Brodo di selenito quello che è, fondazione, preparazione, usi

Lui Brodo di Selenito È un mezzo di coltura liquida selettiva. È stato progettato da Leifson per l'arricchimento di campioni in cui è sospetta la presenza di batteri enteopatogeni del genere Salmonella.

Questi media soddisfano le esigenze dell'American Public Health Association (APHA), e quindi è accettato per l'indagine sulla presenza di Salmonella in campioni di feci, urina, cibi liquidi o solidi, acqua, tra gli altri.

Brodo di Selenito. Fonte: foto scattata dall'autore MSC. Marielsa Gil

La composizione chimica che favorisce il recupero di questi microrganismi e a sua volta inibisce la crescita degli altri. È principalmente tossico per la maggior parte dei batteri appartenenti alla famiglia Enterobacteriae. Tuttavia, consente anche il recupero dei ceppi di Shigella e non inibisce la crescita di Pseudomonas e Proteus.

È composto da idrogeno sodio anidro selen, fosfato di sodio anidro, peptonas e lattosio. C'è anche una variante a cui viene aggiunta la cistina, da cui il suo nome selenito-cistina brodo.

Al momento è preferito l'uso del brodo di selenito-cistina, poiché si ottiene una percentuale più elevata di recupero di salmonella equivalente a quella osservata con altri mezzi selettivi con lo stesso scopo, come il brodo tetrazionale di sodio.

Base

I peptones contenuti nel brodo fungono da nutrienti per il buon sviluppo di microrganismi. I ceppi di salmonella usano i peptones come fonte di azoto, vitamine e aminoacidi.

Il lattosio è carboidrato fermentabile, mentre la selenite di sodio è la sostanza inibitore che rallenta la crescita dei batteri gram positivi e la maggior parte dei batteri presenti nella flora intestinale, in particolare la famiglia enterobattee. Il fosfato di sodio è l'assorbitore di shock che stabilizza il pH medio.

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Nel caso della variante del brodo Selenito che contiene L-cistina, questo composto aggiuntivo è un agente riducente che riduce al minimo la tossicità della selenite, aumentando il recupero di Salmonella.

Preparazione

-Brodo di Selenito

Se hai i componenti della miscela, puoi pesare:

4 gr di idrogeno di sodio anidro.

10 gr di fosfato di sodio anidro.

5 gr di peptones.

4 gr di lattosio.

Dissolvere i composti in 1 litro di acqua distillata sterile. Può essere leggermente riscaldato per dissolversi nella sua interezza.

Alcuni laboratori espongono il mezzo per 10 minuti nel vapore fluente per sterilizzarlo, poiché l'autoclave non dovrebbe essere utilizzato. Se il mezzo è sterilizzato, può essere immagazzinato in frigorifero fino al suo utilizzo.

Può anche essere preparato senza sterilizzare e servire da 10 a 15 ml a provette sterili.

In questo caso dovresti lasciarti stare e utilizzare immediatamente. Poiché il mezzo non è sterile, non può essere conservato in frigorifero per un uso successivo.

-Preparazione dei media commerciali

Se il mezzo commerciale è disponibile, 23 gr del mezzo disidratato e disciolto in un litro di acqua distillata sterile. Sumonta brevemente per finire la dissoluzione. Non sterilizzare in autoclave. Servire asetticamente 10 o 15 ml in provette sterili.

Il pH finale del mezzo deve essere 7,0 ± 0,2.

Va notato che il colore del mezzo disidratato è beige e la preparazione è chiara e traslucida ambra.

Variante brodo di selenito-cistina

Contiene gli stessi composti di brodo di selenite, ma vengono aggiunti 10 mg di cistina. Il resto della procedura è esattamente lo stesso descritto sopra.

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Applicazioni

Questo mezzo è speciale da utilizzare negli studi epidemiologici, nei casi in cui la malattia non è nel suo stadio acuto, pazienti asintomatici o portatori sani.

L'isolamento della salmonella di genere è generalmente difficile, poiché normalmente stanno contaminando i campioni in breve tempo. Essere in un pazzo.

D'altra parte, la materia prima con cui vengono spesso preparati gli alimenti trasformati sono esposti al calore, ai processi di disidratazione, all'uso di disinfettanti, radiazioni e conservanti, tra gli altri.

Pertanto, le salmonella presenti nella materia prima sono maltrattate dalla presentazione del prodotto ai suddetti processi industriali. Allo stesso modo, nel caso di campioni clinici come le feci, i ceppi possono essere deboli se provengono da pazienti che sono stati trattati con antibiotici.

Pertanto, si sospetta che qualsiasi campione della presenza di Salmonella deve essere pre -arricchimento nel brodo di Lactosado e successivamente arricchito nel brodo di Selenito per ottimizzare il suo recupero nei media selettivi, come SS Agar, Xilosa Agar, De -taxicola Lisina (XLD) , Hoktoen Enterica (He) e Green Apar -Brillante, tra gli altri.

Seminato

Per i campioni di feci prelevare 1 gr di campione e sospendere in un tubo con 10-15 ml di brodo Selenito. Se le feci sono liquide, prendi 1 ml e sospendi nel brodo. Per tamponi rettali, scarica il materiale di tampone nel brodo.

In campioni di alimenti solidi prendono 1 gr e sospendi nel brodo di selenito.

Negli alimenti liquidi si mescolano in parti uguali con brodo di selenite a doppia concentrazione.

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Per i campioni di urina devi centrifugare, scartare il surnatante, prendere tutti i sedimenti e sospenderlo nel brodo di Selenito.

I brodi a 37 ° C sono incubati per 24 ore di incubazione. La crescita batterica è evidenziata dalla torbidità. Un tubo aggiuntivo per campione può anche essere incluso per incubare 42 ° C. Successivamente, seminare supporti solidi selettivi dal brodo Selenito.

QA

Per il controllo della sterilità, 37 ° C è incubato per 24 ore un brodo Selenito di ogni lotto senza inocularsi. Si prevede che non ci sia torbidità, nessun cambiamento di colore medio.

Per controllare il corretto funzionamento del mezzo, è possibile utilizzare ceppi noti, come:

Salmonella entetidis ATCC 13076, Salmonella typhimurium ATCC 14028,  Salmonella coleraesuis ATCC 12011, Escherichia coli ATCC 25922 e Proteus mirabilis ATCC 43071.

I risultati previsti sono:

• Per i primi tre ceppi batterici la crescita deve essere soddisfacente.
• Per Escherichia coli Inibizione parziale.
• Per una crescita moderata di Proteus.

Limitazioni

Il brodo a mezzo selenito è tossico per la pelle umana, quindi dovrebbe essere evitato il contatto diretto.

Riferimenti

1. Britania Laboratories. Brodo di Selenito. Disponibile su: Britaniab.com
2. Neogen Laboratories. Brodo di Selenito. Disponibile su: sicurezza alimentare.Neogen.com