Brodo di soia tripticaseína cosa è, fondazione, preparazione, usi

Lui Brodo di soia tripticaseína È un terreno di coltura liquida, molto nutriente e non selettivo. A causa della sua grande versatilità, è uno dei terreni di coltura liquida più comunemente usati nel laboratorio di microbiologia.

È anche noto con il nome di soia triptica Tryptic Io sono Brodo o CST). I suoi usi sono molto vari a causa della loro composizione. È composto da tripteina, peptone di soia, cloruro di sodio, dipotassio e fosfato di glucosio.

Soia soia tripticaseína seminata con un ceppo di pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 dove si osserva la produzione di pigmenti. Fonte: foto scattata dall'autore MSC. Marielsa Gil.

È in grado di riprodurre batteri patogeni clinicamente importanti, compresi quelli che richiedono dal punto di vista nutrizionale e batteri anaerobici. Alcuni funghi opportunistici e inquinanti possono anche svilupparsi in questo mezzo.

A causa della sua alta potenza nutrizionale, ha un'elevata sensibilità per rilevare la contaminazione microbica, per questo motivo è stato scelto dal servizio di ispezione per la salute degli animali e delle piante dell'USDA per l'analisi microbiologica dei vaccini.

Allo stesso modo, il brodo di soia Tripticaseína soddisfa le esigenze dei diversi farmacopoi (EP europeo, JP giapponese e USP nordamericano) per lo studio microbiologico dei prodotti a livello industriale, come cosmetico e cibo.

D'altra parte, vale la pena ricordare che nonostante il suo grande uso questo mezzo è relativamente economico, quindi è conveniente per la maggior parte dei laboratori di microbiologia. Inoltre, è molto facile da preparare.

Base

Tripteine, peptone e glucosio forniscono proprietà nutrizionali essenziali per renderlo un mezzo ideale per lo sviluppo microbico rapido.

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Circa 6-8 ore di incubazione puoi già apprezzare la crescita nella maggior parte dei microrganismi. Tuttavia, ci sono ceppi di crescita lenti che possono durare giorni per crescere.

Il cloruro di sodio e il fosfato dipotasico fungono rispettivamente come un equilibrio del regolatore osmotico e del pH. La presenza di crescita è evidenziata dall'aspetto della torbidità nel mezzo; Se non c'è crescita, il mezzo rimane traslucido.

A causa del suo colore chiaro è possibile osservare la produzione di pigmenti, come quello mostrato nell'immagine situata all'inizio dell'articolo, che corrisponde al pigmento prodotto da Pseudomonas aeruginosa. 

Preparazione

-Brodo di soia tripticaseína

Per preparare il brodo di soia trittico, 30 gr di mezzo commerciale disidratato devono essere pesati in equilibrio digitale. Quindi si dissolve in un litro di acqua distillata contenuta in un fissola.

La miscela viene lasciata a riposo per 5 minuti e successivamente prende una fonte di calore per aiutare la dissoluzione media. Deve essere agitato frequentemente mentre bolle per 1 minuto.

Una volta sciolto, è distribuito in tubi delle dimensioni appropriate secondo necessità. Puoi usare tubi con tapas di cotone o baquelita. Successivamente, i tubi sono sterilizzati nell'autoclave a 121 ° C per 15 minuti.

Il pH medio deve essere 7,3 ± 0,2

Va in considerazione che il colore della coltura disidratata è chiaro e dovrebbe essere immagazzinato tra 10 e 35 ° C, in un luogo asciutto. Mentre il brodo preparato è ambra chiaro e deve essere conservato in frigo (da 2 a 8 ° C).

-Varianti di brodo di soia tripticaseína

Il brodo di soia tripticaseina modificato può essere preparato aggiungendo sali biliari e novobiocina per farlo selettivo per l'isolamento di E. coli. Un'altra opzione per lo stesso scopo è quella di preparare il brodo di soia di soia integrato con vancomicina, cefixime e telurito (2,5 µg/ml).

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D'altra parte, più glucosio (0,25%) può essere aggiunto al brodo di soia tripticaseína quando l'obiettivo è quello di stimolare la formazione di biofilm.

Utilizzo

È abbastanza nutriente da consentire la crescita di batteri esigenti o fastidiosi come Streptococcus pneumoniae, Streptococcus SP e Brucella sp, Non è necessario integrare con sangue o siero.

Allo stesso modo, alcuni funghi possono svilupparsi in questo brodo, come Candida albicans Complex, Aspergillus sp E Histoplasma capsulatum.

Inoltre, questo mezzo in condizioni anaerobiche è ideale per il recupero di batteri appartenenti al Clostridium di genere, nonché batteri anaerobici non spourulati di importanza clinica.

Se viene aggiunto il 6,5% di cloruro di sodio, può essere utilizzato per la crescita di enterococcus e altri streptococco del gruppo D.

A livello di ricerca è stato molto utile in vari protocolli, specialmente nello studio di biofilm o biofilm che formano batteri. Viene anche utilizzato per preparare la sospensione batterica MAC Farland allo 0,5% necessaria per eseguire l'antibiogramma con il metodo Kirby e Bauer.

In questo caso, sono prese da 3 a 5 colonie di aspetto simile. Quindi viene incubato per 2-6 ore a 35-37 ° C e successivamente si adatta alla concentrazione desiderata usando una soluzione salina sterile. La tripticaseina i veglia di soia non deve essere utilizzato da 18 a 24 ore di incubazione.

Seminato

Il campione può essere seminato direttamente o le colonie pure prese da mezzi selettivi possono essere soggette a. L'inoculo deve essere piccolo in modo da non offuscare il mezzo prima dell'incubazione.

Normalmente è incubato a 37 ° C in aerobiosi per 24 ore, ma queste condizioni possono variare a seconda del microrganismo che viene richiesto. Può anche essere incubato in condizioni di anaerobiosi a 37 ° C per diversi giorni se necessario. Ad esempio, nel chiedere microrganismi o una crescita lenta, può essere incubato fino a 7 giorni.

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Nell'analisi microbiologica delle sostanze farmaceutiche - come i vaccini - i protocolli sono più rigorosi. In questi casi il brodo senza crescita non è escluso fino a quando non si incontra 14 giorni di incubazione continua.

QA

Da ogni lotto preparato, 1 o 2 tubi dovrebbero essere incubati per dimostrare la sua sterilità. Deve rimanere senza modifiche.

Puoi anche seminare ceppi noti per valutare il tuo comportamento. Tra i ceppi che possono essere utilizzati sono:

Aspergillus brasiliensis ATCC 1604, Candida albicans ATCC 10231, Bacillus subtilis ATCC 6633, Staphylococcus aureus ATCC 6538 o 25923, Escherichia coli ATCC 8739,  Streptococcus pyogenes ATCC 19615, Streptococcus pneumoniae ATCC 6305, Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Salmonella typhimurium ATCC 14028.

In tutti i casi la crescita deve essere soddisfacente nelle condizioni dell'atmosfera e una temperatura adeguata per ciascun microrganismo.

Limitazioni

-La fermentazione del glucosio provoca la discesa del pH medio mediante produzione acida. Questo può essere sfavorevole per la sopravvivenza di un po 'di microrganismi sensibili all'acidità.

-Non è raccomandato per il mantenimento dei ceppi, perché oltre all'acidità, batteri dopo alcuni giorni di nutrienti di scarico con il conseguente accumulo di sostanze tossiche che rendono l'ambiente inospitale.

-Devi lavorare a prendersi cura di tutti i protocolli di sterilità, poiché i brodi sono facilmente contaminabili.

-Dopo aver preparato i brodi di soia della tripticaseina, non dovrebbe essere tentato di trasferire il brodo per un altro tubo sterile, perché questo tipo di manovre è molto vulnerabile alla contaminazione.

Riferimenti

1. Britania Laboratory. Brodo di soia a tripteine. Disponibile su: Britaniab.com
2. Laboratorio MCD. Brodo di soia tripticaseína. Disponibile su: Sistemi elettronici.com
3. Neogen Laboratory.  Brodo di soia trittico. Disponibile su: sicurezza alimentare.Neogen.com