Agar cled

Corynebacterium stratum su agar cled. Fonte: Nathan Reading from Halesowen, Regno Unito, CC di 2.0, Wikimedia Commons

Cos'è l'agar cled?

Lui Agar cled (Cistine-lattosio-elettroliti-efficiente) è una coltura solida differenziale, utilizzata per la diagnosi di infezioni del tratto urinario. La composizione del terreno di coltura è progettata per la buona crescita dei patogeni urinari ed è ideale per la quantificazione delle unità di formazione del colon (UFC).

Il terreno di coltura CLED è non selettivo, poiché i microrganismi Gram -Negative e Gram -Positive possono crescere in esso. Ma questo non è un problema, perché la maggior parte delle infezioni urinarie sono causate da un singolo tipo di microrganismo.

In caso di infezioni polimicrobiche, possono essere raggiunti 2 o 3 batteri diversi, ma è molto raro e il più delle volte sono campioni contaminati.

Tra i batteri gram -negativi che possono crescere in questo mezzo ci sono i bacilli appartenenti alla famiglia Enterobacteriaceae e ad altri bacilli enterici, essendo gli uroopatogeni più frequentemente isolati nei campioni di urina quanto segue: Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Proteus mirabilis, Morganella Morganii, Pseudomonas aeruginosa, tra gli altri.

Inoltre, tra i batteri positivi al grammo che possono crescere in questo mezzo lo sono Staphylococcus aureus, Staphylococcus saprofitico, Enterococcus faecalis, Streptococcus agalactiae, Chorynebacterium SP, Lactobacillus SP E possono persino coltivare lieviti, come complessi Candida albicans.

Tuttavia, a causa della composizione chimica dell'ambiente, non consente la crescita di alcuni patogeni genito -urinarie, come Neisseria gonorrhoeae, Gardnella Vaginale, tra gli altri.

Fondazione dell'agar cled

Il terreno di coltura cled ha come fonte di estratto di energia di carne, caseina idrolizzata e gelatina idrolizzata idrolizzata. Forniscono nutrienti per lo sviluppo di piccoli batteri esigenti.

Contiene anche cistina, un aminoacido che consente la crescita dei coliformi, distinguibile per le sue piccole dimensioni.

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Contiene anche come un lattosio fermentabile in carboidrato, quindi questo media è differenziale, essendo in grado di distinguere i batteri fermentanti del non fermentazione del lattosio.

I batteri fermentanti trasformano il pH medio per produzione di acidi, sviluppando colonie gialle, mentre i batteri non fermentanti non generano cambiamenti nel mezzo, quindi prendono la colorazione dell'agar originale, colore verde.

La reazione di fermentazione viene rivelata grazie alla presenza dell'indicatore di pH, che in questo mezzo è blu bromotimolo.

D'altra parte, la bassa concentrazione di elettroliti medi inibisce la tipica crescita invasiva del genere Proteus, Chiamato effetto sciame. Ciò genera un vantaggio rispetto ad altri media, poiché consente il conteggio dell'UFC, incluso se il genere è presente Proteus.

Tuttavia, la bassa concentrazione di elettroliti inibisce la crescita di alcune specie del genere Shigella, Questo è uno svantaggio rispetto ad altri media.

Fondazione dell'agar CLED (BEVIS)

Esiste una variante o una modifica di questo mezzo, apportata da Bevis, che incorporava la composizione originale di Fuchsin acido (Andrade). Lo stesso agisce insieme al blu bromotimolo per differenziare i batteri fermentanti dal non fermentazione.

La differenza tra l'ambiente convenzionale e modificato è il colore che le colonie adottano. Nel caso dei batteri che fermentano il lattosio, le colonie acquisiscono un colore arancione rossastro con un alone rosa o rosso, mentre non fermentari sono grigi.

Applicazioni

Viene utilizzato l'agar cled esclusivamente Per campioni di campioni di urina. L'uso di questo mezzo è particolarmente frequente nei laboratori europei, mentre in America è meno usato.

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La raccolta del campione deve soddisfare alcuni parametri per ottenere risultati affidabili, tra cui:

Non assumere antibiotici prima del campione.

Preferibilmente prendere l'urina della prima ora del mattino, poiché è più concentrata, quando non è possibile prelevare campioni con metodi invasivi.

Lavare bene i genitali prima di prendere il campione.

Scartare il primo getto di minzione e quindi posizionare il contenitore.

Raccogli tra 25 e 30 ml di urina in un contenitore sterile ben etichettato.

Prendi immediatamente il laboratorio circondato sul ghiaccio.

Deve essere elaborato prima di 2 ore di emissione o refrigerata a 4 ° C per un massimo di 24 ore.

Campioni di urina

Il campione di urina deve essere diluito 1:50.

Per diluizione, Colloqar 0,5 ml di urina del paziente e diluire con 24,5 ml di soluzione fisiologica sterile. Misurare 0,1 ml di urina diluita e seminare in superficie con spatola di drigalski sul mezzo cled.

Questo è il metodo seminato indicato per contare le colonie. Ecco perché viene utilizzato nei campioni di urina, poiché i risultati devono essere espressi in UFC/ML.

Per la quantificazione delle colonie ottenute, procedere come segue: Conta le colonie della piastra e moltiplica per 10 e poi per 50. Questa è la quantità di UFC/ml di urina.

Interpretazione

Entità sopra i 100.000 UFC/ML -Indica Infezione urinaria.

Incontro al di sotto di 1000 UFC/ML- Non c'è infezione.

Tra 1000-10.000 ufc/ml -dudoso, possibile contaminazione, ripetizione campione.

ID

Un grammo dovrebbe essere fatto alle colonie coltivate in cled.

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Ad esempio, se si tratta di un bacillo negativo a grammo, verrà seminato su un agar MacConkey, dove la fermentazione o meno del lattosio viene corroborata. Inoltre, un agar nutriente è attaccato per eseguire il test di ossidasi.

Nel caso in cui Gram riveli cocco positivi a Gram, può essere soggetto ad agar salato di mannitolo e agar nutriente. In quest'ultimo il test della catalasi viene eseguito. Infine, se si osservano lieviti, verrà seminato su un agar Sabouraud.

Molti laboratori ignorano l'uso del medio cleed e preferiscono solo usare sangue, macconkey e agar nutriente per seminare campioni di urina.

Preparazione

In un Felola con un litro di acqua distillata, dissolvere 36,2 gr di Agar in polvere cled. Dopo 5 minuti di riposo, riscaldare l'agar risospettato, mescolando costantemente fino a bollire per 1 minuto.

Quindi sterilizzare a 121 ° C per 15 minuti nell'autoclave. Tempo completato, ritirarsi dall'autoclave e lasciare raffreddare fino a raggiungere una temperatura di 45 ° C. Successivamente, viene servito tra i 15-20 ml su ciascun Petri sterile.

Le piastre servite la procedura devono essere eseguite all'interno di una campana di flusso laminare o di fronte all'accendino di Bunsen, per evitare la contaminazione.

Le piastre servite possono consolidarsi, ordinare in una forma invertita e immagazzinate in un frigorifero (2-8 ° C) fino all'uso.

Il pH finale del mezzo preparato deve essere a 7,3 ± 0,2.

Riferimenti

1. Raccomandazioni per la diagnosi microbiologica dell'infezione urinaria. Chil. Infettolo. Recuperato da Scielo.org.
2. Mezzo cled. Recuperato da Britanialab.com.