Metà di fondazione, preparazione, usi e limitazioni

Lui Metà di o la fermentazione del glucosio è un agar semi-solido appositamente progettato per lo studio del metabolismo ossidativo e fermentativo dei carboidrati in un importante gruppo di microrganismi diversi dagli enterobatteri, chiamati bacilli negativi non enterici.

È stato creato da Hugh e Leifson; Questi ricercatori hanno capito che i media convenzionali per lo studio della produzione acida da carboidrati non erano adatti a questo specifico gruppo di batteri.

A. Middle of Basal Commercial. B. Tubi con metà di semina. Fonte: foto A e B scattate dall'autore MSC. Marielsa Gil.

Questo perché i bacilli negativi non -entritivi di solito producono basse quantità di acidi, a differenza degli enterobatteri.

In questo senso, il mezzo di ha caratteristiche speciali in grado di rilevare le piccole quantità di acido formate, sia per ossidativo che fermentativo. Queste differenze sono correlate alla quantità di peptone, carboidrati e agar.

Questo mezzo contiene meno peptonas e una maggiore concentrazione di carboidrati, in questo modo i prodotti che alcano il mezzo sono ridotti a causa del metabolismo delle proteine ​​e la produzione di acidi sono aumentati mediante l'uso di carboidrati.

D'altra parte, la diminuzione della quantità di agar favorisce la diffusione dell'acido prodotto dall'intero mezzo, oltre ad osservare la motilità.

Il mezzo è composto da peptone, cloruro di sodio, blu bromotimolo, fosfato di dipotassio, agar e un carboidrato. Il carboidrato più comune è il glucosio ma altri possono essere usati in base a quello che si desidera studiare, come lattosio, maltosio, xilosio, tra gli altri.

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Base

Come qualsiasi mezzo di cultura, l'ambiente deve contenere sostanze nutrizionali che garantiscono una crescita batterica; Queste sostanze sono peptones.

Da parte sua, il carboidrato fornisce energia e allo stesso tempo serve a studiare il comportamento del microrganismo contro di esso, cioè consente di classificare i batteri come un organismo ossidativo, fermentativo o non sacrale.

Il mezzo di un rapporto peptone/carboidrato di 1: 5 a differenza dei media convenzionali di 2: 1. Ciò garantisce che la quantità di ammine alcaline formate dal degrado dei peptone non neutralizza la formazione di acidi deboli.

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D'altra parte, il mezzo contiene cloruro di sodio e fosfato di dipotassio. Questi composti si stabilizzano osmoticamente nel mezzo e regolano rispettivamente il pH. Il blu bromootimol è l'indicatore di pH, che rende il colore del verde giallo con la produzione di acido.

Alcuni microrganismi possono usare i carboidrati per il percorso ossidativo o fermentativo, mentre altri non prendono in nessun modo.

Questo dipende dalla caratteristica di ogni microrganismo. Ad esempio, alcuni rigorosi microrganismi aerobici possono ossidare alcuni carboidrati e gli anaerobi opzionali possono ossidare e fermentarsi a seconda dell'ambiente che li circonda, mentre altri non ossidano o fermentano i carboidrati (ascarolitici).

Infine, esiste una modifica del mezzo di raccomandato dal CDC che contiene una base speciale di fenolo rosso come indicatore.

Processo di ossidazione

Il processo di ossidazione del glucosio non richiede fosforilazione del glucosio, come si verifica nel processo di fermentazione. In questo caso il gruppo di aldeide viene ossidato in un gruppo carbossilico, con conseguente acido gluconico. Questo a sua volta viene ossidato in 2-Zo-gliconico.

Quest'ultima o due molecole di acido piruvico si accumulano o si degradano. Questo sistema richiede la presenza di ossigeno o un composto inorganico come accettore di elettroni finale.

La produzione di acidi tramite questo percorso è più debole di quella ottenuta dalla via fermentativa.

Processo di fermentazione

Per fare la fermentazione del glucosio con una qualsiasi delle strade disponibili, deve prima essere fosforilato, diventando glucosio-6-fosfato.

La fermentazione del glucosio può prendere diverse strade, la principale è il percorso di Embden-Meyerhof-Parna della degradazione di Pentose.

Il percorso scelto dipenderà dal sistema enzimatico che possiede il microrganismo.

Via de embden-meyerhof- parna

Nella fermentazione del glucosio da parte di Embden-Meyerhof-Parna. Da lì ha origine una sostanza intermedia, che è acido piruvico.

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Da lì si formeranno vari tipi di acidi misti che possono variare da una specie all'altra.

Questo sistema si verifica in assenza di ossigeno e ha bisogno di un composto organico come accettore di elettroni finale.

Percorso Encoudoroff

Nella fermentazione del glucosio dalla via di Intner-Doucoroff, il glucosio 6-fosfato va al glucone-ᵼ-lattone-6-fosfato e da lì è ossidato a 6-fosfogluvati e 2-zo-3-dedexi-6 fosfogluconato, Per formare finalmente l'acido piruvico. Questo attraverso necessita di ossigeno in modo che ci sia glicolisi.

Percorso per il degrado del monofosfato monofosfato di Pentosio o Warburg-Dikens attraverso

Questo percorso è un ibrido dei 2 precedenti. Comincia in modo simile al percorso di Entner-Doumoreff, ma successivamente il gliceraldeide-3-fosfato è formato come precursore dell'acido piruvico, come nel caso del percorso di Embden-Meyerhof-parna.

Preparazione

Pesare:

2 gr di peptone

5 gr di cloruro di sodio

10 gr di d-glucosa (o carboidrati che verranno preparati)

0,03 gr di blu bromotimolo

3 gr di agar

0,30 gr di fosfato dipotasico

1 litro di acqua distillata.

Mescolare tutti i composti tranne i carboidrati e dissolversi in 1 litro di acqua distillata. Riscaldare e mescolare fino a dissolversi nella sua interezza.

Quando si raffreddano a 50 ° C, 100 ml di glucosio vengono aggiunti al 10% (filtrato).

Distribuire asetticamente 5 ml del mezzo di tubi di prova con coperchio di cotone e autoclavate a 121 ° C, 15 libbre di pressione per 15 minuti.

Lascia in posizione verticale.

Il pH medio deve essere 7, 1. Il colore del mezzo preparato è verde.

Tieniti in frigo.

Applicazioni

Il mezzo di è un mezzo speciale per determinare il comportamento metabolico di un microrganismo contro un carboidrato. Soprattutto per coloro che formano acidi di un modo scarso, debole o nullo.

Seminato

Per ogni microrganismo, sono necessari 2 tubi di. La colonia viene presa con una maniglia dritta e una foratura viene effettuata al centro del tubo senza raggiungere il fondo; Puoi fare diverse forature, purché non sei interessato ad osservare la motilità.

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A uno dei tubi viene aggiunto uno strato di vaselina liquida sterile o paraffina fusa sterile (circa 1 a 2 ml) ed è etichettato con la lettera "F". L'altro tubo è lasciato originale ed etichettato con la lettera "O". Entrambi i tubi sono incubati a 35 ° C e si osservano quotidianamente fino a 3-4 giorni.

Interpretazione

Metabolismo e produzione del gas

Tabella: Classificazione dei microrganismi in base al loro comportamento nei tubi aperti (ossidativi) e chiusi (fermentativi) (fermentativi)

Fonte: realizzato dall'autore MSC. Marielsa Gil

Il gas è osservato con la formazione di bolle o spostamento dell'agar.

Va notato che un organismo che ossida solo il glucosio ma non fermenta, non può fermentare altri carboidrati, in ogni caso lo ossida solo. Pertanto, in questa situazione il tubo sigillato verrà omesso per lo studio di altri carboidrati.

Motilità

Inoltre, nel mezzo della motilità si può vedere.

Motilità positiva: Crescita che non si limita alla zona di inoculazione. C'è una crescita verso i lati del tubo.

Motilità negativa: Crescita solo nell'inoculo iniziale.

QA

Come controlli di qualità puoi utilizzare i seguenti ceppi: Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa E Moraxella sp. I risultati previsti sono:

1. coli: Fermentatore di glucosio (tubi gialli e gas).
2. Aeruginosa: Ossidader di glucosio (tubo aperto giallo e sigillo verde o blu).
3. Moraxella SP: Non rimoval (tubo aperto verde o blu, tubo di tenuta verde).

Limitazioni

-Alcuni microrganismi non possono crescere nell'ambiente di. In questi casi il test viene ripetuto ma al mezzo di siero 2% o 0,1% dell'estratto di lievito.

-Le reazioni di ossidazione sono spesso osservate vicino alla superficie e il resto del mezzo può essere verde, nello stesso modo in cui è preso come positivo.

Riferimenti

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