Può colorare Grünwald-Giemsa

Campione di leucemia mieloide cronica, con colorazione di maggio Grünwald-Giemsa. Fonte: Paulo Henrique Orlandi Mourao, CC BY-SA 3.0, Wikimedia Commons

Cos'è la colorazione di Grünwald-Giemsa?

IL Può colorare Grünwald-Giemsa, o pappenheim, è una tecnica di colorazione differenziale che mescola i reagenti Giemsa e può Grünwald. È usato per la differenziazione delle cellule del sangue normali e anormali nello striscio del sangue periferico e nel midollo osseo, nonché per la colorazione di tagli istologici e campioni citologici.

Entrambi i reagenti -giemsa e possono grünwald- sono derivati ​​dalla colorazione romanowsky, una tecnica basata sulla combinazione di acido e coloranti di base.

Giemsa ha migliorato la tecnica stabilizzando la miscela di eosina, blu di metilene e i suoi derivati, con glicerolo. Invece, può Grünwald ha usato eosina e blu metilene, usando il metanolo come solvente. Questa combinazione strategica ha dato risultati eccellenti.

Mentre in termini di osservazione della morfologia cellulare agisce simili alle colorazioni di Giemsa e Wright, questa tecnica migliora la suddetta raffinazione della colorazione dei parassiti che causano malaria, malvagità di Chagas, leishmaniosi e tricomoniasi.

Inoltre, ha dimostrato di essere molto utile per lo studio citologico del liquido spermatico. Non solo è stato evidenziato mostrando le caratteristiche morfologiche dello sperma, ma consente anche i leucociti, le cellule epiteliali e le cellule di spermatogenesi di essere notevolmente differenziate.

Base

La tecnica segue le basi della colorazione di Romanowsky, in cui i coloranti acidi hanno un'affinità selettiva per i componenti cellulari di base e i componenti acidi attirano i coloranti di base.

In altre parole, sia le strutture cellulari che i coloranti hanno carichi elettrici positivi o negativi, i carichi uguali vengono respinti e i diversi carichi attraggono.

Ad esempio, i coloranti di base, come il blu di metilene, sono caricati positivamente e attratti da strutture caricate negativamente. Ecco perché questo colorante tinge i nuclei ricchi di DNA e RNA che hanno caricato negativamente i gruppi di fosfati.

Anche i granuli del basofilo segmentato e le citoplasmi dei globuli bianchi mononucleari contenenti ARN sono colorati.

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Inoltre, il colorante acido ha un carico negativo, quindi si lega a strutture caricate positivamente come eritrociti e granuli degli eosinofili segmentati. Per quanto riguarda i granuli dei neutrofili segmentati, entrambi i coloranti impostati.

Varietà di coloranti

In questa tecnica una combinazione di reazioni tra colorazione ortocromatica e metacromatica coesiste. Ortocromatico (eosina e blu metilene) sono fissati alla struttura cellulare a cui sono correlati e forniscono un colore stabile che non varia.

D'altra parte, metacromatico (quelli derivati ​​da blu di metilene, azzurro e azzurro b), il loro colore originale variano una volta uniti alla struttura specifica, potrebbe anche esserci una varietà di sfumature.

Infine, il passo che prende la soluzione di maggio Grünwald richiede la presenza di acqua, perché senza questo il colorante penetrerà nelle strutture, ma non verrà fissata. Per accadere, il colorante deve diventare polare o ionizzante e quindi essere in grado di precipitare e guardare le strutture correlate.

Tecnica

Materiali

• Fogli di diapositiva.
• Bridges di colorazione.
• Possa la soluzione Grünwald.
• Colorazione Giemsa.
• Acqua distillata.

Concentrato May Grünwald Dye

0,25 gr di metilene eosina-blu (colorante secondo May Grünwald) e dissolversi in 100 ml di metanolo dovrebbe essere ponderato. Quindi la preparazione viene miscelata per 1 ora e lascia riposare per 24 ore. Dopo il tempo, viene filtrato.

Per applicare la tecnica, il colorante May Grünwald viene diluito come segue: per 200 ml di colorante diluito, sono misurati 30 ml di soluzione concentrata, 20 ml di soluzione tampone e 150 ml di acqua distillata regolata a pH 7.2-7.3. Successivamente, è miscelato e filtrato.

Colorazione concentrata di Giemsa

0,5 gr di azzurro-eosina-becco di metilene (colorante secondo Giemsa), dissolversi in 50 ml di metanolo e aggiungere 50 ml di glicerina.

Per eseguire la tecnica, 1:10 è diluito con una soluzione buffer e lasciar riposare per 10 minuti. Può essere filtrato se necessario.

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Preparazione della soluzione tampone a pH 7,2

Dovrebbero essere pesati:

• 40 mg di fosfato di potassio di-idrogeno (KH2PO4).
• 151 mg di idrogeno di-sifotico fosfato 12-idrato (Na2HPO4).

Entrambi i composti vengono sciolti in 100 ml di acqua.

Procedura di tinca Srols di Sanguine o ossea

Ci sono due modalità: un classico e un rapido.

Modalità classica

• Coprire l'odore per 2 o 3 minuti con la soluzione di May Grünwald diluita.
• Lavare con acqua distillata tamponata per rimuovere la soluzione precedente.
• Coprire con la stessa soluzione di lavaggio tampone e lasciare per 1 minuto. L'idea è che il colorante anteriore sia fissato alle strutture e che, allo stesso tempo, le cellule sono idratate.
• Aggiungi 12 gocce di tintura Giemsa diluite su acqua tamponata e soffia per mescolare e omogeneizzare. Lasciare riposare per 15 o 20 minuti.
• Lavare lo striscio con acqua distillata tamponata e posizionarlo per asciugare nell'aria.
• Focus e osservare in un microscopio ottico le cellule del sangue di tintura usando il bersaglio 40x. Se necessario, è possibile utilizzare 100x.

Modalità rapida

• Coprire lo striscio con la tintura di maggio Grünwald diluita per 1 minuto.
• Lavare con acqua distillata tamponata.
• Coprire con acqua tamponata e lasciar riposare per 1 minuto.
• Posizionare la tintura Giemsa diluita e lasciare per 5 minuti.
• Lavare con acqua distillata tamponata e lasciare asciugare l'aria.

Le tecniche qui descritte sono una guida guida, ma si deve prendere in considerazione che le procedure e i tempi di colorazione variano in base alla casa commerciale che vende i reagenti. È consigliabile seguire i passaggi rigorosamente indicati da ogni casa commerciale.

Tecnica di colorazione fluida dello sperma esteso

• Coprire l'esteso con uno strato fine della soluzione di maggio Grünwald per 4 minuti.
• Rimuovere la tintura e lavare con acqua distillata.
• Posizionare uno strato di Giessa diluito (1:10) in acqua distillata per 15 minuti.
• Rimuovere la tintura e lavare con acqua distillata.
• Lascia asciugare e osservare sul microscopio.

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Specifiche importanti

La tecnica afferma che i reagenti e le soluzioni di lavaggio hanno un pH adeguato a 7.2-7.3, in modo che le affinità dei coloranti dalle strutture cellulari non siano distorte e il colore finale previsto non varia.

Applicazioni

• Questa tecnica viene utilizzata dai laboratori clinici per colorare lo sfregamento del sangue periferico e il midollo osseo, i tagli ai tessuti e le citologie.
• Nel campo ematologico, questa tecnica è di vitale importanza nello studio delle anomalie delle cellule in termini di forma, dimensione e numero. È uno strumento molto prezioso per la diagnosi di alcune malattie, come la leucemia e le anemie.
• Presenta un'utilità eccezionale quando cercava parassiti nel campo ematologico (Plasmodium sp E Cruzi Tripaosoma) o istologico (Leishmanias sp).
• Per quanto riguarda la citologia vaginale, questa tecnica è particolarmente vantaggiosa per l'osservazione di Trichomonas vaginalis. Questa è una scoperta importante, poiché la sua presenza simula i dipinti di carcinoma Sul posto che poi scompare quando il parassita viene eliminato.
• È stato uno strumento ideale per lo studio dei campioni di sperma, poiché fornisce preziose informazioni sulla qualità dello sperma. I dati che offre devono fare principalmente con il numero e la morfologia, nonché con cellule concomitanti che possono essere presenti e che sono di vitale importanza, come cellule germinali, leucociti e cellule epiteliali. Con questa analisi è possibile descrivere anomalie osservate nello sperma sulla testa, sul collo, sul pezzo centrale e sul pezzo principale. Inoltre, possono anche aiutare a mostrare casi di osapermia (presenza di globuli rossi) e leucospermia o piospermia (aumento del numero di leucociti nel seme).

Riferimenti

1. Laboratorio Merck KGAA. May Grünwald Eosina blu microscopia metilene.
2. May-Grünwald-Giemsa colorazione. Recuperato da ES.Wikipedia.org.
3. Laboratorio di prodotti chimici di vetro panreac. Reagenti per tecniche istologiche, ematologia e microbiologia. Recuperato da vetroChemicals.com.