Brodo di lattosado

Brodi in allattata torbidamente. Fonte: foto scattata dall'autore MSC. Marielsa Gil

Cos'è il brodo Lactosado?

Lui Brodo di lattosado È una coltura liquida, non selettiva, utilizzata principalmente come mezzo di pre-arricchimento nell'isolamento dei ceppi di Salmonella, Dall'analisi microbiologica fatta a alimenti trasformati, prodotti lattiero -caseari o acqua. Ciò è raccomandato dalla Commissione internazionale sulle specifiche microbiologiche per gli alimenti (ICMPF).

Il mezzo contiene gelatina enzimatica, carne di carne e lattosio, sostanze necessarie per la crescita batterica. Inoltre, il lattosio è un carboidrato fermentabile, quindi alcuni coliformi sono in grado di spiegarlo con la produzione di gas.

Pertanto, il brodo Lactosado è raccomandato dall'American Public Health Association (APHA) per lo studio presuntivo dei batteri coliformi totali e fecali. È descritto come un'ottima alternativa per sostituire il brodo triptosio di Lauril Solfato nella tecnica standard del numero più probabile (NMP), utilizzato per l'analisi microbiologica di campioni di cibo, latte e acque superficiali, sotterranei, ricreativi, domestici e industriali.

Base

Per l'analisi microbiologica di alcuni campioni, il passaggio del pre-arricchimento è essenziale per recuperare un microrganismo specifico che può essere in quantità molto basse o in condizioni non favorevoli che violano o minimizzano la sua vitalità. 

Questo è il caso degli alimenti secchi e trasformati, possibilmente contaminati da Salmonellas sp. In questi casi, se sono presenti batteri, hanno subito abusi fisici e chimici durante il processo di produzione del prodotto.

In modo tale che i microrganismi siano esposti a fattori avversi come la disidratazione, l'esposizione a prodotti inibitori o tossici e la sovrapposizione generata dalla presenza di altri batteri in maggiore quantità, tra gli altri.

In questo senso, il brodo Lactosado ha un effetto di riparazione delle strutture danneggiate del microrganismo, causando il recupero e la riproduzione, in modo tale da poter essere rilevato.

Allo stesso modo, il brodo Lactosado ha la capacità di diluire sostanze inibitorie che possono influire sulla sua vitalità, permettendo il suo sviluppo. Inoltre, la composizione nutrizionale del brodo lattico è strategica per favorire la crescita di Salmonella sp Sopra altri microrganismi.

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Per l'identificazione finale, deve essere sub-culturale verso altre culture definitive.

D'altra parte, la composizione del mezzo consente anche di rilevare microrganismi fermentari che producono gas.

Preparazione

Per preparare un litro di brodo di lattosio, 13 grammi del mezzo disidratato devono essere pesati e sciolti in 1.000 ml di acqua distillata.

Per aiutare lo scioglimento del mezzo nell'acqua puoi riscaldare un po 'la soluzione, ma non troppo.

Una volta omogenea, la soluzione viene preparata come segue: se il brodo verrà utilizzato per la ricerca di coliformi, viene preparato uno shock con tubi di prova, che viene introdotto un tubo di fermentazione Durham verso il basso.

Il tubo di Durham è un dettaglio molto importante, perché consentirà la formazione di gas, dati di grande valore nella ricerca di coliformi.

Preparati i tubi, 10 ml del brodo Lactosado sono dispensati in essi, quantità che deve essere sufficiente per coprire l'intero tubo Durham.

Se il brodo Lactosado verrà usato come brodo pre-enrique, non è necessario posizionare il tubo di fermentazione Durham. In questo caso, sono necessari più medi (225 ml), che verranno serviti in barattoli da 500 ml, bocca larga e con copertura del filo resistente ai termici.

Successivamente, i tubi o le bottiglie vengono portati all'autoclave a 121 ° C per 15 minuti.

Il mezzo deve essere a un pH finale di 6.9 ± 0.Da 2 a 25 ° C.

I brodi sono conservati in frigorifero fino all'uso. Prima di essere utilizzati, devono temperare a temperatura ambiente.

D'altra parte, il brodo Lactosado può anche essere preparato a doppia concentrazione.

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Alcuni laboratori aggiungono Brome. In questo caso, il brodo prende un colore viola e se ci sono cambiamenti di fermentazione in giallo.

Applicazioni

Nei laboratori di microbiologia, il brodo Lactosado è ampiamente utilizzato perché è un mezzo relativamente economico che offre risultati affidabili e veloci (24-48 ore).

Può essere usato per l'analisi dei coliformi totali e fecali in acqua e cibo, o come brodo pre-enrique per Salmonella.

Pre-arricchimento

Il pre-arricchimento è un passo prima dell'arricchimento del campione, che migliora notevolmente il recupero dei batteri di genere Salmonella Negli alimenti trasformati.

Per fare ciò, il campione di alimenti solidi (25 grammi) o liquido (25 ml) viene seminato in 225 ml di brodo di lattosado, incubando per 24-48 ore. Successivamente, sarà sub-culturale in un mezzo arricchito come brodo di selenito cistina o brodo di tetration. Quindi vai su Selective Media XLD e SS.

Analisi coliforme totale e fecale

È un mezzo eccellente come indicatore della contaminazione fecale.

Pertanto, il brodo Lactosado è ideale per la fase presuntiva dello studio coliforme con il metodo numerico più probabile.

Per i campioni in cui si sospetta un gran numero di coliformi, verrà inoculata una quantità inferiore dello stesso (1 ml), mentre per i campioni in cui si sospettano meno coliformi, viene inoculato un maggiore volume di campionamento (10 mL).

Per l'analisi, 10 vengono realizzati^-1, 10^-2, 10^-3, Formando una batteria da 3-5 tubi per ogni concentrazione utilizzata.

Da ogni diluizione lo stesso volume viene seminato sui brodi di lattosado.

I tubi sono incubati per 24 ore. I brodi che sono negativi sono incubati per 24 ore in più.

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L'interpretazione dei risultati viene eseguita dall'osservazione di due caratteristiche: la prima è la presenza o l'assenza di torbidità e poiché questo mezzo non contiene indicatore di pH, non vi sarà alcun cambiamento di colore.

Il secondo è la produzione di gas. Il gas è facilmente evidenziato nel tubo Durham, dall'aspetto di una o più bolle d'aria all'interno.

È considerato positivo se si osservano entrambe le caratteristiche, cioè torbidità con produzione di gas. I tubi positivi devono essere respinti nei media di conferma (brodo verde biliare brillante 2% e brodo CE).

Controllo di qualità media

• Nella preparazione del mezzo è importante non dimenticare di posizionare i tubi Durhams se lo scopo dello stesso è lo studio dei coliformi.
• Non surriscaldare il mezzo prima di sterilizzare.
• Distribuire nei tubi di prova prima della sterilizzazione, mai dopo.
• Non utilizzare se il mezzo ha più di 3 mesi preparato.
• Non utilizzare se si osserva un cambiamento delle solite caratteristiche del mezzo.
• Quando si prepara un lotto di brodo Lactosado, devi dimostrare la qualità degli stessi ceppi di semina noti come Escherichia coli, Enterobacter Aerogenes, Citrobacter freundii E Klebsiella pneumoniae. Crescono molto bene, con la produzione di gas (controllo positivo).
• Può anche includere Pseudomonas aeruginosa, Salmonella Typhimurium O Enterococcus faecalis, Crescono bene, ma senza produzione di gas (controllo negativo).
• Deve essere in sospeso che il colore originale del mezzo disidratato sia il beige e quello del mezzo preparato giallo molto chiaro e trasparente. Se si osserva un cambiamento di colore o aspetto, potrebbe esserci un deterioramento dello stesso.

Riferimenti

1. Acevedo r., Severiche, c., Castillo, m. Biologia ambientale e microbiologia. Università di Cartagena, Colombia.
2. Conda Ponadisa Laboratories. Brodo di lattosio doppia concentrazione (European Pharm).