillante.

D'altra parte, il fosfato disodio mantiene l'osmolarità e il pH del mezzo.

Inoltre, l'agar solfito bismuto è un mezzo differenziale grazie alla presenza di solfato ferroso, che mostra la formazione di H₂S.  Il h₂S formato da batteri reagisce con solfato ferroso e forma un precipitato insolubile chiaramente visibile.

Infine, Agar -agar fornisce una solida coerenza all'ambiente.

Preparazione

Pesare 52,3 gr del mezzo disidratato e dissolversi in un litro di acqua. Riscaldare per far bollire la miscela per 1 minuto con frequente agitazione, fino alla sua dissoluzione totale. Non surriscaldati troppo. Questo mezzo non è sterilizzato nell'autoclave, perché il calore estremo danneggia il terreno di coltura.

Lasciare raffreddare a 45 ° C e agitare prima di servire su piastre sterili di Petri. Si consiglia di creare piastre con buon spessore. Per questo, 25 ml devono essere versati in ogni piastra. Lascia che solidificare. Come è un mezzo che non è sterilizzato, è normale per il suo uso immediato da suggerire.

Tuttavia, uno studio di D'Aust nel 1977, ha dimostrato che esiste un migliore recupero di Salmonella typhimurium E Salmonella entetidis Man mano che il mezzo di solfito di bismuto invecchia, le prestazioni per i serovari non sono interessate Typhi E Paratifi b.

D'Aous consiglia di usare le piastre al giorno 4 del raffreddamento, sebbene avverte che man mano che la media invecchia la selettività diminuisce, sviluppando più facilmente ceppi di Proteus vulgaris.

Ecco perché, per campioni molto inquinati, come le feci, è preferibile utilizzare il mezzo di nuova preparazione. Altrimenti utilizzare il giorno 4 della sua preparazione. Altri autori raccomandano di usare le piastre il giorno dopo la loro preparazione, immagazzinati in refrigerazione.

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Le piastre refrigerate devono essere temperate prima di utilizzare. Il pH medio deve essere 7,5 ± 0,2. Il colore del mezzo non pagato è beige e preparato è il grigio verdastro opalescente.

Applicazioni

Tra i campioni che possono essere seminati in questo mezzo ci sono campioni di feci, acque di consumo o cibo e cibo.

Per migliorare gli isolati, si raccomanda di eseguire un trattamento pre-arricchimento con brodo di lattosio e dopo arricchimento con brodo tetrazionale o cistina di brodo di selenito, prima di seminare nell'agar del solfito bismuto.

Le piastre sono incubate a 35 ° C ± 0,2 per 24 a 48 ore, in aerobiosi.

Caratteristiche delle colonie nell'agar del solfito bismuto

Le colonie di Salmonella typhi Di solito sono visti in questo agar in 24 ore con un centro nero e circondati da un alone verde brillante. Mentre, in 48 ore il nero gira completamente a causa della formazione di idrogeno solforato.

Salmonella paratipi a presenta colonie con caratteristiche variabili. Dopo 18 ore di incubazione, si possono osservare colonie nere, verdi o trasparenti, con aspetto mucoide. Mentre, a 48 ore sono osservati completamente neri e talvolta con una pronunciata luminosità metallica.

S. Paratifi a Tende a sfogliare il mezzo intorno alla colonia.

Salmonella sp I terreni neri o di GrayerColonias, con o senza luminosi metallici, la massetta diventano la superficie o no.

I ceppi coliformi, di solito, sono totalmente inibiti, ma se crescono si sviluppano come colonie verdi o marroni opache e luminosità metallica. Non tingere il mezzo intorno alla colonia.

Limitazione

-Inoculum molto deboli possono causare colonie di Salmonella typhi Verde chiaro, che passa inosservato e segnala la cultura come negativa.

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- L'agar di solfito bismuto può inibire il recupero di alcune specie di salmonella come S. Sendai, s. Berta, s. Gallinarum, s. Abortus-equi.

-Questo mezzo inibisce la maggior parte delle specie del genere Shigella.

- S. Typhi e s. Arizonae Possono dare colonie molto simili.

-I coliformi prodotti da H₂S come Proteus e Citrobacter producono colonie simili a quelle della Salmonella, quindi è necessario eseguire test di identificazione biochimica.

-Una buona esta deve essere fatta per ottenere colonie isolate; È l'unico modo per osservare le caratteristiche tipiche delle colonie del genere Salmonella.

QA

Per il controllo della sterilità, una placca viene incubata senza inocularsi a 37 ° C, si prevede che non vi sia una crescita o un cambiamento di colore.

Per il controllo di qualità è possibile seminare ceppi noti come:

Escherichia coli ATCC 25922, Salmonella entetidis ATCC 13076, Salmonella typhi ATCC 19430, Shigella flexneri ATCC 12022, Enterococcus faecalis ATCC 29212.

Ci si aspetta Escherichia coli E Shigella flexneri sono parzialmente inibiti sviluppando rispettivamente colonie marroni verdastre e marroni. Mentre entrambi i salmonglars devono avere un eccellente sviluppo con colonie nere con luminosità metallica e infine Enterococcus faecalis deve essere totalmente inibito.

Riferimenti

1. Wilson, w., & E. M. MCV. Blair. Uso di un mezzo di ferro solfito di bismuto di glucosio per l'isolamento di B. Tifosus E B. Proteus. The Journal of Hygiene, 1927; 26(4), 374-391. Recuperato da .Jstor.org
2. D'Aust Jy. Effetto delle condizioni di stoccaggio delle prestazioni dell'agar del solfito bismuto. J Clin Microbiol. 1977; 5 (2): 122-124. Disponibile in: NCBI.Nlm.NIH.Gov
3. Laboratorie IVD. Bismuth-Sulfite Agar secondo Wilson-Blair. 2009. Disponibile su: Bismuthsulfitagar_span_Jan_2009%20 (2).PDF
4. Laboratori di Himedia. Bismuth -solfite Agar. 2017. Disponibile su: Himediabs.com
5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnosi microbiologica di Bailey e Scott. 12 ed. Pan -American Editoriale S.A. Argentina.
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