Biggy Agar, preparazione e usi

Lui Biggy Agar È un mezzo di coltura solido, selettivo e differenziale. È stato progettato per isolare e aiutare l'identificazione delle specie principali di Candida. Il suo nome Biggy proviene dall'acronimo in inglese glicecosio glicina yeas.

La formula originale è stata creata da Nickerson, quindi questo mezzo è anche noto come Nickerson Agar. È attualmente composto da estratto di lievito, glicina, destrosio, citrato di ammonio, citrato di bismuto, solfito di sodio e agar.

Rappresentazione grafica del Biggy Agar. Fonte: Flickr.com

Biggy Agar è formulato per la differenziazione di specie complesse C. Albicans, c. Tropicalis, c. Krusei e c. Kefyr, Ma altre specie come Candida glabrata, c. parapsilosi, c. Guilliermondii, Trichhosporun SP, Geotrichum Candidum e Saccharomyces cerevisiae.

Ha una buona sensibilità e specificità, tuttavia, quando lo si confrontano con altri media con una funzione simile, questo è al secondo posto, essendo superato da Chromagar. Per questo motivo molti laboratori preferiscono quest'ultimo, sebbene sia molto più costoso.

Dovrebbe essere chiaro che l'uso del biggy agar, così come altri mezzi simili, aiutare una rapida identificazione presuntiva, ma mai conferma. Pertanto, devono essere disponibili ulteriori metodi di identificazione; Ad esempio, i sistemi di identificazione Vitek 32 e API 20.

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Base

Il biggy agar è considerato un mezzo parzialmente selettivo per l'isolamento dei lieviti, in particolare del genere Candida, sebbene altri generi possano crescere.

È anche un mezzo differenziale perché a seconda della specie coinvolta, saranno osservate caratteristiche diverse in aspetto, colore, forma e dimensione. È considerato un mezzo cromogenico, per lo sviluppo di diversi colori nelle colonie.

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Il colore presentato dalle colonie dei lieviti è dovuto alla presenza di solfito bismuto nell'agar. Nickerson si rese conto che i lieviti del genere sincero. Questo ha origine colonie tra luce e nero.

Questo agar contiene estratto di lievito e destrosio, che fornisce la fonte di nutrienti di base ed energia per lo sviluppo dei lieviti. La glicina è uno stimolante la crescita dei lieviti, inibendo allo stesso tempo lo sviluppo di alcuni batteri.

In questo stesso senso, citrato di ammonio e bismuto, nonché solfito di sodio come inibitori della crescita batterica. L'agar è l'agente che dà la solida coerenza all'ambiente.

Preparazione

Pesare 45 gr di coltura disidratata e dissolversi in un litro di acqua distillata. Agitare e riscaldare la miscela, lasciando bollire per 1 minuto alla soluzione completa. Questo terreno di coltura non è sterilizzato in autoclave.

Quando si raffreddano circa 45 ° C in Maria versare 20 ml su piastre sterili di Petri.

Il colore del mezzo disidratato è giallastro e il grigio preparato è un gel bianco giallastro, in cui si può osservare un leggero precipitato flocculante.

Il pH deve essere 6,8 ± 0,2.

Il mezzo preparato deve essere conservato in frigorifero (4 ° C) e proteggere dalla luce. Come è un mezzo che non si usa il più presto possibile la Clava. Il suo utilizzo è raccomandato prima che si incontri 3 giorni dalla sua preparazione.

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Utilizzo

Le piastre sono incubate a temperatura ambiente (25 ° C) per 24, 48 e 72 ore, il tempo di incubazione può essere esteso fino a 5 giorni.

Ogni specie di Candida sviluppa alcune caratteristiche che le fanno distinguere l'una dall'altra. I produttori medi descrivono le seguenti caratteristiche per ogni specie:

-Candida albicans Complex: Si sviluppa in questo agar come colonie lisce, rotonde, marroni o nere, con un leggero bordo miceliale. Con la condizione che il colore scuro non si diffonde nell'ambiente.

-Candida Tropicalis: Le colonie luminose, piccole e scure luminose, con bordo miceliale nero e leggero. Il colore scuro si diffonde verso l'ambiente, caratteristico tipico di questa specie, dopo essere stato incubato per 72 ore.

-Candida Krusei Sviluppa colonie ruvide e pianeggianti, con il bordo tra Brown a Negruzco.

-Candida parakrusei: colonie di media dimensioni, il più delle volte con un aspetto approssimativo, piatto. Il colore può variare tra il caffè rossastro scuro brillante al caffè rossastro chiaro. Il bordo delle colonie ha un ampio micelio giallastro.

-Candida stellelatoide: Sviluppare colonie medi, piatti, marrone scuro, quasi nero. Lo sviluppo miceliale è molto scarso.

Uno studio di Yücesoy e Marol nel 2003, ha dimostrato che il mezzo Chromagar presenta una migliore sensibilità e specificità per la differenziazione e l'identificazione di diverse specie di Candida rispetto al Biggy Agar.

QA

Per il controllo della sterilità, le piastre sono incubate senza inocularsi a 25 ° C, nell'oscurità per 24-48 ore, si prevede che non vi sia alcuna crescita di alcun tipo o cambiamento di colore.

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I ceppi ATCC consigliati per eseguire il controllo di qualità media sono:

Candida albicans Complex  ATCC 60193, Candida glabrata ATCC 2001, Candida Krusei ATCC 34135. In tutti loro è prevista la crescita come descritto sopra.

Puoi anche usare i seguenti ceppi:

Escherichia coli ATCC 25922, Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 e Staphylococcus epidermidis ATCC 12228. Nei primi due è prevista l'inibizione totale, ma in caso di coltivazione parzialmente le colonie saranno il colore della crema.

In caso di S. aureola Si prevede che sia totalmente inibito, ma se crescono in parte, le loro colonie sono bianche.

Limitazioni

Alcuni batteri sono in grado di svilupparsi in questo mezzo e possono persino diventare scuri, simulando un vicino di candida.

Tabella: Caratteristiche delle colonie di alcuni lieviti in Biggy concordate secondo il lavoro di Yücesoy m e marol s.

Fonte: Yücesoy M, Marol S. Performance di Chromagar Candida e Biggy Agar per l'identificazione delle specie di Yeas. Ann Clin Antimicrob Microbiol. 2003; 2 (8): 1-7

Riferimenti

1. Yücesoy M, Marol S. Performance di Chromagar Candida e Biggy Agar per l'identificazione delle specie di Yeas. Ann Clin Antimicrob Microbiol. 2003; 2 (8): 1-7.
2. MCD Lab. File tecnico di Biggy Aging. Disponibile su: McDlab.netto/
3. Lab Neogen. Biggy Agar. Disponibile su: sicurezza alimentare.Neogen.com
4. Conda Ponadisa Laboratories. Biggy Agar. Disponibile su: Condalab.com
5. Laboratori BD. BD Biggy Agar (glucosio glucosio Bismuth Yaest Agar). 2011. Disponibile su: BD.com