Preparazione dei media culturali

La preparazione dei terreni culturali è una metodologia per coltivare microrganismi, al fine di studiarli

Qual è la preparazione dei media culturali?

IL Preparazione dei media culturali È una metodologia di routine utilizzata nei laboratori per la crescita dei microrganismi desiderati. I terreni di coltura sono preparati solidi, liquidi o semi-solidi che hanno tutti i nutrienti necessari per lo sviluppo di una popolazione microbica.

In generale, i mezzi per coltivare i microrganismi sono ricchi di proteine ​​e aminoacidi e di solito contengono qualche componente che favorisce la crescita dell'organismo che si desidera studiare, come vitamine, sangue, siero, tra gli altri.

Non esiste una cultura generale o universale, poiché la sua composizione varia a seconda delle esigenze del microrganismo di interesse. Alcuni batteri possono essere sviluppati in qualsiasi mezzo di coltura, ma altri hanno requisiti speciali.

In cosa consiste?

I microrganismi, come funghi e batteri, non possono essere studiati singolarmente a causa della loro dimensione microscopica. Pertanto, devono essere coltivati ​​nei media artificiali che consentono il significativo aumento della popolazione.

Ad esempio, se vogliamo studiare batteri dobbiamo fornire loro le condizioni appropriate in modo che possano proliferare e formare una colonia (che può essere osservata ad occhio nudo).

La preparazione di terreni di coltura varia ampiamente a seconda del tipo di microrganismo che si desidera coltivare. Prima di prepararlo, è necessario conoscere i bisogni nutrizionali di base dell'organismo di lavoro.

I componenti più comuni utilizzati nei media coltivati ​​saranno descritti di seguito per avere un'idea generale della sua preparazione:

Agar

Viene utilizzato nelle colture come agente di gelificazione e aggiunge quando si cerca un mezzo solido o semi -solido. Il primo agente consolidante utilizzato nella preparazione dei media era la gelatina, ma nel 1883 l'agar fu introdotto nel mondo della batteriologia da W. Hesse.

L'agar di tipo batteriologico ha come componente principale un polisaccaride di ramificazioni complesse, estratto da alghe. Questo composto viene usato come addensante di cibo comune, come gelato e marmellate.

È un elemento molto prezioso in microbiologia per diversi motivi. Principalmente, poiché i microrganismi non possono degradarlo, liquefie a una temperatura di 100 ° C e rimane in uno stato liquido fino a raggiungere 45 ° C o meno.

Nel caso in cui si desideri preparare un mezzo solido, la concentrazione di agar deve essere di circa l'1,5%, mentre i semi -solidi devono essere preparati dallo 0,3 allo 0,5%.

Fluidi

La coltivazione di organismi patogeni ha bisogno di fluidi corporei in modo che possano svilupparsi come farebbero nel loro ambiente naturale.

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Per questo motivo, viene aggiunto sangue completo o defibrato. Il fluido viene estratto da un animale sano e, una volta sterilizzato, viene aggiunto nel terreno di coltura.

Estratti

Sono ottenuti da diverse parti animali (come carne o fegato) o verdure (semi) e vengono elaborati per ottenere un concentrato solido sotto forma di pasta o polvere.

I più comuni sono gli estratti di lievito, malto e carne.

Peptonas

Questi composti organici sono ottenuti mediante enzimatica o chimica dei tessuti animali o vegetali. Lo scopo è quello di aggiungere un contenuto ricco negli aminoacidi, che sono le unità fondamentali delle proteine.

Ammortizzatori

I "tamponi", o sistemi di assorbimento d'urto, evitano improvvisi cambiamenti di pH e aiutano a mantenere l'intervallo ottimale che l'organismo tollera.

La maggior parte degli organismi può sviluppare correttamente un pH di 7, sebbene alcuni batteri preferiscano media alcalini. Tuttavia, ci sono batteri che resistono alle variazioni del pH tra i valori di 6 e 9.

Nelle specie sensibili al pH, il danno non è prodotto dall'eccessiva quantità di idrogeno o idrossile, ma dall'aumento di acidi o basi deboli che possono penetrare nella cellula.

Allo stesso modo, gli indicatori di pH vengono aggiunti per essere in grado di monitorarlo ed evitare deviazioni causate da fermentazioni o altri processi.

Obiettivi

L'obiettivo principale quando si prepara un terreno di coltura è aggiungere tutti i componenti necessari per consentire il successo dello sviluppo dell'organismo che desidera essere isolato. Deve essere identificata la combinazione di componenti e nutrienti più efficaci per ottenere i mezzi desiderati.

Sia la preparazione che lo stoccaggio medio sono fondamentali per garantire una crescita di successo, poiché questi passaggi dipendono dalla composizione dell'ambiente e dalla disponibilità di nutrienti.

Va conto che la coltivazione di microrganismi è un compito influenzato da diversi fattori esterni all'ambiente di coltura, come l'intensità della luce ricevuta, la temperatura e il livello di acidità o alcalinità del mezzo.

Pertanto, ciascuna di queste variabili deve essere presa in considerazione e monitorata rigorosamente.

Tipi di media

Basato sulla sua composizione

Sulla base della sua composizione ci sono tre principali tipi di colture: mezzi naturali o empirici, semi-sintetici e sintetici o chimici.

Ambiente naturale

Nei media naturali la composizione esatta è sconosciuta. Questi includono ingredienti come latte, sangue diluito, succhi di piante, estratti e infusioni di carni e peptone.

Per motivi economici, di solito vengono aggiunti componenti a basso contenuto di corpulenti, come estratto di soia, siero, melassa, ecc.

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Media semi-sintetici

È chiamato semi-sintetico se la composizione della stessa è parzialmente nota. Qualsiasi mezzo contenente agar è un mezzo semi-sintetico.

Tra questi abbiamo patate di destrosio, agar Czapek-Dox, farina d'avena, impugnatura peptone di carne, tra gli altri esempi.

Mezzo sintetico o definito chimico

In questo caso, la composizione del mezzo - come per la quantità di carbonio, azoto, zolfo, fosforo e qualsiasi altro fattore di crescita, è totalmente nota - è totalmente nota.

È molto utile se si desidera ottenere risultati riproducibili per altri ricercatori.

Per i "microrganismi così chiamati con requisiti di crescita speciali" è necessario aggiungere i componenti necessari. Un esempio di questo tipo sono Lactobacillus.

Basato sul tipo di microrganismo

Allo stesso modo, esiste un'altra classificazione per i media di cultura basati sul tipo di microrganismo che può crescere in esso.

Seguendo questo principio abbiamo quanto segue: mezzi generali, arricchimento, selettivo e differenziali. Ognuno è descritto di seguito:

Mezzi generali

Questi ammettono lo sviluppo di un'ampia varietà di microrganismi. Se un organismo ha bisogno di condizioni speciali per la sua crescita, non sarà in grado di svilupparsi con successo in questo tipo di coltura.

Media di arricchimento

L'arricchimento significa favorire la crescita di un certo tipo di microrganismo, ma non è stata aggiunta alcuna sostanza per impedire ad altri tipi di microbi di crescere in esso.

Mezzi selettivi

Cercano la crescita specifica di un microrganismo, chiamano funghi, batteri, protozoi, tra gli altri. Per fare ciò, inibiscono lo sviluppo degli altri.

Per raggiungere questo obiettivo, i composti chimici mortali possono essere aggiunti per un ampio gruppo di microrganismi e innocui per il corpus di interesse o aggiungendo fonti energetiche che sono assimilabili solo dal microbo richiesto.

I media selettivi vengono utilizzati quando vengono prelevati campioni medici per coltivare alcuni microrganismi patogeni. Qui è necessario favorire la crescita del patogeno e inibire lo sviluppo della normale flora microbica dal paziente.

L'agar di solfito bismuto, ad esempio, non consente la crescita dei batteri positivi al Gram e un gran numero di batteri presenti nella cavità gastrointestinale.

Pertanto, è usato per coltivare i batteri gram -negativi che causa la febbre tifoide, Salmonella typhi, In campioni fecali.

Mezzi differenziali

Questo tipo utilizza alcune caratteristiche diagnostiche dell'organismo di interesse (peculiarità nel suo metabolismo, per esempio) per poterle identificare contro un'altra specie che cresce nello stesso mezzo.

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Sia i media differenziali che i mezzi selettivi sono molto utili nell'area della microbiologia clinica e della salute pubblica, poiché queste discipline devono rilevare la presenza di microrganismi specifici relativi a patologie o cattive condizioni di igiene.

È possibile aggiungere sostanze indicatori nel raccolto che concedono una caratteristica distintiva alla colonia ricercata. Ad esempio, al medio-eosina-rul-rul di metilene (emg abbreviata) e l'agar-macconkey sono aggiunti lattosio e un indicatore di pH.

Pertanto, quando una colonia si sviluppa in questi media con la capacità di fermentare il lattosio e produrre aldeidi, possono essere osservate in un colore speciale.

Passi per la preparazione dei media culturali

Attualmente la coltivazione può essere acquistata in modo liofilizzato. Pertanto, la preparazione è facilitata e rimane solo il prodotto.

Il contenuto deve essere pesante (tenendo conto dell'importo finale che si desidera preparare) e sciolto in acqua distillata seguendo tutte le indicazioni del prodotto.

Il contenuto del supporto liquido deve essere diviso nei contenitori desiderati (piastre di Petri, tubi, ecc.) Per la successiva sterilizzazione.

Per distribuire il mezzo solido è necessario scioglierlo usando un forno a microonde o inviare il materiale a un bagno d'acqua. Il pH medio deve essere regolato.

Di solito l'agar viene utilizzato nei tubi di prova o nelle piastre di Petri. Se l'agar si solidifica in una posizione inclinata, con l'angolo appropriato affinché il bordo terminale finale sia diagonale, è noto come tubi Pico flauto o inclinati.

Quando l'agar si solidifica in una posizione totalmente verticale, viene dato il nome di "profondo".

Dopo aver sterilizzato i media - usando un'autoclave, li hanno lasciati raffreddare. Questi devono essere manipolati in un ambiente privo di microrganismi, il più comune è lavorare con un'accensione più leggera che garantisce un ambiente asettico nelle sue vicinanze.

Riferimenti

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