Kinyoun colorazione

Cryptosporidium parvum tinto con colorazione Kinyoun. Fonte: Punlop Anusonpornperm, Wiikimedia Commons

Cos'è la colorazione di Kinyoun?

IL Kinyoun colorazione È una tecnica di colorazione utilizzata per tingere i batteri e i parassiti resistenti all'acido alcol. È nato dalla modifica della colorazione di Ziehl-Neelsen. Entrambe le tecniche sono interpretate allo stesso modo, ma differiscono in due elementi: nella preparazione del reagente principale e in cui la tecnica di Kinyoun non usa il calore.

Per questo motivo è anche noto come Ziehl-Neelsen in freddo modificato, o la colorazione fredda di Kinyoun. È indicato per il colore di Mycobacterium tuberculosis, Leprae Mycobacterium, Micobatteri atipici, Nocardias sp, Cryptosporidium parvum, Cryptosporidium meleagridis, Cryptosporidium felis, Cryptosporidium muris E Ciclosporras cayetanensis.

Vale la pena notare che Nocardia Sono tinti debolmente con questa tecnica poiché sono alcol parzialmente acido, quindi per questo genere c'è una modifica della metodologia.

A sua volta, la tecnica di Kinyoun è stata combinata con la tecnica tricromica modificata da Didier per il rilevamento di coccidi (Cryptosporidium parvum E Isospora Belli) e spore microsporide (Enterocytozoon bieneusi E Encheliotozoon intestinalis).

Base

Il reagente principale della colorazione è il carbolofucsina o Fenicada Fuchsin, che ha la proprietà di unire gli acidi carbolici esistenti all'interno della parete cellulare del cavaliere, ricchi di lipidi (acidi micolici) di micobatteri e alcuni parassiti.

Questa unione non è contrastata dall'acido decolorante, quindi i microrganismi sono definiti come acido alcol resistente.

A differenza della tecnica Ziehl-Neelsen, che fissa il colorante attraverso il calore, nella tecnica di Kinyoun non è necessaria questa fase, poiché la soluzione Fenicada Fuchsin che viene preparata contiene un'alta concentrazione di fenolo.

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Il fenolo dissolve il materiale lipidico della parete cellulare, che consente l'ingresso del colorante di carbolofucsina. Dopo che la tintura è penetrata, è fisso nonostante il lavaggio con alcol-acido.

In questo modo, i microrganismi resistenti all'acido alcolico prendono il caratteristico colore rosso, mentre tutto ciò che non è alcol acido è scolorito e blu tinto.

Tecnica

Materiali

• Fuchsin fenicata modificata.
• Acido alcolico.
• Blu di metilene.

Preparazione di Fuchsina fenicata di Kinyoun

• Fuchsina di base: 4 gr.
• Phenolo: 8 ml.
• Alcol (95%): 20 ml.
• Acqua distillata: 100 ml.

Il fucsin di base nell'alcol dovrebbe essere lentamente sciolto, mescolando costantemente. Successivamente, il fenolo cristallizzato si scioglie in un bagno a 56 ° C. Una volta sciolti, 8 ml vengono aggiunti alla soluzione Fuchsin precedentemente preparata.

Preparazione alcol-acido

• Acido cloridrico concentrato: 3 ml.
• Etanolo (95%): 97 ml.

Devi misurare, unirti e mescolare.

Preparazione del colorante a contrasto blu di metilene

• Blue metilene: 0.3 g.
• Acqua distillata: 100 ml.

Pesa e si dissolve.

Tecnica di colorazione di Kinyoun

• Prepara uno striscio direttamente dal campione, che può essere espettorato, liquido polmonare, sedimenti di urina, liquido cerebrospinale o feci, tra gli altri o da una sospensione di microrganismi ottenuti da colonie pure sviluppate nei media media.
• Correggi lo striscio con calore.
• Posizionare lo striscio sul ponte della colorazione e coprire con il reagente Fenicada Fuchsin di Kinyoun preparato. Lasciare riposare per 3 o 5 minuti.
• Lavare con acqua distillata.
• Decorare con alcol acido per 3 minuti e lavarsi di nuovo con acqua distillata.
• Decorare di nuovo con alcol acido per 1 o 2 minuti fino a quando non è più colorante.
• Lavare con acqua distillata e lasciare scolare, posizionando il vetrino in posizione verticale.
• Coprire la preparazione con blu di metilene e lasciare per 4 minuti.
• Lavare con acqua distillata e lasciare asciugare l'aria.
• Esamina 40x e poi 100x.

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Se si desidera migliorare e accelerare la colorazione di microrganismi resistenti all'acido alcolico, viene aggiunta 1 goccia di un agente idratante (come la rana n. 7) a 30 o 40 ml di fenicata Fuchsin di Kinyoun.

Alcuni laboratori cambiano il colorante a contrasto di metilene blu a causa del verde brillante o dell'acido picrico. Il primo dà un colore verde sullo sfondo e il secondo genera un colore giallo.

Tecnica speciale Kinyoun per Nocardia

Per migliorare la colorazione dei batteri di genere Nocardia Viene utilizzata una modifica della colorazione di Kinyoun. La tecnica è la seguente:

• Copri lo striscio con Fenicada Fuchsina di Kinyoun per 3 minuti.
• Lavare con acqua distillata.
• Signore brevemente con alcol preparato al 3% fino a quando non è più colorante.
• Lavare di nuovo con acqua distillata.
• Coprire la preparazione con il blu metilene e lasciare la legge per 30 secondi.
• Lavare con acqua distillata e lasciare asciugare l'aria.

Tecnica combinata di fucsina fenicata e tricromica modificata da Didier

Questa tecnica è raccomandata per l'analisi dei campioni di feci alla ricerca di coccidi e spore di Microsporidium sp allo stesso tempo. La procedura da seguire è la seguente:

• Copri lo striscio con Fenicada Fuchsina di Kinyoun per 10 minuti.
• Rimuovere la tintura e lavare con acqua distillata.
• Decorare per 30 secondi con alcol acido cloridrico.
• Lavare di nuovo con acqua distillata.
• Coprire lo striscio con soluzione tricromica per 30 minuti a 37 ° C.
• Lavare con acqua distillata.
• Decorare per 10 secondi con alcol acido acetico.
• Lavare l'odore per 30 secondi usando il 95% di etanolo.

QA

Come controllo positivo, gli strisci vengono preparati con ceppi di Mycobacterium tuberculosis e sono tinti con i reagenti preparati a verificare che i batteri prendano il colore giusto (Fucsia rossa).

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I controlli negativi possono anche essere utilizzati preparando lo striscio con qualsiasi ceppo che non è resistente all'acido alcol.

Tecnica Kinyoun rispetto alla tecnica Ziehl-Neelsen

La tecnica di Kinyoun è più semplice poiché elimina il passaggio del riscaldamento, ma il suo vantaggio principale è che evita l'emissione di vapori, altamente tossici e causando un cancro a lungo termine. Pertanto, la colorazione di Kinyoun è più sicura per il personale incaricato di eseguire la colorazione.

È importante tenere conto del fatto che devi stare attento che i reagenti non entrino in contatto diretto con la pelle, poiché sono corrosivi e lo scolorimento è infiammabile.

Per quanto riguarda gli svantaggi, uno striscio negativo non indica necessariamente che il microrganismo non è presente. Inoltre, la presenza di detriti cellulari può causare falsi positivi, che generano confusione nella diagnosi.

Riferimento

1. Chimica clinica applicata. Kit BK Kinyoun. Cromakit si è ripreso.È.
2. Orozco-(M. Kinyoun colorazione e due coccidi nell'HIV. Rivista medica MD. 
3. Forbes, b., Sahm, d., Weissfeld, a. Diagnosi microbiologica di Bailey e Scott. Pan -American Editoriale S.A.