Fondazione per cromatografia liquida ad alta efficacia (HPLC), attrezzature, tipi

IL Cromatografia liquida ad alta efficienza È una tecnica strumentale utilizzata nell'analisi chimica con cui è consentito separare le miscele, purificare e quantificare i suoi componenti, nonché eseguire altri studi. È noto con l'abbreviazione di HPLC, derivata dall'inglese: Cromatografia liquida ad alta prestazione.

Quindi, come sottolinea il nome, funziona manipolando i liquidi. Questi consistono in una miscela composta dall'analita o dal campione di interesse e uno o più solventi che fungono da fase mobile; Cioè, quello che trascina l'analita in tutto il team HPLC e la colonna.

Equipaggiamento HPLC. Fonte: DQWYY [CC BY-SA 4.0 (https: // creativeCommons.Org/licenze/by-sa/4.0)]

HPLC è ampiamente diffuso da laboratori di analisi di qualità in numerose aziende; come farmacisti e cibo. L'analista in questione deve preparare il campione, la fase mobile, verificare la temperatura e altri parametri e posizionare le strade all'interno della ruota o della giostra in modo che l'attrezzatura esegui automaticamente le iniezioni.

L'attrezzatura HPLC è accoppiata a un computer attraverso il quale si possono osservare i cromatogrammi generati, oltre a iniziare l'analisi, controllare il flusso della fase mobile, programmare il tipo di eluizione (isocratica o gradiente) e attivare i rilevatori (UV -Vis o lo spettrofotometro di massa).

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Base

A differenza della cromatografia liquida convenzionale, come la carta o la colonna ripieni di silice in gel, HPLC non dipende dalla gravità in modo che il liquido bagni la fase stazionaria. Invece, lavorare con pompe ad alta pressione, che irrigano la fase mobile o eluente attraverso la colonna con maggiore intensità.

In questo modo, non è necessario.

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Ma l'efficienza di questa tecnica non è dovuta esclusivamente a questo dettaglio, ma anche alle minuscole particelle di riempimento che compongono la fase stazionaria. Essendo più piccolo, la sua area di contatto con la fase mobile è maggiore, quindi interagirà in misura migliore con l'analita e le sue molecole saranno separate di più.

Queste due caratteristiche, oltre al fatto che la tecnica consente l'accoppiamento del rivelatore, rendono HPLC molto più alto della cromatografia a strato fine o di carta. Le separazioni sono più efficienti, la fase mobile si muove meglio attraverso la fase stazionaria e i cromatogrammi consentono di rilevare alcune analisi nell'analisi.

Attrezzatura

Diagramma semplificato del funzionamento di un'attrezzatura HPLC. Fonte: Gabriel Bolívar.

Un diagramma semplificato è mostrato sopra come funziona un team HPLC. I solventi si trovano nei rispettivi contenitori, disposti con tubi per la pompa per trasportarli un piccolo volume nell'apparecchiatura; Abbiamo la fase mobile.

La fase mobile o eluente deve essere usurata prima, in modo che le bolle non influiscano sulla separazione delle molecole dell'analita, che viene miscelata con la fase mobile una volta che l'attrezzatura ha fatto le iniezioni.

La colonna cromatografica si trova all'interno di un forno che consente di regolarizzare la temperatura. Pertanto, per campioni diversi ci sono temperature adeguate per ottenere separazioni ad alte prestazioni, nonché un ampio catalogo di colonne e tipo di otturazioni o fasi stazionarie per analisi specifiche in analisi specifiche.

La fase mobile con l'analita disciolto entra nella colonna e da esso elimina prima le molecole che "sentono" meno affinità per la fase stazionaria, mentre poi educa quelle che sono più trattenute da essa. Ogni molecola di Eluida genera un segnale visualizzato nel cromatogramma, dove si osservano i tempi di ritenzione delle molecole separate.

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E d'altra parte, la fase mobile dopo aver attraversato il rivelatore termina in un contenitore di rifiuti.

Tipi HPLC

Esistono molti tipi di HPLC, ma tra tutti quelli più eccezionali sono i seguenti quattro.

Cromatografia di fase normale

La cromatografia di fase normale si riferisce a ciò in cui la fase stazionaria è naturale, mentre il cellulare apolare. Sebbene sia chiamato normale, in effetti è il meno usato, essendo la fase inversa la più diffusa ed efficiente.

Cromatografia inversa inversa

Essendo una fase inversa, ora la fase stazionaria è apolare e la fase mobile polare. Ciò è particolarmente utile nell'analisi biochimica, poiché molte biomolecole si dissolvono meglio in acqua e solventi polari.

Cromatografia a scambio ionico

In questo tipo di cromatografia l'analita, con carico positivo o negativo, si sposta attraverso la colonna che sostituisce gli ioni che ospita. Maggiore è il carico, maggiore è la sua conservazione, quindi è ampiamente utilizzato per separare i metalli di transizione ionica.

Cromatografia di esclusione molecolare

Questa cromatografia, piuttosto che separarsi, è responsabile della purificazione della miscela risultante. Come suggerisce il nome, l'analita è separato non a seconda di come si collega alla fase stazionaria, ma in base alle sue dimensioni molecolari e masse.

Le molecole più piccole saranno più mantenute delle molecole di grandi dimensioni, poiché queste ultime non sono intrappolate tra i pori delle otturazioni polimeriche delle colonne.

Applicazioni

HPLC consente un'analisi sia qualitativa che quantitativa. Per quanto riguarda il qualitativo, quando si confrontano i tempi di ritenzione del cromatogramma in determinate condizioni, è possibile rilevare la presenza di un composto particolare. Questa presenza può essere indicativa di una malattia, adulterazione o uso di droghe.

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Pertanto, è che una squadra fa parte dei laboratori diagnostici. Allo stesso modo, si trova all'interno delle industrie farmaceutiche, poiché consente di verificare la purezza del prodotto, nonché la qualità della stessa rispetto alla sua dissoluzione nell'ambiente gastrico. I materiali di partenza si presentano anche a HPLC per purificarli e garantire una migliore prestazione nella sintesi dei farmaci.

HPLC consente di analizzare e separare miscele proteiche complesse, aminoacidi, carboidrati, lipidi, porfirine, terpenoidi e in sostanza è un'opzione eccellente per lavorare con estratti vegetali.

Infine, la cromatografia di esclusione molecolare consente di selezionare polimeri di dimensioni diverse, poiché alcuni possono essere più piccoli o grandi. In questo modo, si ottengono prodotti con masse molecolari medi basse o alte, essendo questo un fattore determinante nelle sue proprietà e applicazioni future o sintesi.

Riferimenti

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