Agar TSI cos'è, fondazione, preparazione, usi

Lui TSI Agar o L'agar triplo in ferro di zucchero è un terreno di coltura solida che funge da test biochimico per guidare l'identificazione iniziale dei bacilli Gram negativi. Si basa su prove.

La sua composizione e fondazione sono molto simili al test Hierro Kigler, con la differenza che quest'ultimo contiene solo glucosio e lattosio. D'altra parte, come indica il nome: il triplo agar in ferro di zucchero contiene tre carboidrati fermentabili: glucosio, lattosio e saccarosio.

Inoltre, il mezzo TSI ha quattro derivati ​​proteici che lo rendono un agar molto nutriente: estratto di lievito, estratto di carne, peptone e proteina peptone. Contiene anche solfato di ammonio ferroso, tiosolfato di sodio, cloruro di sodio, rosso fenolo e agar.

L'incapacità di un microrganismo nel fermentare il glucosio presente nell'ambiente lo esclude immediatamente dall'appartenenza alla famiglia Enterobacteriaceae. Pertanto, questo test è essenziale per decidere quale percorso di identificazione dovrebbe essere preso per determinare il genere e le specie.

Ogni laboratorio decide se funziona con TSI Agar o con Kligler Hierro.

Base

Ciascuno dei composti svolge una funzione all'interno del mezzo.

Cloruro di sodio e agar

Il cloruro di sodio è necessario per mantenere l'equilibrio osmotico del mezzo. Mentre l'agar ti dà una solida consistenza.

Indicatore di pH (rosso fenolo)

Il pH medio preparato è bilanciato a 7,3 e l'indicatore di pH (rosso fenolo) diventa giallo al di sotto di 6,8. Ciò significa che piccole quantità di acidi prodotti dalla fermentazione degli zuccheri trasformerà il mezzo rosso-arancio in giallo.

Se non si verifica la fermentazione, ci sarà alcalizzazione del mezzo a causa dell'uso di peptone, che si trasforma dal rosso-arancio a rosso forte rosso.

Derivati ​​proteici (estratto di lievito, estratto di carne, peptone e proteina peptone)

Quando i batteri metabolizzano le proteine ​​presenti nell'agar TSI, vengono prodotte le ammine che alcalizzano il mezzo (principalmente a livello della cornice), perché la reazione ha bisogno di ossigeno. Le ammine trasformano la cornice in forte rosso.

Ma questo dipenderà dalla capacità di fermentare batteri o non di carboidrati.

Fermentazione di carboidrati (glucosio, lattosio e saccarosio)

Lo studio della fermentazione degli zuccheri può fornire diverse immagini e ognuna viene interpretata in modo diverso. L'interpretazione del test divide i microrganismi in 3 categorie: fermentatori non glucosio, fermentatori non lattosio e fermentatori di lattosio/saccarosio.

Va notato che la quantità di glucosio nel mezzo è limitata, mentre la concentrazione di lattosio e saccarosio è 10 volte superiore.

I batteri della famiglia Enterobacteriaceae e altri microrganismi che fermentano il glucosio inizieranno a fermentare questo zucchero perché il carboidrato più semplice è ottenere energia per ottenere energia.

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D'altra parte, il lattosio e il saccarosio sono carboidrati complessi che devono essere decomposti e diventare glucosio in modo che possano entrare nel ciclo Embden-Meyerhof.

-Microrganismi non fermentari

Quando il microrganismo inoculato non è in grado di fermentare il glucosio, molto meno può fermentare altri carboidrati. Pertanto, gli acidi non sono formati qui, ma c'è la formazione di ammina nella cornice a causa dell'uso di peptones.

In questo caso, la smussaggio diventa forte.

Interpretazione: k / k significa smalto alcalino / alcalino o sfondo neutro

Nell'immagine trovata all'inizio dell'articolo vedi l'immagine del tubo d.

Questo risultato indica che il microrganismo non appartiene alla famiglia Enterobacteriaceae.

-Microrganismi non fermentari di lattosio/saccarosio

Se i batteri sono in grado di fermentare il glucosio ma non il lattosio o saccarosio, avverrà quanto segue:

I batteri consumano tutto il glucosio presente dopo circa 6-8 ore, essendo in grado di acidificare sia la cornice che il taco; cioè, l'agar si sarà completamente giallo. Ma quando il glucosio è esaurito e data l'impossibilità di usare lattosio e saccarosio, i batteri inizieranno il metabolismo delle proteine.

Questa reazione ha bisogno di ossigeno, quindi la degradazione di Peptonas si verifica sulla superficie (cornice). Le ammine producevano alkleinizzano il giallo vento con smussatura rossa. Questa reazione è evidenziata a 18-24 ore di incubazione.

Interpretazione: k/a mezzi la cornice alcalina e il taco acido.

Nell'immagine trovata all'inizio dell'articolo vedi l'immagine del tubo B.

-Microrganismi fermentari/saccarosio

I microrganismi in grado di fermentare lattosio e saccarosio possono ovviamente fermentare il glucosio. Dopo che la quantità minima di glucosio presente nel mezzo è esaurita, il piruvato formato inizia a metabolizzare per formare acidi attraverso il ciclo aerobico di Krebs e nel periodo da 8 a 12 ore l'intero mezzo sarà giallo.

Se i batteri sono in grado di aprire il lattosio o il saccaros.

Va notato che l'uso di glucosio.

Interpretazione: A/ A significa sfondo acido e acido. Può presentare gas o no.

Nell'immagine trovata all'inizio dell'articolo vedi l'immagine del tubo a.

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Produzione di gas

Alcuni microrganismi sono in grado di produrre gas durante la fermentazione degli zuccheri. Il gas è evidenziato nel tubo a causa della pressione che esercita all'interno dell'agar. La pressione provoca la formazione di bolle o lo spostamento dell'agar. A volte la formazione di gas può fratturare l'ambiente.

È importante che quando seminano il mezzo TSI, la puntura viene eseguita in modo pulito attraverso il centro dell'agar fino a raggiungere il fondo. Se la puntura si discosta alle pareti del tubo, può causare falsi positivi nella produzione di gas, poiché sfuggirà al canale formato erroneamente.

La produzione di gas, nonché le reazioni che si verificano nello smusso di agar, necessitano di ossigeno, quindi si raccomanda che il tubo sia coperto con tappo di cotone e se si utilizza il coperchio baquelite, non dovrebbe essere completamente regolato.

La produzione di gas è riportata come positiva (+) o negativa (-).

Tiosulfato di sodio e solfato di ammonio ferroso (produzione di idrogeno solforato)

Batteri in grado di produrre idrogeno solforato (gas incolore), assumere lo zolfo di tiosolfato di sodio presente nel mezzo. Una volta formata la H₂S reagisce con solfato di ammonio ferroso, producendo solfuro di ferro (precipitato nero chiaramente visibile).

H₂S è riportato come positivo (+) o negativo (-).

Nell'immagine trovata all'inizio dell'articolo vedi l'immagine del tubo C.

Preparazione

Pesare 62,5 gr dell'agar di ferro da mezzo (TSI) disidratato e dissolversi in un litro di acqua distillata.

Caldo per sciogliere l'agar. Bollire. Distribuire 4 ml del mezzo in tubi di prova 13/100 con coperchio di cotone.

Sterilizzare in autoclave a 121 ° C per 15 minuti. Togliere dall'autoclave e lasciarle inclinare. Dovrebbe essere cura che sia la base che lo smusso abbiano la stessa distanza.

Conservare in un frigorifero di 2-8 ° C. Lascia un carattere prima di seminare la tensione batterica.

Il colore del mezzo disidratato è beige leggero e il mezzo preparato è rosso-arancio

Il pH finale del mezzo preparato è 7,3 ± 0,2.

Applicazioni

Il test TSI è ampiamente utilizzato a livello di laboratorio di microbiologia. Questo test è indispensabile per guidare il tipo di test che deve essere applicato per raggiungere l'identificazione del genere e delle specie. La tua buona esecuzione e interpretazione può salvare materiale e funzionare.

Se il risultato è un TSI K/K K e il test del citocromo ossidasi fornisce positivo, i test dovrebbero essere usati per l'identificazione di bacilli Gram negativi non fermentanti, come Pseudomonas, alcalino, Achromobacter, Burkholderia, tra gli altri generi. Se si tratta di ossidasi negativa, è orientato verso l'acinetobacter, gli stenotrophomonas, ecc.

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D'altra parte, se si ottiene un TSI A/A o K/A e il test del citocromo ossidasi è negativo, riducono i nitrati ai nitriti, saremo certi che si tratti di un microrganismo appartenente alla famiglia Enterobacteriace. In questo caso, il percorso di identificazione sarà orientato a test specifici per questo gruppo di batteri.

D'altra parte, se si ottiene un'immagine K/A o A/A e il test del citocromo ossidasi è positivo, i test aggiuntivi saranno diretti all'identificazione di ceppi di fermentazione che non appartengono alla famiglia Enterobacteriaceae, come: Aeromonas , Plesiomonas, Vibrio e Pasteurella.

Un TSI con idrogeno solforato, ossidasi negativa, guiderà i seguenti generi della famiglia Enterobacteriaceae: Proteus, Citrobacter, Edwardsiella, Leminorella, Pragia, Trabusiella o Salmonella.

Un TSI con idrogeno solforato scarso o moderato nella lunetta alcalina con sfondo alcalino e un'ossidasi positiva, guiderà i test per l'identificazione di bacilli gram non fermentanti che producono produttori di H₂S, as Shewanella putrefaciens.

Infine, la TSI può essere utilizzata per lo studio della produzione di idrogeno solforato nei bacilli gram positivi, specialmente quando sospettati di Esipelothrix rhusiopatiae.

Seminato

Il mezzo TSI deve essere inoculato con colonie pure, isolate nelle colture primarie o selettive. Se la colonia è presa da mezzi selettivi che sono stati seminati con campioni con flora mista, è necessario prelevare solo dalla superficie, poiché nella parte inferiore della colonia potrebbero esserci ceppi vitali inibiti in quel mezzo.

Pertanto, la maniglia non dovrebbe mai raffreddare in un mezzo selettivo e quindi prendere la colonia e inoculare un mezzo TSI.

Il seminato verrà fatto con un ago dritto o. La puntura verrà eseguita, prendendo cura che sia attraverso il centro del mezzo fino a raggiungere il fondo, quindi la semina è finita inoculando la superficie a forma di zigzag. Non effettuare due forature.

Incubare a 37 ° C in aerobiosi per 18-24 ore. Interpretare in questo momento, né prima, né dopo.

Limitazioni

Il test TSI deve essere letto tra 18 e 24 ore di incubazione. Una lettura prima di questo momento può dare una falsa fermentazione a/a. Mentre una lettura dopo questo tempo, può portare a un'immagine falsa negativa di non ferment, a causa del consumo di peptones che alkalizzano il mezzo.

Riferimenti

1. Britania Laboratories. TSI Agar (Triple Sugar Iron Agar). 2015. Disponibile su: Britaniab.com
2. Laboratori BD. Agar a triplo zucchero di zucchero (agar TSI). 2003. Disponibile su: BD.com