Vogel-Johnson Agar cos'è, fondazione, preparazione, usi

Lui Vogel-Johnson Agar È una cultura solida, selettiva e differenziale, appositamente formulati per l'isolamento di Staphylococcus aureus. Questo mezzo è stato creato da Vogel e Johnson nel 1960 dalla modifica dell'agar Telurito glycina formulato nel 1955 da Zebovitz, Evans e Niven.

La modifica consisteva nell'aumentare la concentrazione di manitol presente nell'ambiente e nell'incorporazione di un indicatore di pH. La formula attuale è composta da tripteína, estratto di lievito, mannitolo, fosfato di dipotassio, cloruro di litio, glicina, rosso fenolo, agar, 1% di telurite di potassio.

Va notato che ci sono altri media che, come l'agar Vogel-Johnson, sono selettivi per l'isolamento di S. aureola, come Salty Mannitolo Agar e Baird Parker Agar. In questo senso, si potrebbe dire che la fondazione del Vogel - Johnson concorda è una miscela tra l'agar salato di mannitolo e l'agar Baird Parker.

Nel primo le colonie di S. aureola Si distinguono per fermentolo. D'altra parte, nel secondo S. aureola È caratterizzato dalla riduzione di Teluro a Teluro e dalla formazione di colonie grigie in nero. Entrambe le proprietà sono osservate nell'agar Vogel-Johnson.

Questo mezzo, come le sue controparti, è utile per il rilevamento di Staphylococcus aureus Nei campioni di alimenti, i controlli sanitari dei prodotti industriali e in campioni clinici.

Base

Contributo nutrizionale

The Vogel - Johnson Medium contiene triptein e estratto di lievito; Entrambe le sostanze forniscono aminoacidi a catena lunga che fungono da fonti di carbonio e azoto necessarie per la crescita batterica. I batteri in grado di crescere in questo mezzo prendono i nutrienti di queste sostanze.

Potenza selettiva

Il vogel - Johnson Agar è in grado di inibire la crescita dei batteri gram negativi e persino alcuni grammi positivi, favorendo lo sviluppo di stafilococchi positivi di coagulasi. Le sostanze inibitori sono tellurite di potassio, cloruro di litio e glicina.

Potere differenziale

Le sostanze che rendono questo mezzo differenziale sono mannitolo e tellurite di potassio. Il manitol è un carboidrato e quando vengono prodotti acidi fermentati che rendono il mezzo dal rosso al giallo, il che accade grazie alla presenza dell'indicatore di pH rosso.

Mentre, la telurite incolore quando viene ridotta a teluro senza metallico, prende un colore grigio scuro.

Lui Staphylococcus aureus fermenta il mannitolo e riduce il teluro a teluro. Ecco perché le colonie tipiche di S. aureola In questo mezzo sono grigi o neri circondati da un mezzo giallo.

I batteri che crescono in questo mezzo e non riducono la telurite o fermentano il mannitolo, formeranno colonie trasparenti circondate da un mezzo rosso, ancora più intensi del colore originale, a causa dell'alcalinizzazione del mezzo mediante l'uso di peptones.

D'altra parte, i batteri che riducono la telurite ma non fermentano la manitole crescerà mentre colonie grigie o nere circondate da un intenso mezzo rosso.

Se il mezzo si preparava senza l'aggiunta della tellurite di potassio, le colonie di S. aureola Si svilupperebbero come colonie gialle, circondate da un mezzo giallo, come accade nell'agar salato di mannitolo.

Equilibrio osmotico e agente di solidificatore

Il fosfato di dipotassio mantiene l'equilibrio osmotico del mezzo e regola il pH alla neutralità 7.2. Mentre l'agar dà solida coerenza al terreno di coltura.

Preparazione

Soluzione di telurite di potassio 1% P/V

Questa soluzione non è inclusa nell'ambiente disidratato, perché non può essere sterilizzata in autoclave. Per questo motivo è preparato a parte e aggiunto al mezzo già sterilizzato.

Alcune case commerciali vendono la soluzione di telurite di potassio all'1% pronta per l'uso. Se vuoi prepararti in laboratorio, procedi come segue:

Pesare 1.0 gr di tellurite di potassio e misura 100 ml di acqua distillata. Sciogliere la terite di potassio in una parte dell'acqua e quindi completare la quantità di acqua fino a raggiungere 100 ml. Sterilizzare la soluzione con il metodo di filtrazione.

Base agar Vogel-Johnson

Pesare 60 gr del mezzo disidratato e dissolversi in 1 litro di acqua distillata. La miscela viene riscaldata ad ebollizione per aiutare la soluzione completa. Durante il processo di dissoluzione il mezzo viene agitato frequentemente.

Sterilizzare in autoclave 15 libbre di pressione e 121 ° C per 15 minuti. Togliere dall'autoclave e lasciar riposare fino a quando il mezzo raggiunge una temperatura approssimativa da 45 a 50 ° C. Aggiungi 20 ml della soluzione di telurite di potassio precedentemente preparata all'1%.

Mescolare e versare su piastre sterili di Petri. Lascia che solidificare e ordinare in una piastra invertita.

Il pH finale del mezzo preparato deve essere a 7,2 ± 0,2.

Prima di seminare un campione, è necessario attendere che la piastra prenda la temperatura dell'ambiente.

Il colore del mezzo preparato è rosso.

Utilizzo

Sebbene possa essere usato per l'isolamento di S. aureola In qualsiasi tipo di campioni, viene utilizzato principalmente per l'analisi microbiologica di prodotti farmaceutici, cosmetici e cibo.

Si consiglia di essere denso l'inoculo. La semina può essere eseguita stringendo con la maniglia del platino o in superficie con drigalski spatola.

Le piastre sono incubate a 35-37 ° C per 24-48 ore in aerobiosi.

QA

Per eseguire il controllo di qualità per l'ambiente Vogel-Johnson è possibile utilizzare i seguenti controlli dei ceppi:

Staphylococcus aureus ATCC 25923, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Staphylococcus epidermidis ATCC 12228, Escherichia coli ATCC 25922 O Proteus mirabilis ATCC 43071.

Il risultato atteso è il seguente: per i ceppi di S. aureola Crescita soddisfacente con colonie nere circondata da mezzo giallo. Per S. epidermidis Crescita regolare con colonie traslucide o nere circondate da mezzo rosso.

Anche a E. coli Si prevede che ci sarà l'inibizione totale e per Proteus mirabilis inibizione parziale o totale; Se cresce lo farà a malapena e le colonie saranno nere circondate da mezzo colore rosso.

Riferimenti

1. Laboratori BD. VJ (Vogel e Johnson Agar). Disponibile su: BD.com
2. Britania Laboratories. Vogel-Johnson Agar. Disponibile su: Britaniab.com