Agar di sangue

Un approccio di sangue. Con licenza

Cos'è il sangue agar?

Lui Agar di sangue È un terreno di coltura solida arricchita, utilizzato per il recupero e la crescita di un'ampia varietà di microrganismi da campioni clinici o soggettivi.

Questo terreno di coltura è sostanzialmente composto da un agar di base arricchito e sangue di pecora al 5%. La base di agar può variare in base alle esigenze, ma principalmente sarà composta da peptonas, aminoacidi, vitamine, estratto di carne, cloruro di sodio, agar, tra gli altri. Per quanto riguarda il sangue, a volte viene usato il sangue umano.

La raccolta del sangue può essere preparata in laboratorio o può già essere acquistata, da aziende che ne sono dedicate. La preparazione di questo mezzo è molto delicata, qualsiasi disattenzione nella sua elaborazione comporterà un lotto contaminato.

Pertanto, devono essere prese tutte le precauzioni possibili e alla fine eseguono un controllo di qualità incubando 37 ° C 1 piastra per 100 che vengono preparati.

Base

Staphylococcus aureus coltivato in agar sangue. Fonte: Nathan Reading su Flickr Nathan R. Su Twitter, Wikimedia Commons

L'agar sangue è un mezzo arricchito, differenziale e non selettivo. 

• È un mezzo arricchito perché porta come un additivo principale del 5-10% di sangue su una base di agar. Entrambi i composti contengono molti nutrienti che consentono ai batteri più coltivabili di crescere in esso.
• Tale crescita si verifica senza restrizioni, quindi non è selettiva. Tuttavia, se vengono aggiunti composti che impediscono la crescita di alcuni microrganismi e favoriscono quello degli altri, diventa selettivo. Ad esempio, se vengono aggiunti alcuni tipi di antibiotici o antifungini.
• È differenziale, poiché consente di distinguere 3 tipi di batteri: beta-emolitica, alfa-emolitica e gamma-emolitica.
• Beta-emolitico sono quelli che hanno la capacità di Lisar o completare. Esempi di batteri ß-emolitici sono Streptococcus pyogenes E Streptococcus agalactiae.
• Alfa-emolitico sono quelli che eseguono emolisi parziale, in cui l'emoglobina è ossidata in metemoglobina, generando una colorazione verdastra intorno alle colonie. Questo fenomeno è noto come emolisi α o α-emolisi e i batteri sono classificati come α-emolitici. Esempio di batteri α-emolitici sono Streptococcus pneumoniae E Streptococco del gruppo Viridani.
• I batteri gamma-emolitici o non emolitici crescono sull'agar senza generare cambiamenti in esso, un effetto noto come emolisi γ e il microrganismo sono γ-emolitici. Esempio di batteri γ-emolitici: alcuni ceppi di Streptococco del gruppo D (Streptococcus bovis e Enterococcus faecalis).

Applicazioni

• Questo terreno di coltura è uno dei più comunemente usati nel laboratorio di microbiologia. Tra i microrganismi in grado di crescere in questo mezzo ci sono: batteri a rapida crescita o batteri a rapida crescita o batteri a rapida crescita o batteri a rapida crescita o batteri a rapida crescita o batteri a rapida crescita o crescita a rapida crescita o batteri a rapida crescita o crescita a rapida crescita o batteri a rapida crescita o crescita a bassa crescita o crescita a bassa crescita o crescita lenta.
• Alcuni batteri impegnativi o fastidiosi crescono anche dal punto di vista nutrizionale, nonché funghi e lieviti. È utile per i ceppi soggettivi o riattivanti che sono metabolicamente molto deboli.

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Tuttavia, la scelta dell'agenzia di sangue e base varierà a seconda del microrganismo che potrebbe riprendere e dell'uso che verrà dato alla piastra (coltivazione o antibiogramma).

Scelta del gruppo sanguigno

Il sangue può essere di agnello, coniglio, cavallo o umano.

Il più raccomandato è il sangue di agnello, ad eccezione di alcune eccezioni. Ad esempio, per isolare le specie di Emofilo, Dove il sangue raccomandato è cavallo o coniglio, poiché il sangue di agnello ha enzimi che inibiscono il fattore V.

Il meno raccomandato è l'uomo, sebbene sia il più usato, forse perché è il più semplice da ottenere. 

Il sangue deve essere defibinario, ottenuto senza additivi e da animali sani. Per l'uso del sangue umano, devono essere tenuti a mente diversi fattori:

• Se il sangue viene da individui che hanno subito infezioni batteriche, possiederanno anticorpi specifici. In queste condizioni è probabile che la crescita di alcuni batteri sarà inibita.
• Se ottenuto dalla banca del sangue, contiene citrato ed è possibile che alcuni batteri non si sviluppino in sua presenza.
• Se il sangue proviene da pazienti che assumono antibiotici, la crescita dei batteri sensibili può essere inibita.
• E se il sangue proviene da una persona diabetica, l'eccesso di glucosio interferisce con i modelli di emolisi in via di sviluppo adeguati.

Scelta del tasso di base

L'agar di base utilizzato per la preparazione dell'agar nel sangue può essere molto ampio. Tra questi ci sono: Agar nutrienti, Cerebro Heart Infusion, Triptych Soybeans, Müeller Hinton, Thayer Martin, Columbia Agar, Brucella Agar, Campylobacter Agar, ecc.

Usi dell'agar del sangue secondo il mezzo di base utilizzato per la preparazione

Agar nutriente

Questa base è la meno utilizzata, perché crescerà principalmente batteri non demandosi, come i bacilli enterici, Pseudomonas sp, S. Aureus, Bacillus SP, tra gli altri. Non è consigliabile isolare Streptococco.

Cerebro Heart Infusion (BHI)

È uno dei più utilizzati come base, perché ha i nutrienti necessari per la crescita della maggior parte dei batteri, anche Streptococcus sp e altri batteri esigenti. Sebbene non sia appropriato osservare i modelli di emolisi.

Con questa base, viene utilizzato il sangue di agnello.

Puoi anche preparare varianti di agar nel sangue, in cui vengono aggiunti altri composti per isolare alcuni microrganismi. Ad esempio, l'infusione Cerebro cuore integrato con sangue di coniglio, cistina e glucosio, serve a isolare Francisella tularensis.

Mentre, con Cistina TelUrito, è utile isolare Corynebacterium difteriae. Il sangue umano o di agnello può essere usato.

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Con il primo, la beta-trimolisi sarà vista come un alone stretto, mentre con il secondo l'alone sarà molto più ampio.

Questa base, insieme a bacitracina, amido di mais, sangue a cavallo e altri integratori di arricchimento (Isovalex), viene utilizzata per l'isolamento di genere Haemophilus sp Da campioni respiratori.

Se viene aggiunta la combinazione di cloramfenicolo-ottamicina o penicillina-stuffyin antibiotici con sangue di cavallo, serve a isolare i funghi patogeni impegnativi, anche con prestazioni più elevate all'agar di glucosio Sabouraud. Soprattutto è utile in isolamento di Histoplasma capsulatum.

Triptyse Soy Agar

Questa base è la più raccomandata per osservare meglio il modello di emolisi e la realizzazione di test diagnostici, come le tasse Opto -Corner e BaciTracine. È il classico agar di sangue usato dalla routine.

Con questa base puoi anche preparare l'agar di sangue speciale per Corynebacterium difteriae, Con Telurito cistina E sangue di agnello.

La combinazione di questo sangue di agar, più kanamicina-vancomicina, è ideale per la crescita anaerobica, in particolare Bacteroides sp.

Müeller Hinton Agar

Questa base integrata nel sangue viene utilizzata per eseguire l'antibiogramma di microrganismi esigenti, come Streptococcus sp. È anche utile per isolare i batteri come Legionel pneumophila.

Thayer Martin Agar

Questo mezzo è l'ideale come base di agar nel sangue quando il sospetto del genere Neisseria, particolarmente Neisseria Meningitidis, dato che N. Gonorrhoeae Non cresce nell'agar del sangue. Serve anche a eseguire test di suscettibilità a Neisseria Meningitidis.

Columbia Agar

Questa base è eccellente per seminare campioni di biopsie gastriche in cerca di Helicobacter pylori.

Il mezzo sta preparando il 7% del sangue di agnello defibinario con antibiotici (vancomicina, trimetoprim, anfotericina B e cefsulodina) per limitare la crescita di altri tipi di batteri che possono essere presenti.

Questa stessa base integrata con sangue umano o di agnello, nalidíxico e acido colistina è utile per isolare Gardnella vaginalis. È anche l'ideale per valutare la suscettibilità antimicrobica agli antibiotici dello stesso microrganismo.

Inoltre, serve per la preparazione dell'agar sangue per la coltivazione anaerobica, aggiungendo aminoglicosidi e vancomicina. Questa base ci consente di osservare correttamente i modelli di emolisi.

Brucella Agar

Questo mezzo usato come base di agenzia di sangue, insieme all'aggiunta della vitamina K, è ideale per la coltivazione di batteri anaerobici. In questo caso, si consiglia l'uso di sangue di agnello.

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Campylobacter Agar

Agar Campylobacter integrato con sangue di RAM al 5% e 5 antibiotici (cefalotina, amfotericina B, trimetoprim Campylobacter Jejuni Nei campioni di feci.

Preparazione

Ogni casa commerciale porta al contrario della confezione delle indicazioni per preparare un litro di terreno di coltura. I calcoli corrispondenti possono essere effettuati per preparare l'importo desiderato, secondo l'agar di base selezionato.

Pesare e dissolversi

L'agar di base è disidratato (in polvere), quindi deve essere sciolto in acqua distillata regolata a pH 7,3.

La quantità indicata dall'agar di base scelto viene pesata e sciolta nella corrispondente quantità di acqua in una fissala, quindi viene riscaldata a calore moderato e si mescola con movimenti rotanti fino a quando l'intera polvere.

Sterilizzare

Una volta sciolto, sterilizzare in autoclave a 121 ° C per 20 minuti.

Aggregato di sangue

Quando si lascia l'autoclave, la fissala verrà raffreddata fino a quando la temperatura varia da 40 a 50 ° C. È una temperatura che supporta la pelle umana e allo stesso tempo l'agar non si è ancora solidificato.

Per fare ciò, il fissola viene toccato con la mano e se il calore è tollerabile, è la temperatura ideale per aggiungere il corrispondente sangue defibinario (50 ml per litro di agar). Mescolare per omogeneizzare.

Il passaggio dell'aggregato del sangue è cruciale, perché se viene fatto quando il mezzo è molto caldo, i globuli rossi si romperanno e il mezzo non servirà ad osservare l'emolisi.

Se viene aggiunto troppo freddo, si formeranno i grumi e la superficie del mezzo non sarà liscia per essere in grado di creare lo striato correttamente.

Versare nei piatti di Petri

Servire in piastre di Petri sterili immediatamente dopo omogeneizzare il sangue. In ogni piastra di Petri viene versata circa 20 ml. Questa procedura viene eseguita in una campana di flusso laminare o vicino all'accendino.

Al momento di servire il sangue sulle piastre di Petri, le bolle d'aria non dovrebbero essere lasciate sulla superficie della placca. Se ciò accade, la fiamma dell'accendino di Bunsen viene passata rapidamente sul piatto per rimuoverli.

Le piastre possono consolidarsi e sono conservate in frigo (2-8 ° C) invertite fino all'uso. Prima di usare piastre di agar nel sangue, devono essere temperanti per essere in grado di seminare.

Le piastre preparate hanno una durata approssimativa di 1 settimana.

Riferimenti

1. Bayona, m. Condizioni microbiologiche per la coltivazione di Helicobacter pylori. Rev. Cavolo. Gastroenterol. 
2. Forbes, b ,, sahm, d., Weissfeld, a. Diagnosi microbiologica di Bailey e Scott. Pan -American Editoriale S.A.