Caratteristiche di colorazione ematossilina-eosina, usi, tecniche

IL Colorazione ematossilina - eosina È una tecnica di colorazione che utilizza la combinazione di coloranti di ematossilina ed eosina. Questa coppia di coloranti è un duo perfetto, poiché l'ematossilina funge da colorante di base ed eosina è un colorante acido.

La designazione di coloranti di base o acidi non si riferisce al pH che ottengono in soluzione, ma parla piuttosto della proporzione che prevale in termini di carichi anionici o cationici che possiedono o dalla posizione del cromoforo.

Epitelio cilindrico colorato con ematossilina - eosina (HE) Fonte: Todd Straus e Vladimir Osipov [CC di 3.0 (https: // creativeCommons.Org/licenze/di/3.0)]

In questo senso, l'ematossilina è considerata un colorante di base (cationico) e quindi ha un'affinità per le strutture acide, come il nucleo delle cellule. Mentre l'eosina essendo un colorante acido (anionico) ha un'affinità per le strutture alcaline o di base, come il citoplasma cellulare.

Per questo motivo, questa combinazione di coloranti è ampiamente utilizzata per macchiare. I nuclei sono tinti di blu scuro o viola e il citoplasma rosa.

La colorazione dell'ematossilina-eosina è una delle tecniche di colorazione più utilizzate nell'area di istologia e citologia, grazie alla sua facile maneggevolezza e a basso costo. È usato per la visualizzazione di cellule, fibre nervose spesse e la presenza di alcuni microrganismi tissutali, come: parassiti, funghi e batteri, tra gli altri.

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Caratteristiche

Ematossilina

L'ematossilina è un colorante neutro. Tuttavia, il componente che fornisce il colore (cromoforo) si trova nel centro cationico o di base della molecola. Da qui la sua affinità per le strutture acide. La sua formula chimica è C₁₆H₁₄O₆ e il suo nome scientifico 7.11b-diidroindeno [2,1-C] Chromene-3, 4.6a, 9,10 (6H) -PENTOL.

Mantieni principalmente i centri delle cellule, poiché questi sono molto ricchi di acidi nucleici. Puoi anche tingere le inclusioni citoplasmatiche di origine virale.

In modo che l'ematossilina possa essere colorante deve essere in uno stato ossidato e attaccato a un metallo. Quest'ultimo servirà a guardare il tessuto, cioè fungerà da mordente.

Quando l'ematossilina viene ossidata, viene chiamata l'emateina. L'ossidazione è ottenuta dall'esposizione all'ossigeno (invecchiamento) del reagente o da sostanze che aiutano la sua ossidazione (ossidazione chimica).

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Eosina

Eosina è una tintura rossa o rosa. È insolubile in acqua sebbene esista una versione idrosolubile. Generalmente, Eosina si prepara a dissolvere l'alcol (etanolo a 95).

Citoplasie colorate, fibre muscolari, organelli citoplasmatici e collagene, ma non tingono i centri cellulari. Questo perché è caricato negativamente, quindi ha un'affinità per le strutture caricate positivamente.

Esistono due tipi di eosina la "y" e la "b". Eosina "y" è conosciuta come eosina gialla. Il suo nome scientifico è la fluoresceina tetrabroma e la sua formula chimica è C_ventiH₈Br₄O₅.

D'altra parte, l'eosina "B" è talvolta chiamata eritrosina bluastra B. Il suo nome scientifico è dibromodinitro zecca e la formula è c_ventiH₈Br₂N₂O₉. Entrambi sono molto simili e la differenza di usare l'uno o l'altro non è davvero evidente. Tuttavia, il più popolare è Eosina "Y".

L'eosina ha la proprietà di distinguere tra una cellula vivente e morta, perché è in grado di attraversare la membrana per tingere il suo citoplasma quando le cellule sono morte, lasciando il citoplasma della cellula incolore se rimane vivo.

Applicazioni

Colorazione in fibra nervosa

Con ematossilina-eosina, le fibre nervose spesse possono essere tinte e identificate. Tuttavia, non è utile colorare le fibre nervose sottili, perché per visualizzare quest'ultima è necessaria una colorazione argentata.

TIPIONI DI CUTTURE DELLA PELLE ISTOLICE

Nelle colorazioni dello strato corneale della pelle il colorante che agisce è eosina, poiché a questo livello le cellule non hanno un nucleo.

Nello strato di granulosio della pelle, l'ematossilina si colora fortemente verso i granuli che si trovano all'interno delle cellule granulari. Al contrario, lo strato spinoso della pelle è debolmente tinto di ematossilina, mentre lo strato basale o germinale se è piuttosto macchiato.

L'eosina colora il citoplasma di tutte le cellule e l'intensità del colore può variare tra uno strato e un altro.

Colorazione con ematossilina-eosina

Gómez e collaboratori, nel 2005 hanno dimostrato che la colorazione con ematossilina -eosina era più efficace nell'identificare i casi di amibiasi Entamoeba histolytica E Entamoeba Disparate che il nuovo metodo di visualizzazione (soluzione salina e Lugol) nei pazienti con malattia diarrota acuta.

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È stato anche dimostrato che ha una grande sensibilità per rilevare l'eritropocitosi (amebas che hanno eritrociti di fagociti).

Colorazione di tagli istologici per la diagnosi di infezione

Walwyn e collaboratori, nel 2004 hanno proposto l'uso della colorazione istologica per rilevare i microrganismi causando infezioni.

Usando la colorazione dell'ematossilina-eosina è riuscita a visualizzare le infezioni causate da Clostridium, Actinomyces, Spirili o Candida. Sono anche riusciti a osservare la presenza del parassita Sarcoptes Escabiei In tagli in pelle e inclusioni virali di citomegalovirus ed herpes in tagli di tessuti diversi.

Tecniche

Per campioni istologici

La colorazione dei tagli istologici passa attraverso una serie di passaggi. Il primo è ottenere il taglio istologico. Questo deve essere parafino e quindi ottenere i tagli (ultra-fin) con un microtomo. La tecnica consiste nei seguenti passaggi:

1-malmazione di paraffina in eccesso: Xilol o Hemo -D possono essere usati, immergersi per 3-5 minuti.

2-Relief del campione: Ciò si ottiene immergendo il campione in diverse concentrazioni di alcoli (etanolo) in ordine decrescente (100 °, 90 °, 70 °). In tutti i casi per 7 minuti.

3-eliminazione di alcol in eccesso: Per fare questo, è immerso in acqua per 7 minuti.

4-collezione con ematossilina: Il campione viene immerso per 6-10 minuti su un vassoio che contiene ematossilina. Il tempo di esposizione dipende dalla dimensione e dallo spessore del campione.

5-eliminazione dell'eccesso di ematossilina: L'acqua è stata lavata per 5 minuti e quindi un passaggio veloce (10-20 secondi) è realizzato dall'alcool acido. Successivamente lavato di nuovo con acqua per 5 minuti. Poi immerso in etanolo a 96 ° per 1 minuto.

6-color con Eosina: Per fare questo, il campione per 5 minuti nel vassoio Eosina è immerso.

7 dishydration del campione: Per fare ciò, i vassoi di alcol (etanolo) vengono di nuovo passati, ma questa volta in ordine crescente. (70 °, 90 °, 100 °). (Per 5 secondi, 5 secondi, 1 minuto rispettivamente).

Chiarimento di 8 campioni: Questo è esposto allo xylolo per 5-10 minuti e si asciuga per sigillare permanentemente con balsamo del Canada o altro materiale simile.

Per campioni di feci alla ricerca di E. histolytica

In una lamella è estesa con le feci del paziente ed è fissata con alcool dell'80% per 5 minuti. Il foglio viene immerso in ematossilina per 5 minuti e viene immediatamente lavato con acqua.

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Successivamente, viene rapidamente immerso nell'alcool acido e quindi in acqua ammoniacale. Lavare con acqua. È colorato per 5 minuti in eosina. Il campione è disidratato come spiegato nella tecnica precedente e infine chiarito con Xileno.

Preparazione del reagente

- Ematossilina

In un litro di acqua distillata, sciogliere 50 grammi di potassio o solfato di alluminio di ammonio. Quando sei completamente sciolto, aggiungi 1 grammo di ematossilina cristallizzata. Quando si dissolve nella sua interezza, 1 gr di acido citrico viene sommato insieme a 50 gr di idrato di cloral e 0,2 gr di sodio iodino.

La miscela viene bollita per 5 minuti, quindi è consentito raffreddare e filtrato per eliminare le particelle solide che sono rimaste. Il reagente così preparato può essere utilizzato immediatamente.

- Eosina

Può essere preparato con una base alcolica o acquosa.

Eosina alcolica

In 100 ml di etanolo a 95 ° dissolvere 0,5 grammi di eosina "y". Quindi aggiungi alcune gocce di acido acetico glaciale.

2% di eosina acquosa

In 1250 ml di acqua distillata, dissolvere 25 grammi di eosina "y" idrosolubile. Quindi aggiungi alcune gocce di acido acetico glaciale.

Alcool acido

Misurare 0,5 ml di acido cloridrico concentrato e completare 100 ml con alcool assoluto.

Acqua ammoniacale

Misura 0.5 ml di ammoniaca concentrata e completare 100 ml con acqua distillata.

Riferimenti

1. Navarrete, g. Istologia della pelle. Rev face Med Unam 2003; 46 (4): 130-133. Disponibile su: Medicigraphic.com
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