Sim Foundation, preparazione e usi

Lui SIM MEDIO È un agar semi -solido e differenziale, appositamente progettato per aiutare l'identificazione di alcuni batteri, principalmente dalla famiglia Enterobacteriaceae. È composto da tripteina, peptone, solfato di ferro, solfato di ammonio, tiosolfato di sodio e agar.

Questo mezzo consente l'esecuzione di tre test importanti: la produzione di idrogeno solforato (H₂S), la formazione di indolo e motilità, da lì arriva l'acronimo sim. A causa della sua grande utilità, non può mancare in un laboratorio di batteriologia.

A. Middle Sim Commercial B. SIM H2S (-), Indol (-) e Motility (+) e SIM H2S (+), Indol (-), Motility (+) Test test. Fonte: a. Foto scattata dall'autore MSC. Marielsa Gil b. Mfloayza [CC BY-SA 3.0 (https: // creativeCommons.Org/licenze/by-sa/3.0)]

A differenza di altri media, questo deve essere semi -solido per rilevare la capacità di movimento che alcuni batteri hanno. In questo senso, questo test funziona molto bene per gli enterobatteri, ma non in bacilli negativi non fermentari, dove si preferiscono altri metodi, come il calo in sospeso.

Il mezzo SIM consente di distinguere alcune proprietà specifiche che caratterizzano alcuni batteri in relazione ad altri. Per esempio Escherichia coli si distingue per essere h₂S (-), indol (+) e motilità (+), mentre Proteus mirabilis è h₂S (+), indol (-), motilità (+).

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Base

È una cultura significa che sono considerati differenziali, perché il suo uso riesce a distinguere tra i microrganismi in grado di produrre idrogeno solforato da coloro che non lo fanno; Sottolinea anche quelli che formano indolo dal triptofano da quelli che non si formano e infine differenzia i batteri mobili da immobile.

Fonte di potere

Come qualsiasi mezzo di cultura, ha elementi che forniscono i nutrienti necessari in modo che possano svilupparsi microrganismi non demandanti. Questi elementi sono rappresentati da peptones e triptein.

Lo sviluppo del microrganismo nell'ambiente è essenziale per osservare la presenza o l'assenza delle caratteristiche che questo significa valutare.

Produzione di idrogeno solforato

La lettera S dell'acronimo SIM si riferisce alla produzione di idrogeno solforato (H₂S). I batteri in grado di formare idrogeno solforato prendono solfato di sodio.

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Una volta formata la H₂S -gas incolore-, questo reagisce con il sale di ferro presente nel mezzo, formando solfuro ferroso, chiaramente visibile (precipitato nero). I batteri che non formano H₂S, lascia il mezzo di colore originale (beige).

La presenza del precipitato nero può ostacolare l'interpretazione della motilità. Tuttavia, è noto che la maggior parte degli enterobatteri che producono HT₂S sono motilità positiva, come Salmonella, Proteus e Citrobacter. Inoltre, il precipitato nero che copre quasi l'intero mezzo, suggerisce una motilità positiva.

Formazione di indolo

La seconda lettera dell'acronimo sim è la "i", che rappresenta la formazione di indolo.

In questo senso, Tripteine, oltre ad essere fonte di nutrienti, svolge un'altra funzione fondamentale. Questo peptone è ricco di un aminoacido chiamato triptofano, quindi può mostrare batteri che producono triptofanasi.

Questo enzima è responsabile di clivar sull'amminoacido triptophano, con la conseguente formazione di indolo (sostanza incolore), acido piruvico e ammonio.

Ecco perché, per mostrare questa reazione è necessaria. Uno dei due reagisce con l'Indol, formando un anello a forma di fucsia rossa sulla superficie dell'agar. Se appare l'anello a colori fucsia, il test Indol viene interpretato come positivo.

I batteri che non possiedono questo enzima, non formeranno l'anello e vengono interpretati come un test di indolo negativo.

È importante notare che la prova indol deve essere l'ultima da interpretare, poiché una volta aggiunto il reagente, il mezzo ostacola la visualizzazione della motilità.

Motilità

Finalmente la lettera "m" della parola sim significa motilità. Al fine di valutare la motilità, questo mezzo è strategicamente semi-solido, poiché questa caratteristica è essenziale per osservare se esiste o meno movimento batterico. I batteri che hanno flagelli sono quelli che danno questo test positivo.

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Verrà evidenziato un test positivo quando si osserva la torbidità, sia nell'inoculo iniziale, sia intorno a questo. Mentre i batteri non mobili si sviluppano solo durante il viaggio di inoculo iniziale.

Preparazione

SIM MEDIO

Pesare 30 gr di mezzo disidratato e dissolversi in un litro di acqua distillata. La miscela viene lasciata a riposo per 5 minuti e quindi riscaldata fino a ebollizione, mescolando spesso fino alla sua completa dissoluzione.

Distribuire la miscela nei tubi di prova con coperchio di cotone e autoclavate a 121 ° C per 15 minuti. Rimuovere il rack di tubi di autoclave e lasciare solidificare in posizione verticale, in modo che il mezzo sia sotto forma di un taco.

Per la sua conservazione viene salvato in frigorifero fino al suo utilizzo. Il mezzo preparato deve avere un pH finale di 7,3 ± 0,2.

Quando si inocula il mezzo, questo deve essere a temperatura ambiente. Il colore del mezzo è beige.

Il reagente di Kovac

Misurare 150 ml di amil o isoamil o alcol butilico. (Usa uno dei tre menzionati).

Dissolvere 10 gr di p-dimetilaminobenzaldeide. Quindi, aggiungi lentamente 50 ml di acido cloridrico concentrato.

Il reagente pronto per l'uso è incolore o chiaro. Deve essere tenuto in bottiglia ambrata e conservato in frigorifero. Non usare se prendi un colore marrone scuro; Ciò indica che è danneggiato. Questo reagente è preferito quando si tratta di enterobatteri.

Reagente Erlich

Pesare 2 gr di p-dimetilaminobenzaldeide e dissolversi in 190 ml di alcool etilico assoluto e mescolare lentamente con 40 ml di acido idroclorico concentrato. Mantieni il reagente di Kovac allo stesso modo. Il reagente di Ehrlich è usato più per i batteri non fermentari e anaerobici.

Applicazioni

Il mezzo SIM è altamente utilizzato nei laboratori della batteriologia. Ha un vantaggio che si possono osservare tre caratteristiche essenziali nell'identificazione degli enterobatteri.

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Seminato

Il modo giusto per seminare questo mezzo è usare l'ago, con cui una parte della colonia pura per studiare viene presa e inserita al centro del mezzo verticalmente. Un singolo affondo deve essere fatto. La puntura non dovrebbe raggiungere il fondo del tubo, la cosa giusta è coprire solo due terze parti.

Non è consigliabile ripetere l'inoculo, poiché ciò può trasportare false interpretazioni di motilità positiva. Il mezzo inoculato viene incubato in aerobiosi a 37 ° C per 24 ore.

Una volta terminato il tempo, si osserva se esistesse o meno una produzione di H₂S e leggi la motilità. Infine, viene rivelato l'indolo, aggiungendo 3 a 4 gocce del reagente di Ehrlich o Kovac, miscelato delicatamente e interpretato.

Fonte: Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnosi microbiologica. 5 ° ed. Pan -American Editoriale S.A. Argentina.

QA

Come controllo della sterilità, sono incubati uno o due tubi senza inocularsi in 37 ° C per 24 ore. Si prevede che dopo questo tempo non ci sia alcuna crescita o cambiamento di colore.

Come controllo di qualità è possibile utilizzare ceppi noti certificati, come ad esempio: Escherichia coli ATCC 25922, Enterobacter Aerogenes ATCC 13048, Klebsiella pneumoniae ATCC 13883, Salmonella typhimurium ATCC 14028, Shigella Sonnei ATCC 29930, Proteus vulgaris ATCC 13315.

I risultati previsti sono: Escherichia coli H₂S negativo, indolo e motilità positiva, Enterobacter Aerogenes Solo motilità positiva, Salmonella typhimurium H₂S e motilità positiva, con indolo negativo. Proteus vulgaris Tutto positivo, purché Klebsiella pneumoniae E Shigella Sonnei Tutto negativo.

Limitazioni

-Alcuni ceppi di Morganella Morganii, Tra gli altri ceppi può produrre un pigmento brunastro in questo mezzo a causa della produzione di melanina, questo non dovrebbe essere confuso con il precipitato di solfuro ferroso. In professionisti inesperti questa situazione può generare falsi positivi nell'interpretazione del test H₂S.

-I batteri aerobici rigorosi crescerà solo sulla superficie del tubo, che ostacola l'interpretazione della motilità.

Riferimenti

1. Laboratori BD. BBL SIM MEDUM. 2008. Disponibile su: BD.com
2. Neogen Laboratories. Sim Medum. Disponibile su: sicurezza alimentare
3. Difco Francisco Soria Melguizo. Sim Medum. 2009. Disponibile su: http: // f-soria.È
4. Laboratorio Brizuela-Lab.  SIM medio. Disponibile in: .Brizuela-lab.com
5. Britania Laboratories. SIM medio. 2015. Disponibile su: Studires.È/doc
6. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnosi microbiologica. 5 ° ed. Pan -American Editoriale S.A. Argentina.