Fondazione per brodo tioglicolato, preparazione e usi

Lui Brodo tioglicolato È un mezzo arricchito di coerenza fluida. È noto con l'acronimo FTM). Fu creato da Brewer e modificato nel 1944 da Vera, che lo incorporava peptone della caseina.

Questo mezzo ha una bassa riduzione del potenziale di ossidazione, quindi non è raccomandato per lo sviluppo di batteri aerobici rigorosi, ma è ideale per il recupero di batteri aerobici opzionali, batteri anaerobici rigorosi e microaerofili.

Brodo tioglicolato senza indicatore. Campione secrezione vaginale. Fonte: Bobjgalindo [CC BY-SA 4.0 (https: // creativeCommons.Org/licenze/by-sa/4.0)]

Le alte prestazioni osservate con questo mezzo nell'isolamento e nel recupero di un'ampia varietà di microrganismi, lo hanno reso accettato dalla Farmacopea degli Stati Uniti (USP), dall'Associazione ufficiale dei chimici agricoli (AOAC) e dalla farmacopea europea (EP).

Queste organizzazioni lo raccomandano per i test di controllo della sterilità dei prodotti farmaceutici e per l'arricchimento di vari tipi di campioni.

Il CADO tioglicolato è composto da estratto di lievito, caseina digreatica, destrosio anidro, L-cistina, cloruro di sodio, tioglicolato di sodio, riposo e picco in una piccola quantità.

Esistono diverse versioni di questo mezzo, tra cui: brodo tioglicolato con indicatore, brodo tioglicolato senza indicatore, brodo tioglicolato con indicatore ricco con hemine e vitamina K_1, E brodo tioglicolato con carbonato calcico.

Va notato che la variante del brodo tioglicetato arricchito con hemine e vitamina K serve a migliorare la crescita di anaerobi rigorosi esigenti e la variante del brodo tioglicecolato che contiene carbonato di calcio è utile per contrastare gli acidi prodotti durante la crescita microbica.

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Base

Il brodo tioglicecolato è considerato un arricchimento, non selettivo poiché consente lo sviluppo della maggior parte dei batteri non demandanti. I requisiti nutrizionali sono forniti dall'estratto di lievito, digerito pancreatico e glucosio.

D'altra parte, questo mezzo nonostante sia un brodo contiene una piccola quantità di agar; Ciò provoca un basso potenziale di riduzione dell'ossido, perché i freni di ingresso dell'ossigeno, in modo che l'ossigeno diminuisca mentre si approfondisce all'interno del tubo.

Questo è il motivo per cui questo mezzo è ideale per lo sviluppo di batteri aerobici opzionali, microaerophili e rigorosi anaerobici, questi ultimi 2 senza incubare in queste condizioni. Lo stesso mezzo regola la quantità di ossigeno all'interno dell'ambiente, essendo assente nella parte inferiore del tubo e in quantità sufficiente sulla superficie.

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Allo stesso modo, i tioglicolati e la L-cistina agiscono come agenti riducenti, contribuendo alla prevenzione dell'accumulo di sostanze dannose per lo sviluppo batterico, come il perossido. Inoltre, questi composti contengono gruppi di solfidrili (-sh-), neutralizzando gli effetti inibitori dei derivati ​​mercuriali, arsenico, tra gli altri metalli pesanti.

D'altra parte, l'irrequietezza è un indicatore di riduzione dell'ossido. Questa sostanza è incolore quando è ridotta e rosa quando ossidata. Ci sono le varianti del brodo tioglicolato con indicatore e senza indicatore. Il suo utilizzo dipenderà dal tipo di preferenza del campione e del laboratorio.

Nel frattempo, il cloruro di sodio mantiene l'equilibrio osmotico del brodo tioglicetato e l'uso del glucosio anidra impedisce l'umidità in eccesso nell'ambiente disidratato.

Preparazione

Brodo tioglicolato con indicatore

Pesare 29,75 gr del mezzo disidratato e dissolversi in 1 litro di acqua distillata. La miscela viene lasciata a circa 5 minuti. Portare una fonte di calore e mescolare frequentemente fino a quando non si dissolve completamente.

Versare il mezzo nei tubi di prova e autoclavate a 121 ° C per 15 minuti. Consenti di raffreddare prima dell'uso. Controlla l'inserto della casa commerciale per la sua conservazione. Alcuni consigliano di risparmiare a temperatura ambiente in Dark Place e altri in frigo protetti dalla luce.

Il pH medio preparato è 7,1 ± 0,2.

Il colore del mezzo disidratato è leggero e il beige preparato è un'ambra chiara con un po 'di opalescenza.

Brodo tioglicolato con indicatore di emina e vitamina K₁

Ci sono media commerciali che già portano hemina e vitamina K₁, Speciale per la coltivazione anaerobica.

Se non si dispone di un mezzo arricchito per gli anaerobi, il brodo di tioglicolato di base può essere preparato. Per fare ciò, vengono aggiunti 10 mg di emine cloridrato e 1 mg di vitamina K₁ Per ogni litro di medio. Tuttavia, se il sangue o il siero vengono aggiunti al brodo tioglicolato, l'aggiunta di emine, la vitamina K non è necessaria.

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Brodo tioglicolato con carbonato di calcio

Viene commercialmente e si prepara seguendo le istruzioni dell'inserto.

Brodo tioglicolato senza indicatore

Questo ha la stessa composizione del tiogliceto di base, ma non contiene resazurina.

Pesare 30 gr di mezzo disidratato e dissolversi in un litro di acqua distillata. Il resto della preparazione è uguale a quello descritto nel brodo tioglicato con indicatore.

Utilizzo

Il brodo tioglicecolato è utile per l'arricchimento di campioni clinici, in particolare per quelli di siti sterili. È anche utile per campioni non clinici, come cosmetici, farmaci, ecc.

Per l'inoculazione di campioni di liquidi (come CSF, fluido sinoviale, tra gli altri), i campioni sono prima centrifughi e poi 2 gocce del sedimento vengono prese e collocate nel brodo tioglicelato. Incubare a 35 ° C per 24 ore. Se in questo momento non c'è crescita (torbidità), è incubata fino a un massimo di 7 giorni.

Se il campione viene prelevato con hiopus, i terreni di coltura vengono prima inoculati in piastre e infine il tampone viene introdotto nel brodo, la parte che si distingue e il tubo è coperta, lasciando il tampone all'interno. Incuba a 35 ° C per 24 ore, 7 giorni massimo.

Per campioni solidi, deve essere omogeneizzato in soluzione salina fisiologica (SSF) e quindi inoculare il brodo tioglicecolato con 2 gocce della sospensione.

A volte può essere usato come mezzo di trasporto per campioni in cui si sospetta la presenza di anaerobi rigorosi o come brodo di arricchimento di backup.

La variante del brodo tioglicecolato con carbonato di calcio viene utilizzata per il mantenimento dei controlli per un tempo più lungo, perché ha la capacità di neutralizzare gli acidi prodotti dall'uso del glucosio; Questi acidi sono tossici per alcuni batteri.

La crescita nel brodo tioglicecolato sarà osservata a causa della torbidità dell'ambiente. Si consiglia di eseguire una colorazione Gram e successivamente soggettiva in media non selettivi e selettivi, a seconda del tipo di campione e dei microrganismi di cui sono sospettati.

QA

Per il controllo della sterilità si consiglia di incubare uno o due brodi senza inocularsi. Il risultato atteso è un brodo trasparente, senza cambio di colore, sebbene sia normale per un leggero colore rosa da osservare sulla superficie del tubo.

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Per il controllo di qualità, tra 10 e 100 UFC di controlli certificati, come Staphylococcus aureus ATCC 6538, Micrococcus luteus ATCC 9341, Bacillus subtilis ATCC 6633, Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Clostridium spogogenes ATCC 19404, Clostridium spogogenes ATCC 11437, Bacteroidi vulgati ATCC 8482.

Incubare a 30-35 ° C in aerobiosi per 24 ore fino a un massimo di 3 giorni, poiché questi microrganismi sono una crescita rapida.

In tutti i casi, è previsto un buon sviluppo, ad eccezione di Micrococcus luteus E Bacillus subtilis, dove potrebbe esserci uno sviluppo moderato.

Per il controllo di qualità del brodo tiogliceto arricchito con hemina e vitamina K₁, È possibile utilizzare i ceppi di controllo Bacteroidi vulgati  ATCC 8482, Clostridium perfringens ATCC 13124 e Bacteroidi Fragilis ATCC 25285. Il risultato atteso è una crescita soddisfacente.

Raccomandazioni

-A volte si può vedere che la superficie del brodo Tiogliceta con indicatore diventa rosa; Ciò è dovuto all'ossidazione dell'ambiente. Se il colore rosa copre il 30% o più del brodo totale può essere riscaldato in un bagno d'acqua per 5 minuti, raffreddando di nuovo e utilizzato.

Questo eliminerà l'ossigeno assorbito, restituendo il mezzo al suo colore originale. Questa procedura può essere eseguita solo una volta.

-Per migliorare la crescita dei batteri aerobici, deve essere incubato con il coperchio leggermente pigro. Tuttavia, è preferibile usare a questo scopo un brodo di brodo di infusione o un brodo di soia triplica per il buon sviluppo di aerobi rigorosi.

-Il congelamento dell'ambiente o del surriscaldamento dovrebbe essere evitato, poiché entrambe le condizioni danneggiano il mezzo.

-La luce diretta danneggia il terreno di coltura, deve essere protetto dalla luce.

Riferimenti

1. Britania Laboratories. USP Tioglycolato con indicatore. 2015. Disponibile su: Labbritania.com.
2. Quos SAS Laboratories. 2019. Brodo tioglicolato. Disponibile su: Quios.com.co
3. BD Laboratories Fluid Thioglycollate Medium (FTM). 2003. Disponibile su: BD.com/Europa
4. Bbl Media preparati in tubi per la coltivazione di microrganismi anaerobici. TioglyCate Media. 2013. Disponibile su: BD.com
5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnosi microbiologica di Bailey e Scott. 12 ed. Pan -American Editoriale S.A. Argentina.