Strema batterica che cosa è, caratteristiche e preparazione

Lui Striscio batterico È un'estensione sotto forma di un film sottile di una sospensione di microrganismi batterici realizzati su una lastra di vetro trasparente o scivolo, per l'osservazione al microscopio ottico.

L'estensione sotto forma di un film viene eseguita per separare il più possibile i microrganismi, poiché se l'osservazione è raggruppata non è chiara.

Nello studio delle colture batteriche, le tecniche di striscio, fissaggio e preparazione della colorazione vengono utilizzate per analizzarle meglio. A causa delle piccole dimensioni dei microrganismi, è necessariamente richiesto l'uso di un microscopio ottico per l'osservazione.

I microscopi ottici sono strumenti indispensabili per l'osservazione dello striscio. Questi usano lenti ottiche e luce che consentono la visualizzazione di campioni con grande aumento delle dimensioni.

In generale, le cellule viventi non hanno strutture colorate di gran lunga, le viste del microscopio ottico sono campioni incolori e trasparenti e mostrano pochissimi contrasti interni e con l'ambiente circostante.

L'osservazione con il semplice microscopio ottico del campo chiaro, senza l'uso di tecniche di colorazione ausiliaria, è molto limitata e viene utilizzata solo in alcuni casi, come nell'osservazione del movimento del microrganismo.

Per l'osservazione dei microrganismi in modo ottimale, è necessario raggiungere un equilibrio tra il contrasto e la risoluzione. I dettagli delle cellule non possono essere osservati al microscopio, anche con alta risoluzione; È richiesto l'uso di coloranti attraverso le tecniche di colorazione, che contribuiscono al contrasto per l'osservazione.

Caratteristiche di uno striscio batterico di buona qualità

Ottimo contrasto

Per ottenere un eccellente contrasto ci sono microscopi sofisticati chiamati Microscopio a contrasto di fase, interferenza differenziale e microscopio a campo scuro. Questo tipo di microscopio viene utilizzato per osservare strutture batteriche come baccelli e filamenti, tra gli altri.

La colorazione è una tecnica semplice per aumentare il contrasto che si ottiene con un microscopio a campo chiaro. In questa tecnica possono essere utilizzati coloranti diversi che migliorano significativamente l'osservazione del microscopio.

La colorazione è fatta direttamente sugli strisci o sulle estensioni delle sospensioni di microrganismo sulle vetrini, precedentemente essiccate e fisse.

Buon fisso

Il fissaggio è una tecnica che viene utilizzata per preservare le strutture cellulari; provoca l'inattivazione dei microrganismi e l'adesione al vetro della diapositiva. Esistono diversi trattamenti di fissaggio: fissazione del calore e fissazione chimica.

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Fissazione di calore

Questo è il metodo più usato nell'osservazione dello striscio batterico. La tecnica consiste nel passare la sospensione batterica di striscio per la fiamma di un accendino. Questa tecnica è in grado di preservare la morfologia esterna dei batteri, ma distrugge le sue strutture interne.

Fissazione chimica

La fissazione chimica utilizza sostanze chimiche nella conservazione, come la formaldeide o la formalina, l'etanolo e l'acido acetico, tra gli altri. Il vantaggio di utilizzare gli agenti chimici fissati è che si ottiene la conservazione delle strutture cellulari interne dei microrganismi.

Sangimi di sangue. Fonte: Bobjgalindo [GFDL (http: // www.gnu.Org/copyleft/fdl.HTML) o CC BY-SA 4.0 (https: // creativeCommons.Org/licenze/by-sa/4.0)], da Wikimedia Commons

Buona colorazione

Le procedure più comuni per eseguire la colorazione di una macchia precedente e fissa sono la colorazione positiva o semplice, la colorazione differenziale e la colorazione negativa. Esistono anche tecniche speciali per colorare particolari strutture cellulari (capsula, spore, flagelli).

Colorazione positiva o semplice colorazione

La colorazione positiva o semplice è la tecnica di colorazione striscio più utilizzata. Usa i coloranti che hanno la capacità di unirsi a determinate strutture microbiche, permettendo loro di osservarli al microscopio.

Questi coloranti hanno gruppi cromofori (porzione colorata) nella loro struttura chimica, con doppi legami alternativi e legami semplici (coniugazione). Questi collegamenti possono a loro volta stabilire legami ionici o covalenti con alcune strutture cellulari.

I coloranti utilizzati nella colorazione positiva o semplice sono principalmente derivati ​​chimici del anilina (sali biologici colorati).

D'altra parte, tra i coloranti possiamo trovarne alcuni con pH di base e altri con pH acido.

Coloranti di base

Nei coloranti di base, il gruppo cromoforo ha una carica elettrica positiva. La stragrande maggioranza dei microrganismi procariotici ha un pH neutro interno e la loro superficie cellulare ha un carico negativo. Attraverso questa interazione elettrostatica, il cromoforo si lega alla cellula e al colorante.

Esempi di coloranti di base sono blu di metilene, vetro viola, verde malachite, fusibili di base, safranina, tra gli altri.

Coloranti acidi

Nei coloranti acidi il gruppo cromoforo ha una carica elettrica negativa. Questi sono usati per la colorazione proteica con gruppi di carica positiva. Esempi di coloranti acidi sono fusibili acidi, rosa del Bengala, rosso congo ed eosina.

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Colorazione differenziale

La tecnica di colorazione differenziale è applicare due coloranti di colore o intensità diversi, per distinguere il microscopio al microscopio. La colorazione gram e la colorazione della resistenza all'acido alcol sono la colorazione differenziale più utilizzata in batteriologia.

La colorazione di Gram viene utilizzata come test preliminare per conoscere la forma, le dimensioni, il gruppo cellulare, oltre al tipo di parete cellulare. Per test di colorazione Gram, i batteri della parete cellulare sono classificati come batteri Gram positivi e batteri Gram negativi.

Colorazione negativa

In questa tecnica, vengono utilizzati coloranti chimici che non penetrano nell'interno cellulare, ma creano il mezzo in cui i microrganismi sono appare come uno sfondo nero.

Nella tecnica di colorazione negativa, lo striscio viene preparato con una goccia di sospensione dell'inchiostro cinese o di nigrosina, che dopo aver permesso di asciugare a temperatura ambiente forma un film opaco al passaggio della luce. In questo modo, i microrganismi sono osservati come forme luminose su uno sfondo scuro.

Preparazione

A. Striscia

1.- Lavare molto bene i vetrini, asciugare con carta assorbente ed etichettarli. L'etichetta deve indicare il contenuto della preparazione, della data e del nome di coloro che l'hanno elaborato.

2.- Accendi la più chiara e sterilizza la maniglia di inoculazione nella fiamma a Red Alive.

3.- Lascia che la maniglia.

4.- Prendi il tubo di raccolto batterico, rimuovi il cappuccio e passa rapidamente la bocca del tubo vicino alla fiamma più chiara (fiamma).

5.- Immettere la maniglia di inoculazione nel tubo che contiene la coltura batterica e prendi il campione.

6.- Se il raccolto è in liquido, posizionare il campione prelevato con la maniglia al centro della diapositiva ed estenderlo con cura in un cerchio di circa 2 cm di diametro.

7.- Sterilizzare la maniglia di inoculazione.

8.- Consenti l'essiccazione dello striscio in aria.

9.- Ripeti i passaggi da 3 a 8 tre volte.

10.- Se il raccolto è solido, una goccia di acqua distillata deve essere precedentemente posizionata sulla diapositiva. Questo viene fatto per mescolare un piccolo campione di raccolto assunto con la maniglia di inoculazione, secondo le indicazioni dei passaggi da 2 a 5 (condizioni di asepsis).

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undici.- Estendere il campione diluito con la goccia d'acqua sulla diapositiva e ripetere tre volte.

B. Fissazione

1.- Aggiungi agli insegnanti di striscio secco -crop in medio liquido -due gocce di metanolo o etanolo assoluto.

2.- Lasciare asciugare l'aria dall'accendino.

3.- Se lo striscio proviene da una coltura solida, il fisso dell'odore secco viene fatto con calore, passandolo da 2 a 3 volte velocemente.

4.- Tocca il fondo dello striscio con la parte dorsale della mano sinistra (per quelli a mano destra; altrimenti, usa la mano destra) e verifica che sia freddo.

C. Semplice colorazione

1.- Aggiungi alle gocce di stringo 2 del colorante selezionato e let Act per il tempo richiesto nei protocolli specifici di ciascun colorante (di solito tra 1 e 5 minuti).

2.- Alcuni coloranti richiedono un uso di calore per l'attivazione, nel qual caso devi stare molto attento quando si riscuote i bagagli nella fiamma dell'accendino (manipolandolo con pinze ed evitare l'ebollizione). Un surriscaldamento dello striscio può distruggere le cellule desiderate.

3.- Rimuovere il lavaggio della tintura in eccesso con acqua distillata da un'immagine. Elimina l'acqua di lavaggio, colpendo delicatamente la diapositiva per la sua canzone, incline al tavolo da lavoro.

4.- Consentire l'asciugatura dell'aria.

5.- A seconda del tipo di osservazione, in questa fase viene utilizzata una copertura. La copertura e preserva lo striscio. Se in questa fase viene effettuata un'osservazione dell'immersione in olio, lo striscio non viene utilizzato ma lo striscio non può essere preservato.

D. Conservazione definitiva di striscio

1.- Immerge gli strisciati successivamente in ciascuna delle soluzioni indicate di seguito, per un minimo di 5 minuti. Lo scopo di questi "bagni" è di lasciare lo striscio completamente disidratato. Ogni reagente deve essere drenato bene, prima di entrare nello striscio nel bagno seguente.

L'ordine dei bagni disidratante è il seguente:

1. 70 % di etanolo
2. 95 % di etanolo
3. Acetone puro
4. Miscela di acetone -XILOL 1: 1
5. XILOL

Quindi consentire l'asciugatura dell'aria.

2.- Montare i coperchi, preferibilmente 22 × 22 mm, usando il balsamo del Canada o altri mezzi per l'assemblaggio.

Riferimenti

1. Cappucino, J.G. e Welch, C.T. (2017). Microbiologia: un laboratorio manuale. Pearson.
2. Holt, j.G. Editore. (1977). Il manuale di batteriologia determinativo di Bergey più corto. 8^th Baltimora: The Williams e Wilkins Co.