Semplice colorazione

Cos'è la semplice colorazione?

IL Semplice colorazione È una procedura di colorazione rapida e semplice in cui viene utilizzata una singola colorante, quindi si chiama semplice. È usato principalmente per determinare la morfologia e l'organizzazione delle cellule presenti in un campione.

Naturalmente, le cellule non hanno colore, quindi è necessario renderle visibili in qualche modo quando vengono osservate al microscopio.

È importante evidenziare che i coloranti utilizzati nella colorazione semplice devono essere basi con carico positivo (cationico), in modo che possano unirsi spontaneamente al citoplasma murale e cellulare.

Queste strutture cellulari sono caricate negativamente. Pertanto, il colorante, caricato positivamente, è attratto dalle cellule e si unisce spontaneamente. Pertanto, tutte le cellule presenti in un campione sono rapidamente colorate.

Colori da colorare in una semplice colorazione

Esistono diversi coloranti di base che possono essere utilizzati nel laboratorio di microbiologia. I più usati sono:

• Blu di metilene.
• Cristallo viola.
• Malachite Green.
• Fuchsin di base.

Tutti questi coloranti funzionano bene nei batteri perché hanno ioni a colori (cromofori) con carico positivo (cationico).

I tempi di colorazione per la maggior parte dei coloranti sono relativamente brevi. Generalmente, vanno da 30 secondi a 2 minuti, a seconda dell'affinità del colorante.

È importante tenere presente che prima di tingere un campione mediante una semplice colorazione, deve essere esteso e fissato alla lamiera di vetro (slitta). Il campione esteso e fisso è chiamato striscio.

Procedura

Passo 1

Posizionare lo scivolo su uno scaffale di colorazione e applicare il colorante desiderato. Lascia l'atto di tempo corrispondente.

Normalmente, una semplice colorazione richiede alcuni secondi o un paio di minuti, a seconda del colore da colorare.

Osservazione

In questo passaggio è importante non superare il tempo raccomandato per il colorante utilizzato, poiché i cristalli potrebbero essere formati nel foglio, producendo ciò che è noto come "artefatti", che distorcono la morfologia delle cellule.

Passo 2

Lavare con cura lo striscio del vetrino con acqua distillata da una bottiglia o con acqua di rubinetto che scorre lentamente, fino a quando il deflusso diventa trasparente. In generale, questo richiede da 5 a 10 secondi.

Osservazione

Non applicare la corrente d'acqua direttamente sull'odore, per prevenire la forza dello stesso danno.

Se non c'è acqua distillata, l'acqua del rubinetto può essere utilizzata senza problemi, in quanto non influirà sul risultato della colorazione.

Passaggio 3

Asciugare lo scivolo con asciugamani di carta assorbente in un certo senso e senza sfregamento. Assicurarsi che la parte inferiore della diapositiva sia pulita.

Passaggio 4

Osserva lo striscio tinto al microscopio. Inizia con gli obiettivi più lontani per individuare correttamente l'area che si desidera osservare in modo più dettagliato. Cambia l'obiettivo per avvicinarsi e più al campione.

Osservazione

Per l'uso dell'obiettivo con il massimo aumento (normalmente 100x) olio di immersione deve essere usato, poiché questo aiuta la luce a penetrare meglio e che l'immagine sembra più chiara. Non è necessario utilizzare una copertura.

Passaggio 5

Infine, scartare tutti i campioni in un contenitore appropriato che è debitamente etichettato come "rischio biologico".

Applicazioni

• Osservazione della morfologia cellulare.
• Osservazione dei campioni nei laboratori chimici, per determinare la presenza di batteri, virus, ecc.
• Identificare gli agenti infettivi e diagnosticare correttamente.
• Come strumento indispensabile in microbiologia.
• Sapere se un batterio ha una capsula o no e sapere a che tipo appartiene.

Riferimenti

1. Applicazioni microbiologiche: manuale di laboratorio in generale microbiologia. Le compagnie McGraw-Hill.
2. Harisha, s. Un'introduzione alla biotecnologia pratica. Firewall mediatico.