Agar verde brillante, base, preparazione, usi

Lui Agar verde brillante È un terreno di coltura solida, con un alto grado di selettività. È usato esclusivamente per l'isolamento dei ceppi del genere Salmonella; Tuttavia, ci sono alcune eccezioni, come le specie Typhi e Parathyphi che non crescono in questo mezzo.

La ricerca del genere Salmonella è frequente nei campioni di feci, acqua o cibo. In questo senso, questo mezzo può essere molto utile. Questo agar fu creato nel 1925 da Kristensen, Lester e Jurgens, fu successivamente modificato da Kauffmann.

È composto da multiplayones dalla caseina peptica e digreatica del tessuto animale digerito, contiene anche estratto di lievito, cloruro di sodio, lattosio, saccarosio, rosso fenolo, verde brillante e impugnatura.

È caratterizzato dall'essere un mezzo abbastanza inospitale per la maggior parte dei batteri, favorendo la crescita della salmonella, tuttavia alcuni coliformi sono in grado di sussistere in esso, sviluppando debolmente.

È importante sottolineare che in questo mezzo il genere Shigella non cresce e nemmeno Salmonella typhimurium, nessuno dei due Salmonella paratyphi. Pertanto, se si desidera isolare questi microrganismi, dovrebbero essere usati altri media, come l'agar XLD, tra gli altri.

Base

Agar verde brillante

Ciascuno dei componenti che compongono il mezzo svolge una funzione specifica che determina le caratteristiche e le proprietà dell'agar.

I pluripeptoni e l'estratto di lievito sono la fonte di nutrienti in cui i microrganismi prendono azoto e minerali necessari per il loro sviluppo. Lattosio e saccarosio sono fonti energetiche per i microrganismi in grado di fermentarli.

Il verde brillante è la sostanza inibitore che impedisce lo sviluppo di batteri Gram positivi e un gran numero di microrganismi Gram negativi.

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Il cloruro di sodio fornisce stabilità osmotica all'ambiente. Mentre il fenolo rosso è l'indicatore di pH, lo stesso colore vira quando rileva la produzione di acidi dalla fermentazione dei carboidrati.

Le colonie non fermentari di lattosio e saccarosio crescono in questo mezzo di colore bianco bianco o trasparente, su uno sfondo rosso. Ad esempio, i batteri del genere Salmonella.

Mentre i batteri che fermentano il lattosio o il saccarosio sono in grado di crescere in questo mezzo, sviluppano colore giallo o giallo giallo, su uno sfondo giallo verdastro. Per esempio, Escherichia coli e Klebsiella pneumoniae.

Varianti di agar verde brillante (BGA)

Ci sono altre varianti dell'agar verde brillante; APAR GIRVOBIOCIN verde verde brillante (NBG) e l'avidità brillante è cresciuta il lattosio di avocina GLICEROL (NBGL).

Il glucosio di agar novobiocina verde brillante (NBG)

Contiene agricoltura di soia di soia, ammonio ferrico citro.

È usato per isolare le colonie di salmonella dai campioni di feci.

In questo caso il verde brillante e la novobiocina sono le sostanze inibitorie che impediscono la crescita dei batteri gram positivi e alcuni microrganismi gram negativi.

Il tiosolfato di sodio è la fonte di zolfo e il citrato ferrico è la fonte di ferro, entrambi necessari per rivelare la produzione di idrogeno solforato attraverso la formazione di un precipitato nero di solfuro ferrico.

Il glucosio è carboidrato fermentabile e il rosso fenolo è l'indicatore di pH.

In questo mezzo le colonie di Salmonella si sviluppano grandi con un centro nero circondato da un alone rossastro e seguita da una chiara area visibile. Alcuni ceppi di Citrobacter freundii produrre colonie identiche a quelle di Salmonella.

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Glicerolo (NBGL) di glicerolo verde avobiocina verde glicerolo brillante (NBGL)

Questo mezzo contiene agricoltura di soia di soia, citrato di ammonio ferrico, tiosolfato di sodio, lattosio, glicerolo, verde brillante, novobiocina e acqua distillata.

La differenza in questo mezzo con il precedente.

Il mezzo viene anche usato per isolare le specie di salmonella, le colonie si sviluppano nere, mediante la produzione di idrogeno solforato.

Solo le colonie che non producono acido dal glicerolo o dal lattosio ottengono un H₂S sufficiente, perché il pH sotto interferisce con la formazione di H₂S. Ciò si traduce in colonie incolore per la maggior parte delle specie Proteus e Cytrobacter.

Preparazione

-Pesare 58 grammi del mezzo disidratato ottenuto commercialmente. Aggiungilo in un litro di acqua per spinta. Mescola, lasciati riposare per qualche minuto e sottopone alla preparazione a una fonte di calore fino a quando non si dissolve completamente.

-L'autoclave a 121 ° C per 15 minuti, non superare il tempo di sterilizzazione.

-Lasciar riposare e servire ancora caldo su piastre sterili di Petri. Il pH finale deve essere 6,9 ​​± 0,2.

-Lasciare solidificare e risparmiare in frigorifero fino all'uso. Prima di seminare le piastre devono prendere la temperatura ambiente.

-La polvere è verde e preparata prende un colore verdastro marrone-arancione o rossastro, a seconda del pH e della casa commerciale. Un colore molto marrone è indicativo che l'agar è stato surriscaldato.

-Una volta che l'agar non è raccomandato, non si consiglia di ri -Build, perché il mezzo deteriorato.

Usi/applicazioni

Questo mezzo viene utilizzato per la ricerca di ceppi del genere campioni di salmonella di feci e cibi lattiero -caseari, tra gli altri.

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Essendo un mezzo abbastanza inospitale, è consigliabile seminare un abbondante inoculo se viene utilizzato il campione diretto. Altrimenti, il pre-arricchimento e l'arricchimento dei campioni dovrebbero essere fatti prima di seminare in questo mezzo.

Poiché alcuni ceppi di salmonella sono inibiti o crescono con difficoltà, è consigliabile accompagnare questo mezzo con altre età selettive per la salmonella.

Ogni colonia con una tipica caratteristica della salmonella deve essere sottoposta a test biochimici per l'identificazione definitiva.

QA

Per testare il corretto funzionamento dell'agar verde brillante. I ceppi ATCC possono essere usati per osservare il loro sviluppo su di esso.

I ceppi più frequenti utilizzati per il controllo di qualità sono: Salmonella entetidis ATCC 13076, Salmonella typhimurium ATCC 14028, Proteus mirabilis ATCC 43071, Klebsiella pneumoniae ATCC 700603, Escherichia coli ATCC 25922,  Shigella flexneri ATCC 12022, Staphylococcus aureus ATCC 6538.

I primi 3 devono dare colonie bianche rosa o trasparenti su uno sfondo rosso. Salmonella con buon sviluppo e proteus con crescita scarsa o regolare.

Per Klebsiella ed Escherichia, sono previste colonie gialle verdastre con sfondo giallo e nel caso di Shigella e Staphylococcus devono essere inibite.

Il mezzo disidratato deve essere conservato a temperatura ambiente, in un luogo asciutto, perché il mezzo è molto igroscopico.

Riferimenti

1. Britania Laboratory. Agar verde brillante. 
2. Laboratorio BD. BD Brilliant Green Agar.