Sabouraud Agar What Is, Foundation, Preparation, use

Lui Sabouraud Agar, Conosciuto anche come Agar di destrosio di Sabouraud, è un terreno di coltura solida, in particolare arricchito per l'isolamento e lo sviluppo di funghi, come lieviti, stampi e dermatofiti.

Pertanto, questo mezzo non può mancare in un laboratorio di microbiologia per studiare la presenza di funghi patogeni o opportunistici, sia di campioni clinici che non clinici. È anche ideale per la crescita di batteri filamentosi come streptomici e nocardia. Il suo uso è molto ampio, perché può essere usato nella micologia umana, animale, vegetale e industriale.

A. Sabouraud agar senza scrofa. B. Sabouraud agar piantato con lievito. Fonte: foto scattate dall'autore MSC. Marielsa Gil

Questo mezzo fu creato nel 1896 dall'eccezionale dermatologo Raimond Sabouraud, che divenne uno specialista riconosciuto in tutto il mondo nei disturbi del cuoio capelluto, principalmente causato dai dermatofiti.

La sua creazione era così importante che da allora è stata usata e mantenuta oggi, sebbene con alcune modifiche.

Sebbene sia speciale per i funghi, in questo mezzo i batteri possono crescere, quindi per campioni con flora mista è richiesta l'inclusione di antibiotici nella sua preparazione e quindi inibisce la crescita della flora batterica che può essere presente.

La scelta di antibiotica deve essere effettuata attentamente e tenendo conto del tipo di fungo da recuperare, poiché alcuni sono inibiti in presenza di determinate sostanze.

Base

L'agar di destrosio di sabouraud è un mezzo che nella sua formulazione originale è debolmente selettivo, a causa del suo pH a 5 acidi.6 ± 0.2, tuttavia, i batteri possono essere sviluppati, principalmente in incubazioni prolungate.

Il mezzo contiene caseina pancreatica e peptone del tessuto digreatico di tessuto animale, che forniscono la fonte di carbonio e azoto per lo sviluppo di microrganismi.

Contiene anche un'elevata concentrazione di glucosio, che funge da fonte di energia a favore della crescita dei funghi al di sopra dei batteri. Tutto questo misto con agar -agar, componente che ti dà la coerenza appropriata.

D'altra parte, l'agar di destrosio di sabourauud può essere selettivo se vengono aggiunti antibiotici.

Con gli antibiotici è particolarmente utile in campioni di ferite, ulcere aperte o qualsiasi campione in cui si sospetta una grande contaminazione batterica.

Combinazioni più usate di destrosio di sabourauud con antibiotici

-Sabouraud Agar con cloramfenicolo: ideale per il recupero di lieviti e funghi filamentosi.

-Sabouraud Agar con gentamicina e cloramfenicolo: quasi tutti i funghi e lieviti filamentosi crescono in questo mezzo e inibiscono un gran numero di batteri, tra cui enterobatteri, pseudomonas.

-Sabouraud Agar con cicloesimide: è particolarmente utile per campioni di pelle o tratto respiratorio, purché il sospetto sia di funghi dimorfici.

La cicloesimide dovrebbe essere usata con cautela; Sebbene sia usato per inibire la crescita di funghi e lieviti non patogeni o ambientali che possono essere presenti come inquinanti in un campione, inibisce anche la crescita di alcuni funghi come Cryptococcus neoformans,  Aspergillus fumigatus, Boydii Allescheria, Penicillium SP e Altri funghi opportunistici.

-Sabouraud Agar con cloramfenicolo più cicloesimide: è principalmente usato per isolare i dermatofiti e i funghi dimorfici. Ha l'inconveniente che inibisce alcune specie di funghi opportunistici come Candida no albicans, Aspergillus, zigomicetos o c. Neoformans.

-Sabouraud Agar con cloramfenicolo, streptomicina, penicillina G e cicloesimide: è l'ideale per campioni estremamente contaminati con batteri e saprofiti funghi, ma ha l'inconveniente di inibire la crescita di Actinomyces e Nocardias, Oltre ai funghi opportunistici sopra menzionati.

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Preparazione

Se hanno ingredienti separati, può essere preparato come segue:

Sabouraud destrosio 

Pesare:

- 40 gr di destrosio

- 10 gr di peptone

- 15 gr di agar -agar

- Misurare 1000 ml di acqua distillata

Tutti gli ingredienti sono miscelati, il pH viene regolato a 5,6. I soluti vengono sciolti per ebollizione, 20 ml del mezzo sono distribuiti in tubi da 25 x 150 mm, senza trattenere e con coperchio di cotone preferibilmente.

Tubi con coperchio di cotone. Fonte: foto scattata dall'autore MSC. Marielsa Gil

Altre misure del tubo possono anche essere utilizzate, in base alla disponibilità.

Prendono l'autoclave per 10 minuti in un'atmosfera di pressione (121 ° C). Non dovrebbe essere superato nel tempo autoclavato. Quando si lasciano l'autoclave, i tubi sono inclini all'aiuto di un supporto fino a quando non si solidificano in un picco di flauto.

Un altro modo è dissolvere gli ingredienti riscaldando fino a bollire. Nella stessa Felola autoclavica per 10 minuti e quindi distribuire 20 ml in piastre di Petri.

Se è disponibile un mezzo di destrosio Sabouraud che contiene già tutti gli ingredienti, viene specificata la quantità specificata dalla casa commerciale per un litro d'acqua. Il resto dei passaggi è uguale a quelli sopra descritti.

Sabouraud Dextrose Agar (modifica Emmons)

Pesare:

-  20 gr di destrosio

- 10 gr di peptone

-  17 gr di agar -agar

-  Misurare 1000 ml di acqua distillata

Tutti gli ingredienti sono miscelati, il pH viene regolato a 6,9. Procedere nello stesso modo del caso precedente.

Ci sono case commerciali che offrono il mezzo con tutti gli ingredienti. In questo caso, pesare e preparare il modo in cui l'inserto lo descrive.

Sabouraud destrosio (modifica Emmons) con cloramfenicolo

Soluzione madre cloranfenicolo

- Pesare 500 mg di base di cloramfenicolo

- Misurare 100 ml di etanolo al 95%

- Mescolarsi

Il mezzo di destrosio Sabouraud (Emmons) viene preparato come già descritto e inoltre per ogni litro di aggiunta di 10 ml di soluzione madre di cloranfenicolo prima dell'autoclavo.

Sabouraud Emmons con destrosio cicloesimide

Soluzione madre di cicloesimide

- Pesare 5 gr di cicloesimide

- Misurare 100 ml di acetone

- Mescolarsi

The Sabouraud Dextrose Apoure.

Sabouraud destrosio (Emmons) con cloramfenicolo e cicloesimide

Il mezzo di destrosio Sabouraud (Emmons) viene preparato come già descritto e inoltre per ogni litro di aggiunta di 10 ml di soluzione madre di cloranfenicolo e 10 ml di soluzione madre di cicloesimide prima.

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Altri antibiotici che possono essere aggiunti

venti.000 a 60.000 unità di penicillina per litro di media.

30 mg di streptomicina per litro di mezzo.

Entrambi devono essere incorporati dopo il mezzo, leggermente raffreddato (50-55 ° C).

0,04 g di neomicina per litro di mezzo.

0.04 g di gentamicina per litro di media.

Considerazioni speciali

La sicurezza è preferita a seminare l'agar di destrosio di sabourauud in tubi a forma di cuneo (inclinato in un picco di flauto) piuttosto che in piastre di Petri, per evitare la dispersione e l'inalazione di spore.

È importante che i tubi con età sabourauD siano coperti di cotone e non con un coperchio del filo, poiché è stato dimostrato che le condizioni semi -aerobiche inibiscono la formazione di sporti in alcuni ceppi, ad esempio Coccidioides imite. Inoltre, la maggior parte dei funghi sono aerobi.

In caso di utilizzo di un coperchio del thread, non strettamente chiuso.

QA

I media preparati dovrebbero essere un controllo di qualità per verificare il loro corretto funzionamento. Per questo, alcuni ceppi vengono seminati.

Per sabouraud destrosio Candida albicans, che deve avere un'eccellente crescita. Un'altra piastra è inoculata con ceppi da Escherichia coli, deve essere completamente inibito.

Una targa senza inocularsi è anche incubata in cui non dovrebbe crescere alcun microrganismo.

Per sabouraud destrosio con cloramfenicolo e cicloesimide  Trichophyton mentagrophytes, deve svilupparsi bene. Un'altra piastra è inoculata con una tensione di Aspergillus flavus, in cui ci deve essere una crescita scarsa o una non crescita. Inoltre, viene incubata una placca non occupata per dimostrare la sua sterilità.

Per sabouraud destrosio con cicloesimide, ceppi di Candida albicans, Trichophyton rubrum  O Canis Microsporum, che deve dimostrare una buona crescita.

Allo stesso modo, una tensione di Aspergillus flavus, dimostrando una crescita scarsa o non coltura. Infine incubare una piastra senza inocularsi per il controllo della sterilità.

Applicazioni

Coltivazione primaria

L'agar classico di destrosio sabouraud contiene 4 gr di destrosio ed è eccellente come mezzo di isolamento primario, in quanto mostra la morfologia caratteristica di ogni fungo.

È anche eccellente per dimostrare la produzione di pigmenti. Tuttavia, non è il mezzo più appropriato per osservare la sporulazione.

Né si consiglia di coltivare Blastomyces dermatitidis, che è inibito dall'alta concentrazione del glucosio attuale.

D'altra parte, alcune considerazioni devono essere tenute a mente.

Alcuni funghi si sviluppano meglio a temperatura ambiente, come gli stampi, altri si sviluppano con successo a 37 ° C, come alcuni lieviti, e altri possono svilupparsi a entrambe le temperature (funghi dimorfici).

Pertanto, a volte è necessario.

Per esempio, Sporothrix Schenckii Viene seminato su due piastre; Uno è incuba a temperatura ambiente per ottenere la fase dello stampo e l'altro è incubato a 37 ° C per ottenere la fase uppaduriforme, ma in quest'ultimo è necessario aggiungere il 5% di sangue all'ambiente.

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In altri casi, come nei campioni di mito, vengono seminate due piastre di agar sabouraud, una con cloramfenicolo e un'altra con cicloesimide. Il primo consentirà la crescita degli agenti causali del mito di origine mitica (eumicetoma) e dei secondi agenti causali di memetomi di origine batterica, come gli actinomicetomi.

Sporulazione

L'agar di destrosio sabourauud modificato da Emmons contiene 2 gr di destrosio e non solo serve per l'isolamento, ma anche per la sporulazione e la conservazione dei funghi.

In questo mezzo se riesci a recuperare i ceppi da Blastomyces dermatitidis.

Conservazione

Per conservare le colture di funghi possono essere conservati in frigo (2-8 ° C). Il tempo di conservazione può variare tra 2 e 8 settimane. Dopo questo tempo devono essere soggettivi per ripetere il processo.

Alcuni funghi rimangono migliori a temperatura ambiente, come Epidermophyton foccosum, Trichophyton Schoenleinnii, T. Violaceum E Microsporum Audounii.

Il mantenimento della tensione può essere esteso per evitare il pleomorfismo se il destrosio dell'agar viene completamente eliminato e se la quantità di agar all'ambiente è ridotta per evitare la secchezza.

Microcolture

Per l'identificazione di alcuni funghi filamentosi, è necessario eseguire microcolture usando Sabouraud Agar o altri mezzi speciali per osservare strutture di riproduzione sessuale e asessuata.

Nella micologia umana

È usato principalmente per la diagnosi di malattie fungine, in particolare quelle che colpiscono la pelle e i suoi annessi (capelli e unghie).

I campioni possono essere secrezioni, essudati, pelle, peli, unghie, espettorato, LC o urina. I patogeni comunemente isolati sono dermatofiti, funghi che causano micosi sottocutanea e sistemica.

Micologia degli animali

Gli animali sono spesso colpiti da infezioni fungine, quindi Sabouraud Agar è utile nella micologia degli animali come nell'umano.

Ad esempio, i dermatofiti possono colpire gli animali. Questo è il caso di Canis var distortum microsporum, che spesso infetta cani, gatti, cavalli, maiali e scimmie. Inoltre, Microsporum Gypseum Infetta cani, gatti e bovini.

Uccelli come polli, galli e polli sono colpiti da Microsporum gallinae.

Altri funghi, come Zymonema farciminosum, Sono anche causa di malattie negli animali, principalmente in cavalli, muli e asini, producendo un'importante infiammazione nei vasi linfatici.

Sporothrix Schenkii e Histoplasma capsulatum Colpiscono animali domestici e umani.

Micologia ambientale

Molti funghi patogeni o opportunistici possono concentrarsi in un determinato momento in un determinato ambiente, in particolare nelle sale operative e nelle unità di terapia intensiva (ICU) di cliniche e ospedali. Pertanto è necessario controllare lo stesso.

Altri spazi vulnerabili sono vecchie biblioteche ed edifici, che possono essere influenzati dalla concentrazione di funghi ambientali.

Negli studi ambientali, viene utilizzato l'agar di destrosio Sabouraud per l'isolamento dei funghi.

Micologia industriale

L'agar di sabouraud destrosio non può mancare per lo studio di funghi inquinanti nella produzione di cosmetici, cibo, bevande, pelle, tessuti, tra gli altri.

Micologia delle piante

Le piante soffrono anche di malattie dei funghi, che colpiscono diverse parti della pianta, che possono persino porre fine al raccolto, causando grandi perdite nell'agricoltura.

Riferimenti

1. Valtek Laboratory. (2009). Sabouraud Dextrose Agar con Cycloheximida. Disponibile su: Andinamedica.com.
2. Navarro o. (2013). Micologia veterinaria. National Agrarian University. Nicaragua.