Metà dei miei ciò che è, fondazione, preparazione, usi

Lui La mia metà È un test biochimico che viene utilizzato per aiutare l'identificazione di specie di batteri appartenenti alla famiglia Enterobacteriace. È abbastanza nutriente ed è composto da glucosio, estratto di lievito, peptone, tripteina, l -entina cloridrato, bromocresh e agar viola.

Il significato del suo acronimo (mio) descrive ciascuno dei parametri che possono essere osservati in questo mezzo; Motilità, indolo e ornitina. La motilità è la capacità del microrganismo di muoversi attorno alla presenza di flagelli. Affinché questa proprietà venga osservata, la consistenza del mezzo deve essere semi -solida, quindi la preparazione porta meno quantità di agar.

Schema di interpretazione dei risultati nella miniera medio. Fonte: preparato dall'autore MSC. Marielsa Gil

La produzione di indolo evidenzia la presenza dell'enzima triptofanasa che agisce sull'amminoacido triptofano, essendo necessario per usare un reagente rivelatore per rendere visibile la produzione di indolo.

Infine, l'ornitina determina se i batteri sono in grado di decarbossillare.

Base

Peptone, estratto di lievito e triptein

Questi elementi contribuiscono al potere nutrizionale di questo mezzo. Servono come fonte di nutrienti essenziali e aminoacidi per lo sviluppo batterico.

Inoltre, Triptein è una fonte di triptofano per dimostrare la presenza dell'enzima triptofanasa, che degrada il triptofano dovuto.

L'indolo è incolore, quindi la sua presenza è rivelata aggiungendo cinque gocce del reagente Ehrlich o Kovacs, entrambi con p-dimetilaminobenzaldeide.

Il gruppo di aldeide di questo composto reagisce con l'indol, generando un prodotto a forma di rosso fucsia sulla superficie dell'agar.

Qualsiasi vestigio di colore dovrebbe essere considerato come un test positivo. Il test deve essere letto immediatamente, poiché il colore si degrada.

D'altra parte, questo test deve essere rivelato dopo aver notato i risultati della motilità e della decarbossilazione dell'ornitina.

Può servirti: osso compatto: caratteristiche, struttura, funzioni

Interpretazione

Test positivo: Formazione di un anello rosso fucsia quando si aggiungono le cadute del reagente Kovacs.

Test negativo: Non c'è formazione di anelli.

Motilità

La capacità del batterio del movimento sarà la prova.

Verrà evidenziato un test di motilità negativa osservando una sottile linea di crescita e tutto ciò sarà senza crescita.

È importante che la motilità venga letta prima della rivelazione.

Nei batteri mobili ma di una crescita lenta è difficile dimostrare la sua motilità con questo mezzo. In questo caso si consiglia di utilizzare altri test o metodi, come la motilità media o il metodo in sospeso.

Glucosio

Il glucosio è un carboidrato fermentabile che oltre a fornire energia acidifica il mezzo, una condizione necessaria in modo che la decarbossilazione dell'amminoacido ornitina possa verificarsi.

La fermentazione del glucosio dovrebbe sempre verificarsi, in base al principio secondo cui tutti i batteri appartenenti alla famiglia Enterobacteriaceae fermentano il glucosio.

L -ornitin

Nel caso in cui i batteri producano l'enzima ornitina decarbossilasi, può agire una volta che il mezzo è stato acidificato mediante fermentazione al glucosio.

L'enzima ornitina decarbossilasi agisce sul gruppo carbossilico dell'amminoacido che produce un'ammina chiamata putresina che alkheies di nuovo il mezzo.

Questo test dovrebbe essere letto dopo 24 ore di incubazione, perché se si tenta di leggere prima di poter fraintendere il test con un falso negativo.

Ricorda che la prima reazione che si verifica è la fermentazione del glucosio, quindi il mezzo diventa giallo in una fase iniziale (prima 10-12 ore). Se la decarbossilazione dell'ornitina si verifica più tardi, il mezzo diventerà viola.

È importante interpretare il test di decarbossilazione dell'ornitina prima di rivelare l'indolo, poiché l'aggregato del reagente Kovacs modifica il colore del mezzo.

Può servirti: i regni della natura e le sue caratteristiche

Interpretazione

Test negativo: mezzo giallo o giallo.

Test positivo: metà completamente viola.

Indicatore di pH

In questo caso, viene usato il viola bromocresol; la persona incaricata di rivelare quando c'è un cambiamento di pH nel mezzo. Acidificando, l'indicatore diventa giallo e quando alcalinarie diventa viola.

Tecnica seminata e rivelata

Per seminare il mio mezzo, viene utilizzato un ago dritto o ago e viene raccolta una parte della colonia da studiare con esso.

Una foratura profonda è fatta nel mio mezzo in linea retta. Non è consigliabile.

Incubare per 24 a 48 ore a 37 ° C in aerobiosi. Osserva i risultati in questo ordine: motilità, decarbossilazione dell'ornitina e infine rivela l'indolo.

Si consiglia di prendere 2 ml sul mezzo, trasferirlo su un tubo sterile ed eseguire il test di indolo lì, quindi se dà negativo, il resto del tubo originale può essere incubato per 24 ore in più, per rivelare di nuovo l'indolo.

Lo sviluppo dell'indolo viene fatto come segue: da 3 a 5 gocce del reagente Kovacs vengono aggiunte nel mio ambiente e si agita fortemente. Si osserva se appare o meno un anello rosso fucsia.

Preparazione

La mia metà

Pesare 31 gr del mio ambiente e dissolversi in un litro di acqua distillata.

Scaldare fino a quando la miscela bolle per un minuto, mescolando spesso fino a dissolvere completamente l'agar. Distribuire 4 ml del mezzo in tubi di prova 13/100 con coperchio di cotone.

Sterilizzare in autoclave a 121 ° C per 15 minuti. Togliere dall'autoclave e lasciare stare dritti in uno shock, in modo che si forma un taco semi -solido.

Conservare in un frigorifero di 2-8 ° C. Lascia un carattere prima di seminare la tensione batterica.

Il colore del mezzo disidratato è beige e quello del mezzo preparato viola leggermente opalescente.

Può servirti: evoluzione divergente: cause ed esempi

Il pH finale del mezzo preparato è 6,5 ± 0.2

Il mezzo diventa giallo con pH acido ed è viola a pH alcalino.

Kovacs Reactive (Indol Test Developer)

Questo reagente è preparato come segue:

Sono misurati 150 ml di alcool amilico, isoamil o butilico (uno dei tre). 10 gr di p-dimetilaminobenzaldeide si dissolvono in esso. Successivamente, vengono lentamente aggiunti 50 ml di acido cloridrico concentrato.

Il reagente preparato è incolore o chiaro. Deve essere conservato in bottiglia ambra e conservata in frigorifero. Un colore marrone scuro mostra il suo deterioramento.

Anche il reagente Kovacs può essere sostituito dal reagente Ehrlich. Quest'ultimo, perché è più sensibile, è preferito per rivelare l'indolo nei batteri che lo producono in quantità minime, come in alcuni bacilli negativi non fermentanti e alcuni anaerobi.

Utilizzo

Questo mezzo è un test che completa una batteria di test biochimici per l'identificazione dei batteri appartenenti alla famiglia Enterobacteriace.

I dati di decarbossilazione dell'ornitina servono a differenziare Shigella Sonnei, che dà positivo, di Shigella Boydii, Shigella Flexneri e S. Dysenterieae, Danno negativo.

Differenzia anche il genere Klebsiella, che dà negativo, del genere Enterobacter, dove la maggior parte delle sue specie dà positivo.

Fonte: Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnosi microbiologica. 5 ° ed. Pan -American Editoriale S.A. Argentina.

QA

Ogni volta che viene preparata la mia metà, è possibile eseguire un test di controllo. Per questo, i ceppi noti o certificati vengono utilizzati per osservare il comportamento del mezzo.

I ceppi che possono essere utilizzati sono Escherichia coli, Morganella Morganii, Klebsiella pneumoniae, Enterobacter Aerogenes E Proteus mirabilis.

I risultati previsti sono E. coli e m. Morganii. Dan m: +, i: + e o: +.

Klebsiella pneumoniae Dai tutto negativo (M:-, i:-, o :-). Proteus mirabilis E Enterobacter Aerogenes Dan m:+ i:- e o: +.

Riferimenti

1. Mac Faddin J. (2003). Test biochimici per l'identificazione dei batteri dell'importanza clinica. 3a ed. PAN -American Editoriale. Buenos Aires. Argentina.
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnosi microbiologica di Bailey e Scott. 12 ed. Pan -American Editoriale S.A. Argentina.