Breatment, preparazione e usi EC

Lui Brodo EC o brodo Escherichia coli È un mezzo di coltura liquida selettiva. Questo mezzo è raccomandato dai metodi standard per il conteggio delle coliformi totali e fecali, dalla tecnica numerica più probabile (NMP) nei campioni di acqua e cibo, dove l'agente principale è il Escherichia coli.

Il brodo CE è costituito da tripteina, lattosio, sali biliare, fosfato pipotasico, fosfato monopotasico, cloruro di sodio e acqua. La sua formula è strategicamente progettata per favorire la crescita di coliformi totali e fecali e prevenire lo sviluppo di altri microrganismi di accompagnamento.

Rappresentazione figurativa della preparazione del brodo CE. Fonte: Pixabay.com

I batteri Escherichia coli È il principale coliforme fecale presente come inquinante nelle fonti idriche e alimentari, essendo la causa di importanti effetti gastrointestinali.

Va notato che ci sono molti sierotipi di Escherchia coli; Tra questi, Enterohemorrágica (EHEC), Enteroinvasive (EIEC), Enteopatogenico (EPEC), Enterotossigenico (ETEC) ed Enteroagregativo (EAEC) possono essere menzionati.

Questo mezzo ha la capacità di consentire lo sviluppo di tutti loro, ma incapace di differenziarli l'uno dall'altro. Per questo, devono essere eseguiti ulteriori test.

Lo studio microbiologico di acqua e cibo per il numero più probabile (NMP) per la ricerca di coliformi totali e fecali è un protocollo composto da diverse fasi; Fase presuntiva, fase di conferma e fase di completamento. Il brodo CE viene utilizzato nella fase di conferma.

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Base

Brodo EC

Il mezzo CE si basa sulla fornitura degli elementi nutrizionali necessari per lo sviluppo ottimale di coliformi totali e fecali, in cui i batteri sono inclusi Escherichia coli.

Questi elementi nutrizionali sono forniti da Triptein, essendo un'ottima fonte di peptidi e aminoacidi. Inoltre, contiene anche lattosio, un carboidrato fermentabile che fornisce energia e consente di mostrare se il batterio produce gas.

D'altra parte, il mezzo contiene sali biliari che forniscono la natura selettiva, poiché inibisce la crescita di microrganismi Gram positivi che possono essere presenti nel campione.

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Allo stesso modo, dipotasia fosfat. Questo sistema è necessario, poiché il lattosio contenuto nel brodo tende ad acidificare il mezzo quando è fermentato dai microrganismi, ma questo è compensato dai sali di fosfato.

Pertanto, questi elementi sono essenziali, perché l'acidità senza controllo può influire sul buon sviluppo dei microrganismi ricercati.

Da parte sua, il cloruro di sodio stabilizza l'ambiente, mentre l'acqua è il solvente dei soluti presenti e fornisce coerenza liquida all'ambiente.

Brodo CE modificato con novobiocin

Okrend e Rose hanno creato una varietà di brodo CE, chiamato brodo CE modificato EC. La modifica consisteva nella diminuzione della concentrazione di sali biliari e dell'aggregato di 20 mg/dl di novobiocina.

Questa modifica favorisce il recupero dei ceppi di Escherichia coli Enterohemorágica (O157: H7).

Questo sierotipo batterico provoca grave colite emorragica che può causare sindrome emolitica uremica (SUH); che a sua volta può generare insufficienza renale acuta, con un alto tasso di mortalità che può raggiungere fino al 50% negli anziani.

A causa dei morbosamente causati da questi batteri per il consumo di alimenti contaminati, il Dipartimento dell'Agricoltura degli Stati Uniti (USDA) raccomanda vivamente l'uso di questo mezzo.

Preparazione

Brodo EC

Pesare 37,4 gr del mezzo disidratato e dissolversi in 1 litro di acqua distillata. La miscela deve essere consentita per 5 minuti. Successivamente, in una fonte di calore, finisce per dissolvere frequentemente.

Una volta sciolto, è distribuito in provette precedentemente condizionate con un tubo Durham all'interno. Sterilizzare in autoclave a 121 ° C per 15 minuti.

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Il pH medio deve essere 6,9 ​​± 0,2.  Il colore del mezzo disidratato è beige e preparato è chiaro ambra.

I brodi sono conservati in frigorifero fino all'uso. Al momento dell'uso, i brodi devono essere a temperatura ambiente.

D'altra parte, il brodo CE può anche essere preparato in doppia concentrazione.

Brodo CE modificato con novobiocin

Pesare 36,7 gr del mezzo disidratato e dissolversi in 1 litro di acqua. Il resto della preparazione è uguale a quello sopra descritto.

Utilizzo

Analisi coliforme totale e fecale

Il brodo EC è ideale per la fase di conferma dello studio coliforme con il metodo NMP, sia nei campioni di acqua, come nei prodotti farmaceutici e alimentari.

I brodi di produzione più stretti e di gas ottenuti nella fase presuntiva devono essere ripristinati in brodi verdi brillanti al 2% e nel brodo CE.

Per i coliformi totali di brodo EC sono incubati in aerobiosi per 24-48 ore a 37 ° C e per i coliformi fecali sono incubati in aerobiosi per 24 a 48 ore a 44 ° C.

In entrambi i casi viene interpretato come segue: i tubi torbidi con produzione di gas sono considerati positivi. Se in 24 ore non vi è alcuna produzione di gas continua l'incubazione fino a 48 ore.

I brodi EC positivi vanno alla fase di conferma completa, che consiste nel gratificante in media selettivi come Mac Conkey, EMB o Endo Endo Agar.

Se il brodo utilizzato viene modificato con novobiocina, si consiglia ai tubi positivi per assomigliare all'agar di conkey Mac con sorbitolo.

QA

Il controllo di qualità deve essere eseguito da ogni lotto medio preparato. In primo luogo, la sterilità dell'ambiente deve. In questo senso, uno o due brodi senza inocularsi in aerobiosi per 24 ore a 37 ° C sono incubati. Il risultato atteso è un brodo trasparente, senza torbidità o cambiamento di colore.

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In secondo luogo, la crescita dei ceppi noti deve essere valutata, per questo è possibile utilizzare i seguenti batteri: Escherichia coli, ATCC 8739, Escherichia coli ATCC 25922, Salmonella typhimurium ATCC 14028.

In tutti i casi, è previsto uno sviluppo microbico soddisfacente, osservando un brodo nuvoloso con produzione di gas per E. coli e senza gas per la salmonella.

Altri ceppi che possono essere inclusi nel controllo sono: Staphylococcus aureus ATCC 25923, Enterococcus faecalis ATCC 29212. Questi ceppi devono essere totalmente inibiti.

Raccomandazioni

-Il posizionamento dei tubi Durham è indispensabile per lo studio dei coliformi.

-Distribuire il mezzo nei tubi di prova prima della sterilizzazione, mai dopo.

-Non utilizzare se il mezzo ha più di 3 mesi preparato.

-Non utilizzare se si osserva un cambiamento delle solite caratteristiche del mezzo.

Riferimenti

1. Britania Laboratories. Middle EC. 2015. Disponibile su: Britaniab.com
2. E. coli Enteroemorragico. Il Center for Food Security and Public Health. 2010. Disponibile su: CFSPH.iastate.Edu
3. Corporation Neogen. Medio EC. Disponibile su: sicurezza alimentare.Neogen.com
4. Neogen. EC medificato modificato con novobiocina. Disponibile su: sicurezza alimentare.Neogen.com
5. Jure M, Condorí S, Leotta G, Chinen I, Miliwebsky E, allori C, Aulet O, di Castillo M. Rilevazione, isolamento e caratterizzazione di Escherichia coli Produttore di tossine shiga da carne fresca macellata di macellai di Concepción, provincia di Tucumán. Rev Arg di Microbiol; 2010, 42 (4): 284-287.  Disponibile su: www.Scielo.org.