Agar cioccolato

Batteri Yersinia pestis su una targa di agar al cioccolato. Fonte: Dipartimento della salute e dei servizi umani, Wikimedia Commons

Cos'è l'agar al cioccolato?

Lui Agar cioccolato È un mezzo di cultura solida, arricchita, non selettiva e non differenziale. È usato principalmente per l'isolamento di microrganismi impegnativi dal punto di vista nutrizionale, sebbene qualsiasi tipo di batteri possa crescere in esso.

Ecco perché la sua utilità aumenta soprattutto nei campioni di campionamento che sono normalmente sterili, come il CSF e il liquido articolare. Sebbene sia anche incluso nei media scelti per la semina di campioni polimicrobici, ma in questi casi è necessario aggiungere antibiotici che inibiscono la flora concomitante.

Questo mezzo ha un caratteristico colore marrone molto simile al cioccolato, quindi il suo nome. La preparazione è molto simile a quella dell'agar del sangue, solo in questo caso il sangue deve essere riscaldato in modo che i globuli rossi si rompano.

La sua preparazione, come l'agar di sangue, è molto delicata, perché è facilmente contaminabile. Pertanto, molti laboratori preferiscono acquisire questo mezzo già preparato da case commerciali che garantiscono la loro qualità.

Base

È composto da una base di agar ricca di nutrienti e sangue riscaldato. L'emolisi dei globuli rossi fornisce il fattore medio X (emina) e il fattore V (NAD), necessari per la crescita di alcuni microrganismi, come il genere Emofilo. È anche molto utile isolare Neisserias sp.

Come l'agar di sangue, diversi media possono essere utilizzati come agenzia di base, a seconda della necessità. Tra i media utilizzati ci sono l'infusione Cerebro Heart e Crush Soybeans, sebbene i più raccomandati siano la Columbia Agar, Müeller Hinton, GC Agar e Thayer Martin Agar.

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Alcune varianti di agar al cioccolato includono un integratore arricchito, disponibile in commercio, chiamato isovalex o polivitex.

Questi integratori contengono vitamina B₁₂, L-glutamina, adenina, guanina cloridrato, acido p-aminobenzoico, nicotinamide adenina dinucleotide (NAD), tiamina pirofosfato, nitrato ferrico, tiamina idrocloruro, cisteina idrocloruro, l-cistina e glucosio.

È importante evidenziare che l'agar al cioccolato è più arricchito dell'agar nel sangue, ma non consente i modelli di emolisi.

Applicazioni

• Agar al cioccolato con agar Columbia: Contiene caseina e cuore del pancreas, carne digerita peptica, cloruro di sodio, agar, estratto di lievito e amido di mais. Inoltre, è ricco di vitamine, minerali e aminoacidi essenziali. Questa base con sangue riscaldato è l'ideale per isolare i batteri del genere Neisseria. D'altra parte, se viene aggiunto un integratore a Brucella, Il microrganismo di cui sopra può essere isolato. I risultati sono migliorati usando il sangue del cavallo.
• Agar al cioccolato con agar base GC (per gonococchi): Contiene peptone, amido di mais, tamponi monobasici e dibasici, cloruro di sodio e agar. La maggior parte delle presentazioni di produzione di cioccolato preparate commercialmente sono dotate di questa base e non contiene sangue riscaldato, ma una miscela sintetica di emina e un integratore chimico di fattori di crescita, vitamine, minerali, aminoacidi, fattore V e glucosio.
• Agar al cioccolato preparato con Müeller Hinton Agar: Viene utilizzato per eseguire il test di suscettibilità antimicrobica di microrganismi esigenti, come Streptococcus pneumoniae, Usando il 5% del sangue riscaldato RAM. Serve anche per l'isolamento primario di Neisseries E Emofilo, ma nel caso particolare dell'isolamento di Emofilo È preferito l'uso del sangue di cavallo, per essere ricco di fattore X e V. D'altra parte, se il campione da piantare proviene da un'area non sterica, si raccomanda l'aggiunta di antibiotici per inibire la normale flora dell'area. Esempio: per campioni respiratori in cui si sospetta la presenza di batteri di genere Emofilo La bacitracina viene utilizzata per inibire la crescita di Staphylococcus, micrococcus, streptococcus E Neisseries Saprofiti. 
• Agar al cioccolato con Thayer Martin Agar: È speciale da isolare Neisseria gonorrhoeae. Deve contenere antibiotici per inibire la flora di accompagnamento. Viene usato il sangue di agnello.

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Preparazione

Le indicazioni per la preparazione dell'agar di base che verranno utilizzate. Generalmente, descrivono quanto dovresti pesare per preparare un litro di coltura. In laboratorio è possibile preparare l'importo esatto necessario, che può essere più o meno di un litro.

Calcoli

Viene fatta una regola di tre per calcolare quanto è necessario pesare per preparare il volume desiderato. Esempio:

Se per 1 litro è necessario pesare 40 gr e il laboratorio richiede 800 ml, si dice:

1000 ml -40 gr

800 ml - x

La formula sarà la seguente:

X = 32 gr (quantità nonostante 800 ml).

Pesare e dissolversi

La quantità necessaria viene pesata e posizionata in un Felola con l'acqua.

Riscalda a fuoco moderato e viene miscelato delicatamente con movimenti rotanti fino a quando il mezzo disidratato si dissolve completamente, lasciandolo bollire per 1 minuto.

Sterilizzare

Il fissola viene introdotto nell'autoclave per sterilizzare il mezzo a 121 ° C per 20 minuti.

Aggregato di sangue

Quando si lascia l'autoclave, è consentito stare fino a quando la temperatura del mezzo è approssimativamente tra 56 e 70 ° C per posizionare il sangue e mescolare fino a quando il mezzo diventa colore marrone.

Se verranno aggiunti gli integratori, questo è il momento di farlo. Successivamente, mescolare e servire 20 ml per ciascuna piastra di Petri sterile.

L'intera procedura deve essere eseguita in una campana di flusso laminare o attorno all'accendino Bunsen. Lasciare riposare fino a quando non si solidificano e salvano in modo invertito in un frigorifero.

Un altro modo per preparare l'agar al cioccolato senza usare il sangue

Il mezzo di base viene preparato come descritto sopra, l'emoglobina disidratata ottenuta commercialmente e sterilizzata nell'autoclave viene sciolta nell'autoclave.

Può servirti: emoolinfa

Entrambe le soluzioni possono raffreddare a 50 ° C, il supplemento viene unito e aggiunto. Mescolare in condizioni asettiche e quindi servire in piastre sterili di Petri.

QA

È importante che il sangue sia posizionato alla temperatura indicata, poiché è l'ideale per Lisar i globuli rossi e allo stesso tempo mantenere il fattore V, il che è terminato.

Non dovrebbero essere bolle sulla superficie dell'agar. Di ogni lotto di 100 piastre, una o due piastre devono essere incubate nella stufa a 37 ° C per 24 ore per verificare la sua sterilità.

Per risultati migliori, l'agar al cioccolato deve essere utilizzato poco dopo la sua preparazione.

I controlli dei ceppi batterici dovrebbero essere presi in laboratorio per valutare l'efficacia dell'ambiente appena preparato per la crescita dei principali microrganismi impegnativi di importanza clinica.

Riferimenti

1. Garcia, p., Pareti, f., Fernández del Barrio, M. Microbiologia clinica pratica. Cadiz University. Servizio pubblicazioni UCA.
2. Agar cioccolato. Recuperato da.Wikipedia.org.