Patata di destrosio, preparazione e uso

Lui Agar di patate a destrosio È un mezzo di coltura nutrizionale solido e non selettivo. In esso, le specie batteriche e fungine possono crescere, ma il suo uso è indicato soprattutto per l'isolamento di funghi e lieviti filamentosi. È anche noto come mezzo PDA dall'espressione nell'agar di destrosio di patate inglese.

È particolarmente utile per l'isolamento di funghi fitopatogeni, cioè quelli che colpiscono le verdure. Per seminare i campioni di verdure infette, possono essere utilizzati altri media come Sabouraud o Malt-agar, tuttavia per l'uso di routine, l'agar papa di destrosio è preferito per ottenere.

Aspergillus Niger e Sinemas nell'agar papa di destrosio. Fonte: Alextrevelian 006 a inglese Wikipedia [dominio pubblico]/Joselrojas [CC BY-SA 4.0 (https: // creativeCommons.Org/licenze/by-sa/4.0)]

Viene anche usato per il conteggio delle colonie fungine in campioni di cosmetici, prodotti farmaceutici e alcuni alimenti lattiero -caseari. È anche favorevole a seminare campioni di graffi della pelle alla ricerca di dermatofiti, che crescono molto bene in questo mezzo, sviluppando i loro pigmenti caratteristici.

Il papa di destrosio medio è un mezzo molto semplice e facile da preparare in laboratorio. Contiene, come suggerisce il nome, infusione di patate, destrosio e agar -agar. Inoltre, è possibile aggiungere sostanze inibitorie per evitare la crescita batterica e aumentare la selettività per le specie fungine.

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Base

L'agar papa di destrosio è un terreno di coltura che fornisce gli elementi nutrizionali necessari per lo sviluppo di funghi e lieviti filamentosi.

La combinazione di infusione di patate con glucosio fornisce la fonte di energia perfetta in modo che vi sia una crescita soddisfacente di funghi. Mentre Agar è colui che fornisce coerenza all'ambiente.

Il mezzo da solo non inibisce la crescita dei batteri, quindi è un mezzo non selettivo. Per fare ciò bisognoso selettivo l'aggregato di sostanze inibitorie come l'acido tartarico o gli antibiotici.

Preparazione

-Agar papa dextrosio fatto in casa (non commerciale)

Piatti di Petri

È preparato come segue:

In primo luogo, le patate vengono lavate molto bene rimuovendo la terra che possiedono. Sono tagliati a fette sottili con tutto e guscio. 200 gr di patate sono pesati e bolle in un litro di acqua distillata, per mezz'ora.

Il tempo è finito filtri o sforzarsi l'intera preparazione attraverso la garza.

Il liquido ottenuto è completato con acqua distillata fino a raggiungere un litro. L'infusione viene aggiunta 20 gr di agar -agar e 20 gr di destrosio, mescola bene e autoclava a 121 ° C, 15 libbre di pressione per 15 minuti.

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Lasciare raffreddare fino a 50 ° C e servire in piastre sterili di Petri. Le piastre preparate sono mantenute in frigorifero.

Cunei

Puoi anche preparare spicchi di patate a destrosio.

In questo caso, prima di sterilizzare nell'autoclave. Salva in un frigorifero.

Il mezzo è a un pH di 5.6 ± 0.2, tuttavia, alcuni laboratori aggiungono acido tartarico al 10% per abbassare il pH a 3,1 ± 0.1 con lo scopo di inibire la crescita batterica.

In questo stesso senso, altri laboratori preferiscono aggiungere antibiotici per farlo selettivo per la coltivazione dei funghi ed evitare lo sviluppo batterico.

-Preparazione commerciale dell'agar papa di destrosio

Pesare 39 gr di disidratato in commercio e dissolversi in un litro di acqua distillata. Lasciare per 5 minuti.

La miscela viene riscaldata mescolando frequentemente fino alla sua dissoluzione totale. Successivamente è sterilizzato in autoclave a 121 ° C per 15 minuti.

Puoi preparare piatti o zeppe. Procedere come descritto sopra.

Il pH è 5,6 ± 0,2. Se si desidera il pH di 3,1, 14 ml di acido tartarico sterarico devono essere aggiunti al 20% prima di servire nelle piastre.

Il colore del mezzo non preparato è beige e preparato è chiaro ambra con un aspetto leggermente nuvoloso o opalescente.

Applicazioni

Processo per la piantagione di campioni di piante in vaso di destrosio

-Per le foglie con macchie

Le foglie sono tagliate a pezzi.

In una nave da 50 cc con alcol al 50%, posizionare i pezzi delle foglie (pezzi colorati e sani), per disinfettare la superficie di 20-30 secondi. Lanciare alcol e aggiungere l'ipoclorito di sodio 20% per 40-50 secondi se sono foglie fine e aumentano il tempo a 80 secondi se è corteccia e tronchi.

Lancia l'ipoclorito di sodio e prendi i pezzi disinfettati con un morsetto sterile e posizionarli sulla superficie media (un massimo di 10 pezzi). Posizionare la data e incubare da 20 a 30 ° C.

-Per frutta e tuberi

Se il frutto è carnoso, apri il frutto colpito dal fungo e prende a pezzi con un bisturi sterile, sia dei malati che della parte sana e posizionarlo sulla superficie dell'agar.

Se il frutto è agrumi, come un limone o un'arancia, i suoi semi devono essere aperti e seminare.

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Quando la superficie della frutta è influenzata e si osserva il abbraccio, l'ideale è usare il metodo grattugiato sulla piastra; Questo consiste nel suonare lo spato con una spatola sterilizzata e raffreddata a forma di "L", quindi seminato in zigzag da 2 a 3 volte sull'agar.

-Per cereali

Disinfettano lo stesso descritto nelle foglie e successivamente posizionati sull'agar.

-Per rami e steli

Viene eseguita una lamica della corteccia e quindi vengono presi pezzi della parte sana e malata.

Le targhe piantate sono incubate in aerobiosi a 20-30 ° C per 72 ore.

Processo per piantare scale, capelli o chiodi sull'agar papa di destrosio

Il campione deve essere eseguito utilizzando un foglio di bisturi n. 11, per tagliare i capelli colpiti, la pelle o le scale per unghie alla ricerca di dermatofiti. Prima di prendere il campione, l'area con alcol al 70% deve essere disinfettata.

-Campione di pelle

Nelle lesioni della truffa il bordo della lesione deve essere raschiato, perché è più probabile trovare il fungo.

Nelle lesioni essudative il campione viene prelevato con tampone asciutta o bagnata. Seminare immediatamente sul papa destrosio o sabouraud agar. Evita i mezzi di trasporto.

Un altro metodo di prelievo del campione è attraverso la tecnica di Mariat e Ada Campos's Carpet Square. In questo caso, l'area interessata viene sfregata 5 volte con un pezzo di lana sterile per il suo raccolto successivo.

Il campione può essere posizionato direttamente nel terreno di coltura.

-Campione di capelli

A seconda della patologia, la parte interessata o l'inizio della radice possono essere tagliate. Posizionare il campione nel terreno di coltura.

-Campione di unghie

Possono essere raschiati o tagliare una parte specifica del chiodo interessato. Dipenderà dal tipo di lesione.

Taglia il campione in bit di 1 mm prima di seminare per aumentare la probabilità di contatto dei funghi con il terreno di coltura.

Procedura di identificazione

Le colonie ottenute nella piastra sono isolate in tubi contenenti.

Lo studio microscopico (osservazione delle strutture e le loro formazioni) può essere fatto mediante microcolture o osservazione diretta al microscopio tra foglio e lamella.

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Le colonie contano

Questo mezzo può anche essere usato per determinare il carico di funghi e lieviti presenti in campioni di piante, cibo, cosmetici o droghe. A tal fine, viene utilizzato l'agar integrato di patate con antibiotici, come: (clorofenicolo, clorotetraciclina o entrambi).

Versare 1 ml del campione - preferibilmente diluito - su una piastra di Petri sterile e vuota, quindi sciogliere una pistola di patate a destrosio e lasciarlo raffreddare a 45 ° C. Versare sopra la piastra di Petri e ruotare fino a omogeneizzare. Lasciare a riposo.

Incubare in aerobiosi a 20-25 ° C (stampi) o a 30-32 ° C (lieviti) per 5-7 giorni o più, a seconda del tipo di fungo richiesto e del tipo di campione. Possono essere utilizzate due piastre per incubare entrambi i gamme di temperatura.

Professore di colonie fungine in un campione di cibo. Agar di patate a destrosio integrato con antibiotici. Fonte: pxhere.com foto/777267

Manutenzione di sforzi di funghi

L'agar papa di destrosio può essere utilizzato per mantenere ceppi di funghi vitali per diversi anni.

Per questo, il fungo è coltivato in spicchi di patate di destrosio e una volta coltivato il fungo, è coperto di olio minerale. L'olio deve essere sterilizzato in autoclave per 45 minuti e avere una viscosità approssimativa di 300 a 330 Saybolt. L'olio deve superare da 1 a 2 cm la punta della cornice.

QA

Da ogni lotto preparato, 1 o 2 piastre devono essere prese e incubate a 25 ° C per 48 ore o 20 ° C per 96 ore. Un buon controllo della sterilità è quello in cui non si osserva lo sviluppo delle colonie.

Puoi anche utilizzare controlli noti o certificati come:

Saccharomyces cerevisiae ATCC 9763, Candida albicans ATCC 10231, Aspergillus brasiliensis ATCC 16404, Trichophyton mentagrophytes ATCC 9533. In tutti i casi è prevista una buona crescita.

Riferimenti

1. Britania Laboratories. Glycosado Pot. 2015. Disponibile su: Britaniab.com
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