Testa di Czapek, preparazione, usi e limitazioni

Lui Agar Czapek (CZA) è un mezzo di coltura solida selettiva appositamente progettato per la coltivazione di batteri e funghi saprofiti. È stato creato dal botanico Friedrich Johann Franz Czapek, di origine polacca, e il chimico americano Arthur Wayland Dox; Ecco perché questo agar è anche noto come metà czapek-dox.

Il mezzo originale era liquido, ma in seguito è stato aggiunto un agar per fare un mezzo solido. Il mezzo di czapek è composto da nitrato di sodio, fosfato bipotasico, solfato di magnesio, cloruro di potassio, solfato ferroso, saccarosio, agar e acqua distillata.

Czapek a. Aspergillus Parasiticus b. Aspergillus fumigatus Fonte: a. Medmyco [CC BY-SA 4.0 (https: // creativeCommons.Org/licenze/by-sa/4.0)]/ b. Foto: DR. David Midgley. Wikipedia.com

L'agar Czapek è 7.3, ma c'è una variante a cui viene aggiunto l'acido lattico al 10% il cui pH è 3,5. Questo mezzo acido viene usato per la coltivazione di microrganismi acidofili.

D'altra parte, alcune case commerciali hanno modificato la composizione dell'agar Czapek cambiando solfato di magnesio e fosfato bipotas per gliceofosfato; Questa modifica impedisce il precipitato del fosfato di magnesio osservato con la formula convenzionale. Allo stesso modo, c'è un'altra variante a cui viene aggiunto l'estratto di lievito.

Infine, l'agar di Czapek è raccomandato dall'APHA APHA AMERICAN PUBBLIC SALUTE PER LO STUDIO DI Actinomicetes SP, Aspergillus SP, Paecilomyces SP E Penicillium sp. Queste specie sono caratterizzate dall'essere microrganismi ambientali e agenti patogeni opportunistici.

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Base

Questo mezzo contiene saccarosio; Questo carboidrato funge da fonte di carbonio, mentre il nitrato di sodio è la fonte di azoto, ma a differenza di altri mezzi che l'azoto fornito è tipo inorganico.

Per questo motivo il mezzo czapek è considerato selettivo, perché può sviluppare solo microrganismi in grado di utilizzare i composti inorganici come unica fonte di azoto.

Come sostanza regolatoria del mezzo osmolarità è il fosfato bipotasico. D'altra parte, il solfato di magnesio, il cloruro di potassio e il solfato ferroso forniscono minerali essenziali per la crescita dei microrganismi di saprofiti (vita libera). Con questa formula si forma un precipitato di fosfato di magnesio.

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Infine, l'aggiunta di agar è il composto che fornisce la solida coerenza all'ambiente e l'acqua è il solvente di tutti i componenti.

Con la formula di agar Czapek modificata non vi è alcuna formazione precipitata e migliora la crescita nella crescita di alcuni funghi.

L'estrema acidità dell'agar acido Czapek rende questo un mezzo più selettivo, consentendo solo la crescita dei microrganismi acidofili, in grado di utilizzare azoto inorganico. Mentre, Agar Czapek-Levadura migliora le prestazioni di alcuni funghi.

Preparazione

Mezzo czapek-dox

Pesare 49 gr di coltura disidratata e dissolversi in acqua distillata. Applicare il calore per bollire. Scuoti la miscela frequentemente fino a quando non si dissolve completamente.

-Agar Czapek

Distribuire la miscela disciolta in tubi e autoclavate a 121 ° C per 15 minuti. Quando rimuovi dall'autoclave, omogeneizzare prima di coricarsi e lasciare solidificare.

-Piastre di agar czapek

Autoclavati la miscela sciolta a 121 ° C per 15 minuti e quando si lascia raffreddare a 50 ° C, omogeneizzando e versando 20 ml in Petri sterile. Lascia che solidificare, investire e risparmiare in frigorifero fino all'uso.

Il pH deve essere 7,3 ± 0,2. Il colore del mezzo disidratato è bianco e preparato è ambra chiaro, leggermente nuvoloso a causa della presenza di un precipitato flocculante.

Mezzo czapek un acido pH

Preparati come descritto, ma aggiungendo 10 ml di acido sterile sterile al 10% per ogni litro di mezzo preparato. Il mezzo di czapek modificato deve essere a pH 3,5 ± 0,2.

CZAPEK MIUTO MODIFICATO

Pesare 45,4 gr del mezzo disidratato e dissolversi in 1 litro di acqua. Il resto della preparazione è uguale a quello sopra descritto. Il colore del mezzo disidratato è bianco e preparato è il colore biancastro. Il pH finale del mezzo è 6,8 ± 0,2.

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Mezzo czapek-levadura

Chiamato anche Czapek-Extract del lievito (CYA). Contiene gli elementi del classico czapek agar più l'estratto di lievito.

Utilizzo

Il mezzo Czapek viene utilizzato per cercare microrganismi di saprofiti in campioni di suolo, verdure, cereali, aria, insetti, tra gli altri.

Czapek Un agar acido viene utilizzato per la crescita di microrganismi acidofili, mentre l'agar Czapek modificato è particolarmente utile per la formazione di clamidospore in specie complesse Candida albicans.

Infine, l'agar Czapek -levadura è molto utile per l'isolamento di Aspergillus e Penicillium.

Seminato

-Agar Czapek

Per cercare actinomiceti sul terreno, procedere come segue: il campione con acqua fenolata di 30 minuti viene trattato e quindi 1 ml di sospensione nell'agar Czapek viene piantato. Incuba a 28 ° C per 5-7 giorni.

Per campioni di verdure, cereali e insetti sono posizionati direttamente sull'agar. Le diluizioni possono anche essere fatte e seminare 0,1 ml sulla superficie dell'agar.

-Agar Czapek modificato

Poiché viene utilizzata la mano dritta o l'ago, viene permeata con il tampone e inocula la paletta che fa una foratura fino a quando non tocca la base della piastra. Incubare per 24 ore a 28 ° C ed esaminare con un microscopio sopra e sotto la piastra per osservare se le clamidospore si sono formate.

Temperatura e tempo di incubazione

La temperatura e il tempo di incubazione variano a seconda del tipo di microrganismo che si cerca di isolare. Di solito le piastre sono incubate da una o due settimane in un intervallo di temperatura da 20 a 25 ° C.

Tuttavia, ci sono condizioni specifiche per alcuni ceppi. Ad esempio, la maggior parte delle specie del genere Aspergillus ha una crescita ottimale a 30 ° C; Tuttavia A. fumigatus crescere a 50 ° C.

Per quanto riguarda il tempo di incubazione, una o due settimane è normale, tuttavia Candida albicans Può svilupparsi in 24-48 ore a 25 ° C.

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Caratteristiche di alcune colonie in questo mezzo

-Penicillium atravenetum

Si svolge in 12 giorni di incubazione a 27 ° C. Le sue colonie sono piccole (25 mm).

Le colonie sembrano veliste, con un bordo definito bianco e al centro presenta un tono blu verdastro che concorda diventa grigio. Il retro della colonia è arancione, posizionandosi nel mezzo dello stesso colore per produzione di pigmenti.

-Aspergillus Niger

Si sviluppa con un micelio da bianco a giallo e spore nere.

-Candida albicans

Le colonie cremose di beige leggero si sviluppano chiari. Nella forma di Agar Czapek modificata.

-Aspergillus parassitico

Un micelio verde scuro si sviluppa in 7 giorni a 25 ° C.

QA

Per valutare la qualità del terreno di coltura, è possibile seminare ceppi di controllo certificati, come ad esempio: Aspergillus Niger MKTA 16404, Candida albicans MKTA 10231.

Aspergillus Niger sviluppa un micelio da bianco a giallo e spore nere in circa 5 giorni, mentre Candida albicans Avrà una crescita soddisfacente in 24 ore di incubazione a 25 ° C; Le colonie sono di colore crema.

Limitazioni

Some studies have revealed that for the recovery of actinomycetes, the agar with the best performance is the pope dextrose agar, leaving the Czapek agar in second place, but for the recovery of Aspergillus and Penicillium the Czapek agar is the one that provides the greatest recovery valutare.

Riferimenti

1. Dávila M, et al. Actinomiceti antagonisti contro funghi fitopatogeni di importanza agricola. Rev. Mex. scienza. agricoltura 2013, 4 (8): 1187-1196. Disponibile su: scielo.org.
2. Luna M, Lozada e, grano. Isolamento dei ceppi di Aspergillus Niger, Ocratossin A produttori, nel Café Verde (Arabica Coffea) immagazzinato. Rev. Mex. Microfono . 2010; 32: 63-68. Disponibile in.Scielo.org.
3. Collaboratori di Wikipedia. Czapek Medum. Wikipedia, l'enciclopedia libera. 13 gennaio 2019, 20:30 UTC. Disponibile su: in.Wikipedia.org
4. Conda Ponadisa Laboratories. Agar Czapek-Dox modificato. Disponibile su: Condalab.com
5. Microkit Cultivation Media. Agar Czapek-Dox. Godponibile in: media culto.com