TCBS Agar What Is, Foundation, Preparazione, Uso

Lui TCBS Agar È una cultura solida altamente selettiva e differenziale, utilizzata per l'isolamento e la coltivazione dei batteri del genere Vibrio, in particolare Vibrio cholerae, v. Vulnifico E V. parahaemolyticus come patogeni principali di questo genere.

L'acronimo TCBS significa citrato bile bile tiosolfato. Questo agar è anche noto come mezzo selettivo per le vibre. La formula originale è stata creata da Nakanishi e successivamente modificata da Kobayashi.

È composto da estratto di lievito, peptone di carne, tripteina, citrato di sodio, tiosolfato di sodio, bile di bue, saccarosio, cloruro di sodio, citrato ferrico, blu bromool, blu timolo e agar.

Questa composizione consente uno sviluppo adeguato di specie di vibrio da campioni di acqua, cibo e feci; tranne Vibrio hollisae, Questo non cresce in questo mezzo. Inoltre, il mezzo TCBS è in grado di inibire la crescita di altri batteri di accompagnamento, in particolare i coliformi.

A causa dei gravi problemi gastrointestinali ed extra-intestinali che alcune specie del genere producono Vibrio, la loro diagnosi è molto importante. L'umano è principalmente infetto dal consumo di cibi crudi o piccoli cotti del mare o delle acque contaminate, ma anche attraverso l'infezione della ferita.

Per questo motivo, i laboratori clinici devono includere l'agar TCBS nello studio dei coperti di campioni di feci liquide, in particolare con l'apparizione dell'acqua di riso. Soprattutto se il paziente si riferisce ad essere stato in contatto con l'acqua di mare o per aver consumato crostacei o pesci.

Base

L'estratto di lieviti, i peptones di carne e il tripteína sono la fonte nutriente di questo mezzo. Tuttavia, TCBS Agar è un mezzo inospitale per la maggior parte dei batteri.

La sua elevata selettività è data dall'aggregato di citrato di sodio e bile di bue; Entrambi sono agenti inibitori che forniscono anche un pH alcalino al mezzo, limitando la crescita della flora di accompagnamento e favorire la crescita di V. Cholerae, tra le altre specie. In particolare Vibrio cholerae è molto sensibile all'acidità.

Da parte sua, il cloruro di sodio bilancia osmoticamente bilancia all'ambiente. Inoltre, poiché la sua concentrazione è elevata, funge anche da agente inibitore, favorendo la crescita dei batteri alofili.

Tarks è lo zucchero fermentabile che insieme agli indicatori di pH blu e blu blu -blu danno il carattere differenziale medio. Per questo motivo, con questo mezzo è possibile differenziare i ceppi di fermentazione dal non fermentazione.

Le colonie dei ceppi fermentari di saccarosio si sviluppano a colori e trasformano il mezzo da verde a giallo dalla produzione di acidi. Cresce traslucida non fermentazione e i resti medi del colore originale (verde).

Allo stesso modo, questo mezzo contiene tiosolfato di sodio come fonte di zolfo e citrato ferrico come agente rivelatrice. Entrambi mostrano batteri in grado di produrre idrogeno solforato (gas incolore). Il h₂S si forma dal tiosolfato e quindi reagisce con citrato ferrico si forma un precipitato nero visibile.

Infine, l'agar è quello che fornisce la solida coerenza all'ambiente.

Preparazione

Pesare 89 gr del mezzo disidratato e dissolversi in un litro di acqua distillata. Aiuta la dissoluzione per riscaldamento e agitazione frequenti. La miscela può essere bollita per un massimo di 2 minuti.

Questo mezzo non si autoclava. Dopo la sua soluzione viene servito direttamente su piastre sterili. Consolidando vengono ordinati in modo invertito in piastrine e sono immagazzinati in frigorifero (2-8 ° C) fino all'uso.

Il mezzo dopo preparato deve essere a pH 8,6 ± 0,2.

Il colore del mezzo disidratato è beige leggero o beige-verde, e il colore del mezzo è una foresta verde o verde blu.

È importante far temperatura delle piastre prima di seminare i campioni.

Utilizzo

Il campione più comune per l'isolamento vibrio è le feci diarreali.

I campioni di feci non possono essere seminati immediatamente nell'ambiente selettivo, devono essere trasportati nel mezzo di Cary Blair.

Per aumentare la sensibilità del raccolto, le feci possono essere approvate dall'acqua di Peptonada a pH 8,4 come mezzo di arricchimento per 8 ore al massimo, da lì è soggettivo al mezzo TCBS.

Dovrebbe anche essere tenuto presente che alcuni ceppi vibriosi possono causare setticemia nei pazienti immunosoppressi, quindi possono essere isolati dalle emocolture. Allo stesso modo, i campioni di cibo e cibo dal mare possono essere analizzati quando ci sono focolai epidemici della malattia del colera.

Seminato

L'inoculo del campione in studio deve essere prominente, quello seminato viene effettuato con il metodo di stress da esaurimento. Le piastre sono incubate a 37 ° C per 24 ore in aerobiosi.

Le presunte colonie di Vibrio cholerae Sono bordi medi, lisci, opachi, sottili e gialli perché fermentano il saccarosio.

Allo stesso modo coltivare le specie da V. Alginolyticus, V. fiume, V. Hareyi, v. Cincinnatiensis, v. Furnissii, v. Metschnikovii e alcuni V. Vulnifico. Altre specie clinicamente importanti come V. parahaemolyticus Non fermentano il saccarosio, sviluppandosi come colonie verdi delle olive.

D'altra parte, si deve tenere presente che alcuni ceppi di aeromoni e plesiomoni che sono ossidasi (+) possono crescere in questo mezzo, sviluppando colonie gialle che possono confondere il medico. Mentre alcuni ceppi di pseudomonas anche ossidasi (+) crescono come colonie verdi e V. parahaemolyticus.

Limitazione

Il test di ossidasi positivo per il genere Vibrio non deve mai essere eseguito dalle colonie ottenute dall'agar TCBS, poiché il risultato ottenuto sarà un falso negativo. I composti del mezzo interferiscono fortemente in questo test. Pertanto, deve essere fatto da soggetti in agar sangue.

QA

Per dimostrare che il mezzo è in buone condizioni è consigliabile.

Per questo puoi usare i ceppi di:

-Vibrio cholerae - Crescita soddisfacente (colonie gialle, bordo traslucido).

-Vibrio parahaemolyticus - Crescita soddisfacente (colonia con centro verde e bordo traslucido).

-Vibrio alginolyticus ATCC 17749 - Crescita soddisfacente (colonie gialle con aloni dello stesso colore intorno alla colonia).

-Enterococcus faecalis ATCC 29212 - inibizione totale o parziale (piccole colonie gialle o traslucide).

-Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853- Inibizione parziale o totale (colonie blu).

-Escherichia coli ATCC 25922 - Completamente inibito.

-Proteus mirabilis ATCC 43071 - Inibizione totale o parziale. (Piccole colonie bordo verde bordo traslucido).

L'incubazione di un mezzo senza inocularsi non dovrebbe avere un cambiamento.

Riferimenti

1. Laboratorio BD. Bd. TCBS Agar. Disponibile su: BD.com
2. Britania Laboratories. TCB medi. Disponibile su: Britaniab.com